Riassorbimento degli acidi biliari nell'intestino tenue-dipendente e feedback inibizione della sintesi dell'acido di bile epatica è importante per la salute e l'omeostasi sistemica. In questo studio, descriviamo un modello murino per resezione ileale valutare il malassorbimento indotta da ileectomy bile, overaccumulation e tossicità nell'intestino del mouse.
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Articolo metodologico
Overaccumulation ileectomy-indotta della Bile nell'intestino del Mouse
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
La resezione intestinale è un comune approccio terapeutico per le malattie umane quali l'obesità, le malattie infiammatorie intestinali, morbo di Crohn e tumore del colon che si traduce spesso in effetti avversi di intestino corto grave sindrome-come compreso diarrea degli acidi biliari, disidratazione, alterazioni elettrolitiche e malassorbimento dei nutrienti. Qui vi presentiamo un modello murino di resezione ileale, chiamato ileectomy, per valutare la comunicazione del tessuto e il mantenimento dell'omeostasi sistemica. Dopo resezione ileale, sangue circolante è permanentemente priva il fattore di crescita del fibroblasto ileo-specifico ormone endocrino 15 (FGF15), che rilascia la sua endocrine inibizione della sintesi degli acidi biliari nel fegato. In combinazione con l'aumento della produzione e abolita riassorbimento degli acidi biliari dopo aver rimosso l'ileo, topi che ha subito l'ambulatorio soffrono overaccumulation sale biliare nell'intestino e la diarrea associata, la morbosità e la mortalità. Romanzo l'utilizzo del modello chirurgia introdotto in questo studio può fornire le comprensioni meccanicistiche e funzionale nel controllo ileale di regolazione metabolica sistemica nella fisiologia e nella malattia.
Introduzione
Nella moderna ricerca biomedica, modelli animali geneticamente manipolati sono ampiamente utilizzati per raccogliere intuizioni in malattie umane. In particolare, tessuto o cellula-specifico funzioni di guadagno e perdita di geni sono state utilizzate per studiare la regolazione molecolare così come gli effetti biologici indotti. Nonostante i progressi nel manipolare geni bersaglio in vivo, non ci sono limitazioni persistente. Primo, molte delle cellule o del tessuto specifiche delezioni interesserà gli organi multipli. Ad esempio, omissione del gene epiteliali eliminerà espressione negli epiteli dei tessuti multipli. Ulteriormente, anche se l'eliminazione è ....
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Protocollo
protocollo animale è stato esaminato e approvato dal comitato di uso presso Case Western Reserve University School of Medicine e istituzionali Animal Care ed è stato condotto in conformità con la guida del National Institutes of Health (NIH) per la Cura e l'uso degli animali da laboratorio (8 ° edizione, 2011). Topi sono stati eutanasizzati dai metodi compatibile con l'associazione medica veterinaria americana (AVMA) linee guida per l'eutanasia degli animali (edizione 2013). C57BL/6J, Maschio, 8-16 settimana vecchi topi sono stati usati in questo protocollo. Topi sono stati alloggiati in un ambiente buio/luce ciclo di 12 h.
1. preparazione ....
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Risultati
Le procedure per ileectomy sono illustrate nella Figura 1. Il primo passo include preparazione pelle addominale del topo, facendo un'incisione addominale e l'utilizzo di Divaricatori per esporre completamente l'intestino (Figura 1A-C). Successivamente, si trovava l'intestino cieco del mouse (Figura 1D); dato che la sua forma e dimensione lo rendono un punto di riferi.......
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Discussione
Al fine di eseguire un ileectomy successo, arteria mesenterica superiore deve essere legato in anticipo per bloccare l'afflusso di sangue al segmento resecting. Il segmento ileale ischemico diventerà viola scuro dopo la legatura. Il segmento ileale quindi dovrà essere completamente resecato. Un rifornimento di anima normale deve essere garantito per le estremità mantenute. Questo è essenziale per evitare la rimozione impropria e sanguinamento, che può facilmente causare errori chirurgici a causa di necrosi ischemica dopo.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Questa ricerca è sostenuta dalla Fondazione di Tom Peterson e NIH concedere R01-HL119780 (Jain, MK).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Microscopio di dissezione | Olympus | SZ61 | Per chirurgia |
| Controllore di temperatura per animali | Physitemp Instruments, Inc. | TCAT-2LV | Per il controllo della temperatura corporea |
| Vaporizzatore per anestesia isoflurano | VetEquip | 911104 | Per anestesia |
| Pinze per dissezione | Strumenti di scienza fine, Inc. | 11274-20 | Per la chirurgia |
| Forbici | Strumenti di scienza fine, Inc. | 14084-08 | Per la chirurgia |
| Porta aghi | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-7882 | Per la chirurgia |
| Micro coltelli-lama dell'ago | Fisher Scientific | 10318-14 | Per chirurgia |
| Sutura monofilamento 6-0 | Ethicon | 1698G | Per la chiusura della pelle addominale |
| Sutura seta 7-0 | Ethicon | 766G | Per legatura |
| Sutura monofilamento 8-0 | Ethicon | 1714G | Per anastomosi |
| Spugne chirurgiche | Dynarex Corp. | 3333 | Per la chirurgia |
| Piccoli applicatori con punta in cotone | Fisher Scientific | 23-400-118 | Per la chirurgia |
| Isoflurano | Piramal Healthcare Limited | 66794-013-25 | Per l'anestesia |
| Buprenorfina cloridrato | Reckitt-Benckiser Pharmaceuticals | 12496-0757-1 | Per l'analgesia |
| 0,9% cloruro di sodio Iniezione | B. Braun Medical Inc. | 0264-7800-10 | Per lavaggio/iniezione |
| Soluzione di preparazione di iodio povidone | Dynarex Corp. | 1413 | Per la preparazione della pelle |
| Puralube unguento veterinario | Dechra Prodotti veterinari | 17033-211-38 | Per la protezione degli occhi |
| Lozione depilatoria | Chiesa & Dwight Co., Inc. | Per la preparazione della pelle | |
| Unità di terapia intensiva | ThermoCare | FW-1 | Per il recupero post-operatorio |
| Recupero DietGel | ClearH2O | 72-06-5022 | Per il recupero post-operatorio |
| Kit di tessuto grasso e fibroso a RNA totale Aurum | Bio-Rad | 7326830 Per l'isolamento | dell'RNA |
| Supermix a trascrizione inversa iScript per RT-qPCR | Bio-Rad | 1708841 | Per test di trascrizione inversa |
| TaqMan master mix avanzato veloce | Applied Biosystems/Life Technologies | 4444965 | Per l'analisi QPCR |
| Kit di dosaggio degli acidi biliari totali | Genzyme | Diagnostic DZ042A-K01 | Per il test degli acidi biliari |
| C57BL/6J | Il laboratorio |
Riferimenti
- McLeod, R. S. Surgery for inflammatory bowel diseases. Dig Dis. 21, 168-179 (2003).
- Hancock, L., Windsor, A. C., Mortensen, N. J. Inflammatory bowel disease: the view of the surgeon. Colorectal Dis. 8, 10-14 (2006).
- Polle, S. W., Bemelman, W. A.
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Ristampe e permessi
