Induzione e Micro-CT Imaging delle malformazioni cavernose cerebrali nel modello del topo

Jaesung P. Choi; Xi Yang; Matthew Foley; Xian Wang; Xiangjian Zheng

doi:10.3791/56476

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Articolo metodologico

Induzione e Micro-CT Imaging delle malformazioni cavernose cerebrali nel modello del topo

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DOI:

10.3791/56476

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4 settembre 2017

Jaesung P. Choi¹^,² , Xi Yang³ , Matthew Foley⁴ , Xian Wang¹ , Xiangjian Zheng¹^,²^,³

¹Lab of Cardiovascular Signaling, Centenary Institute, ²Faculty of Medicine, Sydney Medical School, University of Sydney, ³Department of Pharmacology, School of Basic Medical Sciences, Tianjin Medical University, ⁴Australian Centre for Microscopy & Microanalysis, University of Sydney

In questo articolo

Sommario

Questo protocollo dimostra l'induzione della malattia di malformazione cavernosa cerebrale in un modello murino e usi contrasto migliorato micro tomografia computerizzata per misurare il carico lesionale. Questo metodo aumenta il valore di modelli murini stabilito per lo studio delle basi molecolari e le terapie potenziali per malformazione cavernosa cerebrale e altre malattie cerebrovascolari.

Abstract

Mutazioni nella CCM1 (aka KRIT1), CCM2, o CCM3 (aka PDCD10) gene causano malformazione cavernosa cerebrale (CCM) in esseri umani. Modelli murini di malattia CCM sono stati stabiliti da tamoxifene indotto da delezione dei geni Ccm in animali postnatali. Questi modelli di mouse forniscono preziosi strumenti per studiare il meccanismo molecolare e approcci terapeutici per la malattia CCM. Un metodo preciso e quantitativo per valutare la progressione e carico lesionale è essenziale per sfruttare il valore completo di questi modelli animali. Qui, dimostriamo l'induzione di malattia in un modello murino di CCM e l'uso del contrasto migliorato il metodo di (micro-CT) micro tomografia computerizzata a raggi x per misura CCM carico lesionale in cervelli di topo. Al giorno postnatale 1 (P1), abbiamo usato 4-hydroxytamoxifen (4HT) per attivare Cre ricombinasi attività dal transgene fendere floxed allele del Ccm2Cdh5-CreErt2. Le lesioni CCM in cervelli di topo sono state analizzate P8. Per micro-CT, soluzione di Lugol iodio basato è stato usato per migliorare il contrasto nel tessuto cerebrale. Abbiamo ottimizzato i parametri di scansione e utilizzate una dimensione del voxel di 9,5 µm, che conducono a una dimensione minima caratteristica di circa 25 µm. Questa risoluzione è sufficiente per misurare il numero e volume della lesione CCM a livello globale e con precisione e fornire alta qualità 3D mapping delle lesioni CCM in cervelli di topo. Questo metodo migliora il valore dei modelli del mouse stabilite per studiare le basi molecolari e le terapie potenziali per CCM e altre malattie cerebrovascolari.

Introduzione

CCM sono con pareti sottili, dilatata malformazioni vascolari del cervello con prevalenza fino a 0,5% nella popolazione umana¹. CCM può essere ereditato come un disordine dominante dovuta a mutazioni di perdita-de-funzione in uno dei tre geni: CCM1 (aka Krit1), CCM2e CCM3 (chiamato anche PDCD10)²^,³^,⁴ ^,⁵^,⁶. Questi geni sono presenti in un unico complesso di segnalazione.

Vari modelli sono stati sviluppati per ma....