Un dispositivo per realizzare la migrazione delle cellule / Wound Healing in una piastra a 96 pozzetti

Sommario

Qui, presentiamo un protocollo per eseguire un test di migrazione cellulare semi-high throughput su una piastra di coltura cellulare a 96 pozzetti. Questo protocollo è un metodo rapido, semplice ed economico per creare ferite scratch coerenti su un monostrato di cellule.

Abstract

La migrazione delle cellule / ferendo test è un metodo comunemente utilizzato per studiare la migrazione delle cellule e altri processi biologici, come l'angiogenesi e metastasi tumorali. In questo saggio, le cellule sono coltivate per formare un monostrato confluente e una ferita meccanica viene creato graffiando con un dispositivo. Allora il tasso di migrazione delle cellule verso la zona denudato può essere monitorato mediante imaging. Il nostro wounder meccanica 8 canali è progettato per affrontare la maggior parte dei problemi associati con il test migrazione cellulare. In primo luogo, la nostra wounder può essere facilmente sterilizzato in autoclave o con comuni disinfettanti. In secondo luogo, i singoli pin regolabili permettono anche contatto con la piastra di coltura cellulare in modo che possono essere creati ferite taglienti e riproducibili. In terzo luogo, le barre di guida su entrambi i lati del wounder assicurano posizione ferimento consistente in ciascun pozzetto. L'uso di puntali di plastica per il ferimento può fornire ulteriori migliore gestione del feritore e minimizzare le contaminationico. In conclusione, il nostro wounder cella può fornire ai ricercatori un dispositivo facile e riproducibile utente per l'esecuzione del test migrazione cellulare utilizzando la piastra standard coltura a 96 pozzetti.

Introduzione

La migrazione cellulare gioca un ruolo importante nei processi cellulari, come ad esempio l'embriogenesi, la neurogenesi, l'angiogenesi, la guarigione delle ferite, delle mucose riparazione, epiteliali-mesenchimali-transizioni in fase di sviluppo normale e la situazione della malattia ^1. Si tratta di un processo complicato, che richiede un coordinamento delle numerose manifestazioni inter- e intra-cellulari, compresi segnalazione interazioni molecola, la polarizzazione delle cellule, la riorganizzazione del citoscheletro, rimodellamento della matrice, protrusione della membrana e dinamica cellula-cellula adesione modulazione

Protocollo

1. Introduzione alle parti del feritore (Figura 1)

1. Preparare il supporto del perno fissando i perni ferimento a distanze uguali. Tenere i puntali e regolare l'altezza della punta spostando i perni ferimento regolabili su e giù.
2. Montare la guida barra regolabile su diverse marche di piastre di coltura a 96 pozzetti e assicurarsi che l'area ferimento è in una posizione fissa.
3. Fissare il perno ferimento regolabile stringendo la vite esagonale. Fissare la guida bar in posizione stringendo i tappi a testa esagonale incassata su entrambe le estremità.

2. Impostare la larghezza del supporto del perno (F....

Risultati

Questo wounder meccanico 8 canali è costruito graffiare un monostrato di cellule al fine di eseguire il saggio migrazione cellulare. Si tratta di un dispositivo di facile utilizzo in grado di svolgere cellulari graffiare test in piastre da 96 pozzetti in meno di un minuto senza formazione specifica. Questo wounder può introdurre aree avvolte su monostrati di cellule con una larghezza uniforme di circa 600 micron e con spigoli vivi (figure 5 e 6). La larg.......

Discussione

Il nostro feritore cella ha diverse caratteristiche uniche nel risolvere i problemi dei test di migrazione delle cellule tradizionali. Il feritore cellule meccanico a 8 canali è realizzato in acciaio inox di alta qualità (acciaio 304) con una lunga durata di vita che può essere sterilizzato in autoclave. Quasi tutti marchi commerciali di piastre di coltura a 96 pozzetti disponibili sul mercato possono essere utilizzati con questo wounder cellule meccanica causa della barra guida regolabile. Il disegno della barra guida .......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Piastra per colture cellulari a 96 pozzetti	Nunc	167008	Possono essere utilizzate anche altre marche di piastre per colture cellulari a 96 pozzetti
Punte per pipette P10	Axygen	301-03-051	La punta corta per pipette P10 è più facile da creare una ferita chiara
Wounder	R& P Technology Limited
Medium 199	Sigma	M2520-1L	Per la coltura cellulare di cellule endoteliali della vena ombelicale umana. Utilizzare un terreno di coltura appropriato e condizionare per altri tipi di cellule.
Siero fetale bovino	Gibco	26140079	Per la coltura cellulare di cellule endoteliali della vena ombelicale umana. Utilizzare un terreno di coltura appropriato e condizionare per altri tipi di cellule.
Penicillina/Streptomicina	Gibco	15140122	Per la coltura cellulare di cellule endoteliali della vena ombelicale umana. Utilizzare un terreno di coltura appropriato e condizionare per altri tipi di cellule.
Sale sodico di eparina dalla mucosa intestinale suina	Sigma	H3393	Per la coltura cellulare di cellule endoteliali della vena ombelicale umana. Utilizzare un terreno di coltura appropriato e condizionare per altri tipi di cellule.
Gelatina da pelle bovina	Sigma	G9391	Per la coltura cellulare di cellule endoteliali della vena ombelicale umana. Utilizzare un terreno di coltura appropriato e condizionare per altri tipi di cellule.