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Articolo metodologico

Nuova applicazione di un getto di Plasma di pressione atmosferica come un agente di Neuro-protettivo contro la lesione indotta da privazione di glucosio delle cellule SH-SY5Y

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DOI:

10.3791/56323

9 ottobre 2017

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Un protocollo per l'applicazione di neuroprotective del trattamento al plasma a pressione atmosferica della basso-dose sulle lesioni di SH-SY5Y indotta da privazione del glucosio.

Abstract

Il getto di plasma di pressione atmosferica (APPJ) ha attirato l'attenzione di molti ricercatori di diverse discipline negli ultimi anni, perché le sue emissioni includono più tipi di specie reattive dell'azoto (RNS) e specie reattive dell'ossigeno (ROS). Il nostro studio precedente ha mostrato l'effetto cytoprotective di APPJ contro le lesioni indotte da stress ossidativa. L'obiettivo del presente studio è quello di fornire un protocollo di trattamento dettagliato in vitro per quanto riguarda le applicazioni di neuroprotective di elio APPJs sulla lesione indotta da privazione di glucosio nelle cellule SH-SY5Y. La linea di cellulari derivate di neuroblastoma umano SH-SY5Y è stata mantenuta in RPMI 1640 supplementato con 15% di siero fetale di vitello. Il terreno di coltura è stato quindi modificato RPMI 1640 senza glucosio prima del trattamento APPJ. Dopo un'incubazione di 1 h in un'incubatrice cellulare, attuabilità delle cellule è stata determinata utilizzando cella contando Kit 8. I risultati hanno mostrato che, rispetto al gruppo di privazione del glucosio, cellule trattate con APPJ esposto attuabilità delle cellule significativamente aumentata in modo dose-dipendente, con 8 s/bene osservata come una dose ottimale. Nel frattempo, flusso di elio non ha avuto effetto sul danno cellulare indotta da privazione del glucosio. I nostri risultati hanno indicato che APPJ potrebbero essere utilizzati come un metodo di trattamento per le malattie del sistema nervoso centrale legate alla privazione del glucosio. Questo protocollo potrebbe anche essere usato come applicazione cytoprotective per altre cellule con differenti disabilità, ma la coltura cellulare e condizioni di trattamento APPJ dovrebbero essere regolate, e la dose di trattamento deve essere relativamente bassa.

Introduzione

Il cervello adulto usa quasi esclusivamente il glucosio come substrato per il metabolismo energetico in condizioni fisiologiche normali. Il cervello umano costituisce solo il 2% del peso corporeo ma consuma circa il 25% del glucosio totale all'interno del corpo1. È ben documentato che disfunzione del metabolismo del glucosio è uno dei principali cambiamenti patologici durante il colpo ischemico e varie malattie neurodegenerative, tra cui il morbo di Alzheimer (annuncio), malattia di Huntington (HD) e malattia di Parkinson (MDP) 2,3. La mancanza di glucosio e l'assorbimento del glucosio ....

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Protocollo

1. preparazione del dispositivo APPJ

Attenzione: si prega di consultare tutte le schede di dati di sicurezza (MSDS) prima dell'uso. Si prega di utilizzare pratiche adeguate di sicurezza durante l'esecuzione di tutti gli esperimenti, compreso l'uso di una cappa aspirante e dispositivi di protezione individuale (occhiali protettivi, guanti protettivi, camice da laboratorio, ecc.). Il protocollo richiede cella standard gestione tecniche (sterilizzazione, recupero delle cellule, cellule passaggio, congelamento delle cellule, macchiatura delle cellule, ecc.).

  1. Scegliere un tubo di quarzo con un diametro interno di 1 ....

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Risultati

I dati sono espressi come media ± SD di almeno tre esperimenti indipendenti. Risultati del gruppo sono stati analizzati per varianza mediante ANOVA. Tutte le analisi sono state eseguite utilizzando software di analisi statistica prisma e p < 0.05 era la soglia di significatività statistica.

La vitalità cellulare è stata misurata dopo 4 h di incubazione CCK-8. Come mostrato nella Figura 3, la privazione del glucosio ridotto la vitalità delle cellule SH-SY5Y a 44.......

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Discussione

SH-SY5Y cellule sono una linea di cellule umane di neuroblastoma-derivato e sono ampiamente usate come un modello di cella appropriata per studi in vitro sulla neurotossicità o neuroprotezione12. La linea di cellule SH-SY5Y era sensibile alle condizioni di privazione del glucosio. Attuabilità delle cellule è diminuito di quasi il 50% dopo privazione del glucosio 1 h, che è la condizione di vitalità cellulare ottimale per gli studi di farmacodinamica. Inoltre, CCK-8 reagente non ha nessuna.......

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Dichiarazioni

Senza conflitti di interesse sono stati dichiarati in relazione a questa carta.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato sostenuto dal fondo per l'innovazione di Pechino neurochirurgica Istituto (2014-11), Fondazione nazionale di scienze naturali della Cina (nn. 11475019 e 81271286) e Beijing Natural Science Foundation (No. 7152027).

....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Linea cellulare SH-SY5YCina Centro per la raccolta di colture di tipo3111C0001CCC000026
RPMI 1640 mediumThermo Scientific21875091conservato a 4 ° C
RPMI 1640 medio senza glucosioThermo Scientific11879020conservato a 4 gradi C
siero fetale di vitelloThermo Scientific16000044conservato a -20 °
C tripsina-EDTAsoluzione SolarbioT1300conservato a 4 gradi C
96 pozzetti piastracorning3599
Cell Counting Kit-8 (CCK-8)Dojindo LaboratoriesCK04conservato a 4 ° C
lettore di micropiastreTecanM200 Proper la misura dell'assorbanza a 450 nm
Amplificatore di potenza ad alta tensioneTrekPD06087per amplificare la
potenza Funzione Generatore di segnaleMaZe Electronics Science& La tecnologiaAT30120per fornire il segnale specifico
Alto – Sonda di tensioneTektronixP6015Aper il rilevamento
dell'oscilloscopio digitaleTektronixDPO4104Bper la visualizzazione del segnale
ad alta tensione

Riferimenti

  1. Yang, S. H., et al. Alternative mitochondrial electron transfer for the treatment of neurodegenerative diseases and cancers: Methylene blue connects the dots. Prog. Neurobiol. , (2015).
  2. Bhat, A. H., et al.

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Ristampe e permessi

Tag

Saggio di vitalità cellulareCell Counting Kit 8portata dell'elioamplificatore ad alta tensionetrattamento neuroprotettivoapplicazione della medicina al plasmaprotocollo in vitro