Isolamento delle cellule della ganglioma della retina primaria (RGC) mediante citometria a flusso

Sumana R. Chintalapudi; Need N. Patel; Zachary K. Goldsmith; Levon Djenderedjian; Xiang Di Wang; Tony N. Marion; Monica M. Jablonski; Vanessa M. Morales-Tirado

doi:10.3791/55785

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Articolo metodologico

Isolamento delle cellule della ganglioma della retina primaria (RGC) mediante citometria a flusso

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DOI:

10.3791/55785

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5 luglio 2017

Sumana R. Chintalapudi¹ , Need N. Patel¹ , Zachary K. Goldsmith¹ , Levon Djenderedjian¹ , Xiang Di Wang¹ , Tony N. Marion² , Monica M. Jablonski¹^,³^,⁴ , Vanessa M. Morales-Tirado¹^,²

¹Department of Ophthalmology, Hamilton Eye Institute, University of Tennessee Health Science Center, ²Department of Microbiology, Immunology and Biochemistry, University of Tennessee Health Science Center, ³Department of Anatomy and Neurobiology, University of Tennessee Health Science Center, ⁴Department of Pharmaceutical Sciences, University of Tennessee Health Science Center

In questo articolo

Sommario

Milioni di persone soffrono di malattie degenerative della retina che provocano cecità irreversibile. Un elemento comune di molte di queste malattie è la perdita delle cellule del ganglio retinico (RGC). Questo protocollo dettagliato descrive l'isolamento di RGC murine primari mediante selezione positiva e negativa con citometria a flusso.

Abstract

Le malattie neurodegenerative spesso hanno un impatto devastante su coloro che sono colpiti. La perdita di cellule della ganglioma retinica (RGC) è implicata in una serie di malattie, tra cui la retinopatia diabetica e il glaucoma, oltre al normale invecchiamento. Nonostante la loro importanza, i RGCs sono stati estremamente difficili da studiare finora, in parte a causa del fatto che essi comprendono solo una piccola percentuale della grande varietà di cellule della retina. Inoltre, i metodi di isolamento attuali utilizzano marcatori intracellulari per identificare RGC, che producono cellule non vitali. Queste tecniche coinvolgono anche lunghi protocolli di isolamento, per cui esiste una mancanza di metodi pratici, standardizzati e affidabili per ottenere e isolare i RGC. Questo lavoro descrive un metodo efficiente, completo e affidabile per isolare i RGC primari dalla retina dei topi usando un protocollo basato sui criteri di selezione sia positivi che negativi. I metodi presentati consentono il futuro studio dei RGC, con l'obiettivo di una migliore comprensione dei principaliDiminuzione dell'acuità visiva che risulta dalla perdita di RGC funzionali nelle malattie neurodegenerative.

Introduzione

I RGC sono terminali differenziati dai neuroni e pertanto sono necessarie le cellule primarie per la sperimentazione. Lo sviluppo di un protocollo per l'isolamento e l'arricchimento delle cellule primarie di ghiandole retiniche murine (RGCs) è fondamentale per rivelare i meccanismi di salute e degenerazione di RGC in vitro . Ciò è particolarmente importante per studi che cercano di generare potenziali terapie per promuovere la funzione RGC e per ridurre al minimo la loro morte. La degenerazione dei RGC è associata a malattie degenerative della retina, come il glaucoma, la retinopatia diabetica e l'invecchiamento normale. Anche se i meccanismi cel....