Lo spostamento verso l'alto: Un semplice e flessibile In Vitro tridimensionale invasione protocollo di analisi

Tanner J. McArdle; Brenda M. Ogle; Felicite K. Noubissi

doi:10.3791/56568

Articolo metodologico

Lo spostamento verso l'alto: Un semplice e flessibile In Vitro tridimensionale invasione protocollo di analisi

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DOI:

10.3791/56568

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12 marzo 2018

Tanner J. McArdle¹ , Brenda M. Ogle¹^,²^,³^,⁴^,⁵ , Felicite K. Noubissi⁶

¹Department of Biomedical Engineering, University of Minnesota - Twin Cities, ²Stem Cell Institute, University of Minnesota - Twin Cities, ³Masonic Cancer Center, University of Minnesota - Twin Cities, ⁴Lillehei Heart Institute, University of Minnesota - Twin Cities, ⁵Institute for Engineering in Medicine, University of Minnesota - Twin Cities, ⁶Department of Biology, Jackson State University

In questo articolo

Sommario

Questo protocollo descrive un'analisi di invasione verticale invertito che potrebbe essere utilizzata per quantificare le funzionalità di migrazione e invasione delle cellule in un ambiente tridimensionale, preservando il microambiente cellulare. Questo test è adatto per le cellule rare e/o sensibili.

Abstract

Sebbene siano state sviluppate le analisi 3D invasione, la sfida rimane per studiare le cellule senza intaccare l'integrità del loro microambiente. 3D tradizionali dosaggi come la camera di Boyden richiedono che le cellule vengono spostate dalla posizione originale cultura e spostate in un nuovo ambiente. Non solo fa questo interferire con i processi cellulari che sono intrinsechi al microambiente, ma spesso risulta in una perdita di cellule. Questi problemi sono particolarmente impegnativi, quando si tratta di cellule che sono rari, o estremamente sensibili alla loro microambiente. Qui, descriviamo lo sviluppo di un saggio di invasione 3D che evita entrambi preoccupazioni. In questo saggio, cellule sono placcate bene all'interno di una piccola e una matrice di ECM contenente un chemoattractant è disposto in cima le cellule. Ciò non richiede alcun spostamento di cella e permette alle cellule di invadere verso l'alto nella matrice. In questa analisi, l'invasione delle cellule, come pure la morfologia delle cellule può essere valutata all'interno del gel di collagene. Usando questa analisi, ci caratterizzano la capacità invasiva delle cellule rare e sensibile; le cellule di ibrido risultante dalla fusione tra cellule di cancro al seno MCF7 e mesenchimali/multipotenti staminali/stroma cellule (MSCs).

Introduzione

Motilità cellulare è un processo fisiologico e dello sviluppo normale delle cellule. Tuttavia, i cambiamenti nel modello e la capacità delle cellule di migrare e invadere sono associati con patologie tra cui malattie infiammatorie e cancro metastasi¹^,²^,³. Metastasi è senza dubbio l'aspetto più mal capito nel cancro. Per riprodurrsi per metastasi, le cellule tumorali devono degradare la matrice extracellulare (ECM), invadere il tessuto locale e intravasate. Una volta in circolazione, le cellule tumorali si diffonderanno al sito distante, MPEG e formare tumori secondari. Di con....