Questo articolo viene illustrato un modello murino per studiare lo sviluppo dell'iperplasia miointimale (MH) dopo la ferita aortica dell'aerostato.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Basato su palloncino ferita per indurre iperplasia Myointimal nell'Aorta addominale di Mouse
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'uso di modelli animali è essenziale per una migliore comprensione della MH, una delle principale cause di stenosi arteriosa. In questo articolo, dimostriamo un modello di decumulazione palloncino murino, che è paragonabile con modelli di lesione del vaso stabilito in animali di grandi dimensioni. Il modello di decumulazione aorta con cateteri a palloncino imita la regolazione clinica e conduce ai cambiamenti fisiologici e pathobiological comparabili. Brevemente, dopo aver eseguito un'incisione orizzontale in aorta centrifugalis, un catetere a palloncino verrà inserito nel vaso, gonfiato e presentare retrogradely. Gonfiaggio del palloncino porterà a biancheria intima ferita e overdistension della nave. Dopo rimozione del catetere, l'incisione aortica sarà chiuso con singoli pinzature. Il modello mostrato in questo articolo è riproducibile, facile da eseguire e può essere stabilita in modo rapido e affidabile. È particolarmente adatto per la valutazione di agenti terapeutici sperimentali costosi, che possono essere applicati in modo economico. Utilizzando diversi ceppi di topo knockout, può essere valutato l'impatto di diversi geni sullo sviluppo di MH.
Introduzione
Stenosi arteriosa nelle arterie coronariche e periferiche ha un grande effetto sulla morbosità e della mortalità di pazienti1. Un meccanismo patologico di fondo è l'iperplasia myointima (MH), che è caratterizzato da aumentata proliferazione, migrazione e sintesi di proteine della matrice extracellulare da muscolo liscio vascolare cellule (SMC)2. SMC si trovano nello strato media della nave e migrare su stimolo alla superficie del lume. Segnali stimolatori includono fattori di crescita, citochine, contatto della cellula-cellula, lipidi, componenti della matrice extracellulare e cesoia meccanica e allungare le forze
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Animali ha ricevuto un'assistenza umana in conformità con la guida per i principi di animali da laboratorio, preparato da Istituto di laboratorio animale risorse e pubblicato da National Institutes of Health. Tutti i protocolli di animali sono stati approvati dall'autorità locale responsabile (' Amt für Gesundheit und Verbraucherschutz, Fiuggi (ufficio per la salute e tutela dei consumatori) ').
1. preparazione del catetere
Nota: Fare riferimento alla Tabella materiali per informazioni per quanto riguarda il catetere.
- Prendere catetere da titolare del catetere.
- Tirare il filo ....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
Decumulazione palloncino è un modello adatto per studiare lo sviluppo di MH in topi. Animali recupero bene dalla chirurgia e viene mostrata un'eccellente condizione fisica post-operazione. Abbiamo stabilito questo modello in 50 topi con meno di 3% di mortalità a causa della procedura chirurgica. Figure 1B -C mostrano i passaggi chiave chirurgici. Dopo un'incisione della pelle lungo il linea alba, identificare l' aorta centrifugal.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
In questo articolo viene illustrato un modello murino per studiare lo sviluppo dell'iperplasia myointimal e permette l'esplorazione dei processi patologici sottostanti e la sperimentazione di nuovi farmaci o opzioni terapeutiche.
La fase più critica in questo protocollo è il denudation dell'aorta. Cura speciale dovrebbe essere pagata durante questo passaggio come eccessiva decumulazione porterà alla formazione di aneurismi e il fallimento del modello. D'altra parte, se decumulazione viene eseg.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori ringraziano Christiane Pahrmann per la sua assistenza tecnica.
D.W. è stata sostenuta dalla Max Kade Foundation. T.D. ha ricevuto sovvenzioni dall'altro Kröner Fondation (2012_EKES.04) e la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DE2133/2-1. _. S. S. ha ricevuto borse di ricerca dalla Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG; SCHR992/3-1, SCHR992/4-1).
