Rapid e raffinato CD11b isolamento magnetico di primaria microglia con purezza migliorata e versatilità

Souvarish Sarkar; Emir Malovic; Brandon Plante; Gary Zenitsky; Huajun Jin; Vellareddy Anantharam; Arthi Kanthasamy; Anumantha G. Kanthasamy

doi:10.3791/55364

Articolo metodologico

Rapid e raffinato CD11b isolamento magnetico di primaria microglia con purezza migliorata e versatilità

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DOI:

10.3791/55364

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13 aprile 2017

Souvarish Sarkar^*¹ , Emir Malovic^*¹ , Brandon Plante¹ , Gary Zenitsky¹ , Huajun Jin¹ , Vellareddy Anantharam¹ , Arthi Kanthasamy¹ , Anumantha G. Kanthasamy¹

¹Biomedical Sciences & Iowa Center for Advanced Neurotoxicology, Iowa State University

^* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Qui, vi presentiamo un protocollo per isolare microglia da cuccioli di topo postnatale (giorno 1) per la sperimentazione in vitro. Questo metodo improvvisato di isolamento genera sia elevata resa e purezza, un vantaggio significativo rispetto ai metodi alternativi che consente un'ampia gamma sperimentazione ai fini di chiarire biologia microglia.

Abstract

Microglia sono i responder primari a insulti del sistema nervoso centrale; Tuttavia, molto resta sconosciuto circa il loro ruolo nella regolazione neuroinfiammazione. La microglia sono cellule mesodermiche che funzionano in modo simile ai macrofagi nel rilevamento stress infiammatorio. La classica (M1-type) ed alternativa (M2-type) attivazioni dei macrofagi sono stati anche esteso ad microglia nel tentativo di meglio comprendere l'interazione sottostante questi fenotipi hanno in condizioni neuroinfiammatori quali il Parkinson, morbo di Alzheimer e il morbo di Huntington. Nella sperimentazione vitro utilizzando microglia primaria offre risultati rapidi ed affidabili che possono essere estese per l'ambiente in vivo. Anche se questo è un chiaro vantaggio rispetto sperimentazione in vivo, isolando microglia mentre raggiungere adeguati rese di purezza ottimale è stata una sfida. I metodi più comuni attualmente in uso o soffrono di bassa recupero, bassa purezza, o di entrambi. Qui, abbiamo DEMstrare un perfezionamento del metodo di separazione magnetica senza colonne CD11b che realizza un recupero delle cellule elevata e una maggiore purezza in metà tempo. Proponiamo questo metodo ottimizzato come modello altamente utile di isolamento microgliali primario ai fini di studio neuroinflammation e neurodegenerazione.

Introduzione

Microglia sono macrofagi residenti Myb indipendenti di origine mesodermica che differenziano da c-kit + / CD45- progenitori nelle isole sanguigni del sacco vitellino ^{^1,} ² erythromyeloid. Una volta microglia embriologici hanno colonizzato il sistema nervoso centrale (CNS), la fase di transizione da un ameboide ad una forma ramificata ^3. Questi microglia adulti sono classificati come surveillant dal loro ramificazioni dinamiche sondare il parenchima cerebrale sano per i potenziali insulti ^4. Sebbene microglia contribuiscono solo a circa il 10% della popolazione ce....