In Vitro Imaging e quantificazione della Drug Targeting efficienza di fluorescente GnRH analoghi

József Murányi; Attila Varga; Bianka Gurbi; Pál Gyulavári; Gábor Mező; Tibor Vántus

doi:10.3791/55529

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Articolo metodologico

In Vitro Imaging e quantificazione della Drug Targeting efficienza di fluorescente GnRH analoghi

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DOI:

10.3791/55529

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21 marzo 2017

József Murányi¹^,² , Attila Varga¹ , Bianka Gurbi¹ , Pál Gyulavári¹ , Gábor Mező³ , Tibor Vántus²

¹MTA-SE Pathobiochemistry Research Group, Semmelweis University, ²Department of Medical Chemistry, Molecular Biology and Pathobiochemistry, Semmelweis University, ³MTA-ELTE Research Group of Peptide Chemistry, Eötvös Loránd University

In questo articolo

Sommario

Selettivamente l'etichetta fluorescente GnRH-I, -II e -III derivati sono strumenti affidabili per il monitoraggio e la quantificazione loro assorbimento cellulare. Questo manoscritto introduce esperimenti di visualizzare, quantificare e confrontare l'efficienza di assorbimento di questi coniugati GnRH in diverse linee cellulari.

Abstract

analoghi del GnRH sono efficaci frazioni di targeting e in grado di fornire agenti antitumorali selettivamente nelle cellule tumorali maligne che i recettori del GnRH altamente espresso. Tuttavia, l'analisi quantitativa di assorbimento cellulare GnRH analoghi 'ei tipi di cellule indagati in sistemi di drug delivery GnRH-based sono attualmente limitati. In precedenza introdotto, fluorescente selettivamente etichettato GnRH I, -II e -III derivati fornire grande rilevabilità, e hanno gli immobili chimici per esperimenti riproducibili e robusti. Abbiamo anche trovato che i metodi appropriati up-to-date con questi analoghi del GnRH etichettati potrebbero offrire nuove informazioni sui sistemi di somministrazione dei farmaci a base di GnRH. Questo manoscritto introduce alcuni esperimenti semplici e veloci per quanto riguarda l'assorbimento cellulare di [D-Lys ⁶ (FITC)] - GnRH-I, [D-Lys ⁶ (FITC)] - GnRH-II e [Lys ⁸ (CIC)] - GnRH -III sulla EBC-1 (polmone), la BxPC-3 (pancreas) e sul Detroit-562- (faringe) maligno tumor cellule. Parallelamente a queste coniugati GnRH-FITC, il livello della superficie cellulare dei recettori GnRH-I è stato esaminato anche su queste linee cellulari, prima e dopo il trattamento GnRH dal microscopio confocale a scansione laser. L'assorbimento cellulare di coniugati GnRH-FITC è stato quantificato con la fluorescenza-attivato l'ordinamento delle cellule. In questi esperimenti è stata osservata piccole differenze tra analoghi del GnRH e le principali differenze tra i tipi di cellule. Le differenze significative tra le linee cellulari sono correlati con il loro livello distinto di recettori di superficie delle cellule GnRH-I. Gli esperimenti introdotti contengono metodi pratici per visualizzare, quantificare e confrontare l'efficienza di assorbimento di coniugati GnRH-FITC in un tempo e modo dipendente dalla concentrazione su varie colture cellulari aderenti. Questi risultati potrebbero prevedere il drug targeting efficienza dei coniugati GnRH sulla data coltura cellulare, e di offrire una buona base per ulteriori esperimenti in esame dei sistemi di somministrazione dei farmaci a base di GnRH.

Introduzione

Sistemi di drug delivery mirati a base di peptidi sono diventati un rapido sviluppo e la zona promettente nella terapia del cancro negli ultimi anni ^{^1,} ^2. Gonadotropina umana di tipo rilasciando recettore dell'ormone I (GnRH-IR) si trova principalmente nella ghiandola pituitaria, ma è presente anche in molti altri tessuti che sono responsabili per l'auto-riproduzione ^3. GnRH-IR si esprime anche in un certo numero di tessuti tumorali, collegate o indipendenti per il sistema riproduttivo ^{^4,} ^5. L'elevata espressi....