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 10-0 Sutura Ethilon | Ethicon | 2814G | |
| Siringa da 3 ml | BD Medical | 309658 | |
| 37% HCl | Sigma-Aldrich | H1758 | |
| Sutura 5-0 in prolene | Ethicon | EH7229H | |
| 6-0 Sutura in prolene | Ethicon | 8706H | |
| Acid Fuchsin | Sigma-Aldrich | F8129-25G | Soluzione per il |
| recupero dell'antigene | Dako | S1699 | |
| Azophloxin | Waldeck | 1B-103 | Colorazione tricromica |
| Unguento per occhi e naso Bepanthen Unguento per occhi | 1578675 | Bayer | |
| Soluzione di betadine Betadine | Purdue Pharma | NDC:67618-152 | |
| C57BL/6J | Charles River | Codice 000664 | |
| Applicatore a morsetto | Fine Science Tools | 18056-14 | DIAMETRO DELLA GANASCIA: 4 x 0,75 mm LUNGHEZZA: 13 mm |
| Collagene 3 | abcam | ab7778 | Anticorpo |
| DAPI | Thermo Fischer | D1306 | |
| Asino anti-capra IgG AF555 | Invitrogen | A21432 | Anticorpo secondario |
| Asino anti-Coniglio IgG AF488 | Invitrogen | A21206 | Anticorpo |
| secondario Asino anti-Coniglio IgG AF488 | Invitrogen | A11055 | Secondario anticorpo |
| Asino anti-coniglio IgG AF555 | Invitrogen | A31572 | Anticorpo secondario |
| Etanolo 70% | Th. Geyer | 2270 | |
| Etanolo 96% | Th. Geyer | 2295 | |
| Etanolo assoluto | Th. Geyer | 2246 | |
| FAP | abcam | ab28246 | Anticorpo |
| Pinze fini | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| Pinze standard | Strumenti di Fine Science | 11023-10 | |
| Acido acetico glaciale | Sigma-Aldrich | 537020 | |
| Tagliacapelli | WAHL | 8786-451A ARCO SE | |
| Heparin | Rotexmedica | PZN 3862340 | 25.000 IE/mL |
| Kit cauterizzazione ad alta temperatura | Bovie | 18010-00 | |
| Image-iT FX Signal Enhancer | Invitrogen | I36933 | Soluzione di blocco |
| Verde chiaro SF | Waldeck | 1B-211 | Colorazione tricromatica |
| Morsetto microchirurgico | Fine Science Tools | 18055-04 | Micro-Serrefine - |
| Catetere per dilatazione coronarica MINI TREK da 4 mm 1,20 mm x 6 mm / Rapid-Exchange | Abbott | 1012268-06U | |
| Idrato di acido molibdatofosforico | Merck | 1.00532.0100 | Colorazione tricromica |
| NaCl 0,9% | B.Braun | PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160 | |
| Porta aghi | Fine Science Tools | 12075-14 | |
| Novaminsulfon | Ratiopharm | PZN 03530402 | Metamizolo |
| Orange G | Waldeck | 1B-221 | Colorazione tricromica |
| Paraffina | Leica biosystems | REF 39602004 | |
| PBS pH 7,4 | Gibco | 10010023 | |
| PFA 4% | Microscopia elettronica Scienze | #157135S | |
| Soluzione Ponceau S | Serva Elettroforesi | 33427 | Colorazione tricromica |
| Diluente anticorpo primario | Dako | S3022 | |
| Prolong Gold Soluzione di montaggio | Thermo Fischer | P36930 | Soluzione di montaggio per vetrini colorati in immunofluorescenza |
| Punta fine sostituibile | Bovie | H101 | |
| Resorcina-Fuchsin Weigert | Waldeck | 2E-30 | Colorazione tricromica |
| Rimadyl | Pfizer | 400684.00.00 | in carprofene |
| Fine Science Tools | 14028-10 | ||
| la scienza | fine in stile Vannas15000-03 | ||
| Diluente anticorpale secondario | Dako | S0809 | |
| Adesivo ad azione rapida MINIS 3x1g | UHU | 45370 | cianoacrilato |
| Ted Pella | 21057 | ||
| SM22 | abcam | ab10135 | Anticorpo |
| SMA | abcam | ab21027 | |
| Piatto per colorazione | Ted Pella | 21075 | |
| Microscopio operatorio | Leica | M651 | |
| Tabotamp fibrillare | Ethicon | 431962 | Emostatico assorbibile |
| Nastro chirurgico per traspore | 3M | 1527-1 | |
| U-100 Siringa da insulina | BD Medical | 324825 | |
| Dilatatore vascolare | scienza | 18603-14 | |
| Vitro-Clud | Langenbrinck | 04-0001 | |
| Weigerts ferro ematossilina Kit | Merck | 1.15973.0002 | Colorazione tricromica |
| Xilene | Th. Geyer | 3410 |
Riferimenti
- Kochanek, K. D., Xu, J., Murphy, S. L., Minino, A. M., Kung, H. C. Deaths: final data for 2009. Natl Vital Stat Rep. 60 (3), 1-116 (2011).
- Austin, G. E., Ratliff, N. B., Hollman, J., Tabei, S., Phillips, D. F. Intimal prol....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
