Articolo metodologico

Modello di topo indotta da pentylenetetrazole accensione

DOI:

10.3791/56573

⸱

12 giugno 2018

 , 
1Synaptic Plasticity Project, Tokyo Metropolitan Institute of Medical Science

In questo articolo

Sommario

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Questo protocollo descrive un metodo di accensione chimica con pentylenetetrazole e fornisce un modello murino di epilessia. Questo protocollo è utilizzabile anche per indagare vulnerabilità per induzione di sequestro e patogenesi dopo crisi epilettiche nei topi.

Abstract

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Pentylenetetrazole (PTZ) è un antagonista del recettore GABA-A. Un'iniezione intraperitoneale di PTZ in un animale induce un acuto, grave sequestro a dosi elevate, mentre le iniezioni sequenziale di una dose di subconvulsive sono state utilizzate per lo sviluppo della chimica dell'accensione, un modello di epilessia. Una singola iniezione di basse dosi di PTZ induce una lieve crisi senza convulsioni. Tuttavia, ripetitivo della basso-dose iniezioni di PTZ diminuiscono la soglia per evocare un grippaggio convulsivo. Infine, la somministrazione continua di basse dosi di PTZ induce un grippaggio tonico-clonic severo. Questo metodo è semplice e ampiamente applicabile per studiare la fisiopatologia dell'epilessia, che è definita come una malattia cronica che coinvolge i sequestri ripetitivi. Questo prodotto chimico legnetti protocollo causa convulsioni ripetitive in animali. Con questo metodo, è stato stimato vulnerabilità alle crisi epilettiche PTZ-mediata o il grado di esasperazione dei grippaggi epilettici. Questi vantaggi hanno portato all'uso di questo metodo per lo screening di farmaci antiepilettici e geni correlati all'epilessia. Inoltre, questo metodo è stato utilizzato per studiare il danno neuronale dopo i grippaggi epilettici perché i cambiamenti istologici osservati nei cervelli dei pazienti epilettici appaiono anche nei cervelli degli animali ha acceso chimico. Così, questo protocollo è utile per produrre convenientemente modelli animali di epilessia.

Introduzione

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L'epilessia è una malattia neurologica cronica che è caratterizzata dai grippaggi ricorrenti e colpisce circa l'1% di persone. I meccanismi di generazione di epilettogenesi e sequestro nei pazienti di epilessia non possono essere completamente chiariti negli studi clinici. Di conseguenza, un modello animale adeguato è richiesto per lo studio dell'epilessia1.

Una varietà di modelli animali di epilessia sono stati utilizzati per studiare la fisiologia di epilessia e per identificare farmaci anti-epilettici2,3. Tra questi modelli, induzione farmacologica sequest....

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Protocollo

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Tutte le procedure sperimentali sono state approvate dal comitato di uso del Tokyo Metropolitan Institute of Medical Science e cura degli animali. Postnatale 8 - 16-settimana-vecchi topi sono raccomandati. Qualsiasi ceppo inbred è accettabile per l'esperimento. Topi C57BL/6 sono più resistenti a PTZ, mentre topi albini BALB/c e svizzeri sono più sensibili a PTZ. C57BL/6 sono stati utilizzati in questo studio. Vulnerabilità di PTZ dipende anche dall'età del mouse. Rispetto ai più giovani topi, topi più vecchi sono più refrattari a PTZ35. Il numero di animali utilizzati per questo metodo può variare, ma almeno 6-10 animali sono necessari per ogni....

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Risultati

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Iniezione ripetuta di PTZ induce un aumento nella severità di sequestro. Sei topi C57BL/6 sono stati trattati con PTZ, e un altro 6 topi sono stati trattati con soluzione salina come gruppo di controllo. La dose PTZ era 35 mg/kg e 10 iniezioni sono state amministrate. Il Punteggio di grippaggio è aumentato gradualmente con iniezioni di PTZ, considerando che nessun grippaggi o comportamenti anormali sono stati evocati da iniezioni di soluzione salina (Figura 2.......

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Discussione

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Qui, presentiamo un protocollo ampiamente accessibile per l'istituzione di un modello animale farmacologico dell'epilessia. PTZ-mediata accensione chimica ha una lunga storia ed è un modello comunemente accettato per lo studio della patologia istopatologia e cellulare di epilessia41. Il modello di accensione chimica dell'epilessia è stato rivisto in precedenza da Suzdak e Jansen, 199542. L'induzione farmacologica sequestro, soprattutto con PTZ, è un metodo facile e semplice.......

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Dichiarazioni

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Gli autori non dichiarano conflitti di interesse.

Ringraziamenti

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Quest'opera è stata in parte sostenuta da numeri di sovvenzione JSPS KAKENHI 24700349, 24659093, 25293239, JP18H02536 e 17 K 07086, numeri di sovvenzione MEXT KAKENHI 25110737 e 23110525, AMED Grant numero JP18ek0109311 e SENSHIN Medical Research Foundation e il Giappone Fondamento di ricerca di epilessia.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
PentylenetetrazoleSigma-AldrichP6500
Cloruro di sodioMANAC7647-14-5
TopoCLEA GiapponeC57Bl/6NJcl, postnatale 8 settimane, maschio
Siringa (1mL)TerumoSS-01T
Ago (27G x 3/4") (0,40 x 19 mm)TerumoNN-2719S
BilanciaMettlerPE2000Questo articolo è un prodotto fuori produzione. Quasi equivalente a FX-2000i con FXi-12-JA di A& D compagnia.
ParaformaldeideSigma-AldrichP6148
Idrossido di sodionacalai tesque31511-05
Pompa peristaticaATTOSJ1211
Saccarosionacalai tesque30404-45
MicrotomoYamatoREM-700Questo articolo è un prodotto fuori produzione. Quasi equivalente alla lama del microtomo REM-710
FeatherS35
Triton X-100Sigma-AldrichX-100
anticorpo anti-sinaptoporinaSistemi sinaptici102 002
anticorpo anti-ZnT3Sistemi sinaptici197 002
anti-doublecortinaSanta Cruzsc-8066Questo articolo è un prodotto fuori produzione. Non abbiamo testato un prodotto equivalente (sc-271390).
Apparecchio per test di discriminazione della paura contestualeO'hara
Apparecchio per test a tre camereMuromachi

Riferimenti

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Löscher, W., Brandt, C. Prevention or Modification of Epileptogenesis after Brain Insults: Experimental Approaches and Translational Research. Pharmacological Reviews. 62 (4), 668-700 (2010).
  2. Loscher, W.

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