Un uso novello di tridimensionale ad alta frequenza l'ecografia per la caratterizzazione di gravidanza precoce nel topo

Sommario

Topi sono ampiamente usati per studiare biologia gestazionale. Tuttavia, interruzione della gravidanza è richiesto per tali studi che preclude le indagini longitudinali e richiede l'uso di un gran numero di animali. Di conseguenza, descriviamo una tecnica non-invasiva dell'ecografia ad alta frequenza per la diagnosi precoce e il monitoraggio di eventi post-impianto nel topo incinta.

Abstract

L'ecografia ad alta frequenza (HFUS) è un metodo comune per modo non invasivo monitorare lo sviluppo in tempo reale del feto umano nell'utero. Il mouse è usato ordinariamente come un modello in vivo per studiare l'impianto dell'embrione e la progressione di gravidanza. Purtroppo, tali studi murini richiedono l'interruzione di gravidanza per consentire l'analisi fenotipica follow-up. Per risolvere questo problema, abbiamo usato la ricostruzione tridimensionale (3D) di HFUS imaging dati per individuazione tempestiva e la caratterizzazione di siti di impianto dell'embrione murino e loro progressione inerente allo sviluppo individuale in utero. Combinazione di modellazione e imaging HFUS con ricostruzione 3D, siamo riusciti a accuratamente quantificare il numero di sito di impianto dell'embrione, nonché monitorare la progressione dello sviluppo nei topi di C57BL6J/129S incinto da 5,5 giorni post coito (t.u.) attraverso al t.u. 9,5 con l'utilizzo di un trasduttore. Misure incluse: numero, posizione e volume dei siti di impianto, nonché la spaziatura sito Inter-impianto; vitalità dell'embrione è stata valutata controllando l'attività cardiaca. Nell'immediato periodo post-impianto (t.u. 5.5-8.5), ricostruzione 3D dell'utero gravido in maglia e solida sovrapposizione formato abilitato rappresentazione visiva delle gravidanze in via di sviluppo all'interno di ogni corno uterino. Come topi geneticamente ingegnerizzati continuano a essere utilizzato per caratterizzare i fenotipi riproduttivi femminili derivati da disfunzione uterina, questo metodo offre un nuovo approccio per individuare, quantificare e caratterizzare l'impianto eventi anticipato in vivo. Questo uso novello di imaging 3D HFUS dimostra la capacità di rilevare, visualizzare e caratterizzare i siti di impianto dell'embrione durante la gravidanza iniziale murina in maniera non invasiva con successo. La tecnologia offre un miglioramento significativo rispetto ai metodi attuali, che si basano sull'interruzione delle gravidanze per tessuto lordo e caratterizzazione istopatologica. Qui usiamo un formato video e testo per descrivere come eseguire correttamente gli ultrasuoni della gravidanza iniziale murino per generare dati affidabili e riproducibili con ricostruzione della forma uterina in immagini 3D solidi e mesh.

Introduzione

Perdita ricorrente di gravidanza precoce è una delle complicazioni più comuni dopo il concepimento e colpisce circa l'1% delle coppie che cercano di concepire^1,2. I meccanismi di perdita iniziale di gravidanza sono molteplici: da anomalie embrionali intrinseche e comorbidità materna a difetti nella recettività endometriale^1,3,4. A causa della loro genetica trattabilità, modelli murini sono stati ampiamente utilizzati per indagini di annidamento dell'embrione precoce e gravidanza. Inoltre, il breve tempo gestazionale d....

Protocollo

questi studi sono stati condotti in conformità con la guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio pubblicato da National Institutes of Health e la animale protocolli approvati dal istituzionale Animal Care e uso Committee (IACUC) di Baylor College of Medicine sotto protocollo numero AN-4203.

1. preparazione del Mouse incinta per ultrasuoni

inizio durante la notte di

1. tempo accoppiamento
   1. posto la diga con una comprovata maschio fertile del mouse dopo il 1700. Separare dam e uomo di 0700 ore (h), a prescindere se plug vaginale è presente, per garantire la datazione esatta della gravidanza.
      N....

Risultati

Come illustrato nella Figura 1, l'ultrasuono ad alta frequenza può rilevare l'impianto sito sviluppo comincia più presto il punto di tempo d.p.c 5,5. Utilizzando il più leggero hyperechoic endometrio proteina come indicatore di siti di impianto a 6,5 d.p.c permette il numero dei siti di impianto e la spaziatura di questi siti per essere quantificati. Come la gravidanza progredisce fino a 7,5 t.u., una più scura hypoechoic sac gestational e palo fetale è anche.......

Discussione

Questo uso novello di imaging 3D HFUS dimostra la capacità di rilevare, visualizzare e caratterizzare i siti di impianto dell'embrione durante la gravidanza iniziale murina in maniera non invasiva con successo. La tecnologia offre un miglioramento significativo rispetto ai metodi attuali, che si basano sull'interruzione delle gravidanze per tessuto lordo e caratterizzazione istopatologica. Tuttavia si deve osservare che i metodi istologici ancora sarebbero stati considerati più ottimale quando è richiesta la caratterizza.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Piattaforma di imaging a ultrasuoni VisualSonics Vevo 2100/Macchina	VisualSonics, inc.	VS-11945
Stazione di imaging Vevo	VisualSonics, inc.	SA-11982
Aquasonic 100 Gel per trasmissione ad ultrasuoni	Parker	#SKU PLI 01-08
Isoflurano (IsoThesia) Flacone da 100 ml	Henry Shein	#29404
PuraLubenAnimal Unguento oftalmico	Dechra	#12920060