I geni homeobox sono geni regolatori spesso associati con i tumori negli organismi adulti. Abbiamo studiato la loro espressione comparativa di immunohistochemical e l'analisi di PCR in tempo reale, nelle mucose nasali normali ed infiammatorie e nei neoplasma sinonasal al fine di utilizzarli come possibili bersagli terapeutici e diagnostici.
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Articolo metodologico
Identificazione di OTX1 e OTX2 come due possibili marcatori molecolari per carcinomi Sinonasal e Neuroblastomas olfattivi
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
OTX geni homeobox (HB) sono espressi durante la morfogenesi embrionale e durante lo sviluppo dell'epitelio olfattivo negli organismi adulti. Mutazioni che accadono in questi geni sono spesso legate al tumorigenesis in essere umano. Non ci sono dati disponibili oggi per quanto riguarda la possibile correlazione tra geni OTX e tumori della cavità nasale. Lo scopo di questo lavoro è quello di capire se OTX1 e OTX2 può essere considerato come marcatori molecolari nello sviluppo dei tumori nasali. Abbiamo selezionato gli adenocarcinomi sinonasal e nasale per studiare l'espressione dei geni OTX1 e OTX2 attraverso analisi PCR in tempo reale e immunohistochemical. Sia OTX1 e OTX2 erano assenti in tutti i campioni di sinonasal intestinale-tipo adenocarcinomi (ITACs). OTX1 mRNA è stata identificata solo in adenocarcinomi di tipo Non-intestinali (NITACs) mentre OTX2 mRNA è stato espresso solo in Neuroblastomas olfattivi (ONs). Abbiamo dimostrato che l'espressione genica differenziale per geni OTX1 e di OTX2 potrebbe essere un utile marker molecolare per distinguere i diversi tipi di tumori sinonasal.
Introduzione
OTX Geni di HB sono l'omologo vertebrato dei geni orthodenticle Drosophila (otd) ed essi codificano per fattori di trascrizione che sono normalmente espressi durante la morfogenesi embrionale, ma possono anche essere espressi nell'organismo adulto con funzioni diverse . Durante lo sviluppo embrionale controllano la specifica di identità cellulare, differenziazione cellulare e il posizionamento del axis¹ corpo. La famiglia OTX comprende OTX1 e OTX2 geni che mostrano diverse funzioni. OTX1 è coinvolto nel cervello e sviluppo organo sensoriale. Nell'organismo adulto, è espresso in organi sensoriali e viene trascritto a bassi l....
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Protocollo
Tutti gli studi sono stati effettuati secondo la dichiarazione di Helsinki (1975) con il consenso informato scritto e approvato dal comitato etico dell'Università dell'Insubria di Varese.
1. raccolta dei campioni
- Raccogliere e dividere tutti i campioni di Formalin-Fixed Paraffin-Embedded (FFPE) umano in diversi sottogruppi secondo la classificazione del WHO dei tumori di collo e testa14.
Nota: Qui abbiamo utilizzato i seguenti campioni: mucosa normale sinonasal come controllo (10 campioni); Papilloma invertito (IP, codice ICD-O 8121/1); ITAC Sinonasal (codice ICD-O 8144/3, 32 campioni); ....
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Risultati
Nella mucosa normale abbiamo osservato reattività nucleare forte ed omogenea per geni OTX sia nell'epitelio ciliated pseudostratified tipo respiratorio e nelle cellule ghiandolari submucosal (Figura 1A). Abbiamo trovato espressione nucleare per OTX1 in tutti i campioni di NITACs (Figura 1B), mentre poco o assente il immunoreactivity è stato evidenziato in ITACs (Figura 1). Immunoreactivity intenso er.......
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Discussione
Questo studio dimostra per la prima volta che, sulla base dei livelli di mRNA, i geni di HB OTX1 e OTX2 sono espressi in mucosa normale sinonasal e ghiandole submucosal, polipi infiammatori, sinonasal Schneiderian papillomi e nelle diverse epiteliale e neuroectodermal neoplasie, compresi i carcinomi squamosi, adenocarcinomi sinonasal di tipo non-intestinale, i tumori delle ghiandole salivari-tipo, neoplasie neuroendocrine e ONs.
Le modifiche e la risoluzione dei problemi:
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato dal Centro Grandi Strumenti Università dell'Insubria, Fondazione Comunitaria del Varesotto, Fondazione del Monte di Lombardia e la Fondazione Anna Villa e Felice Rusconi.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| RecoverAll Total Nucleic Acid Isolation | Applied Biosystem | AM1975 | |
| di trascrizione inversa di cDNA ad alta capacità | Biosystem applicato | 4368814 | |
| TaqMan Universal PCR Master Mix, senza AmpErase UNG | Applied Biosystem | 4326614 | |
| ABI Prism 7000 | Applied Biosystem | 270001857 | |
| sonda ACTB | Applied Biosystem | Fuori produzione. Sequenza protetta da copyright | |
| Sonda OTX1 Biosystem | Applicato Fuori produzione. Sequenza protetta da copyright | ||
| Sonda OTX2 Biosystem | Applicato Fuori produzione. Sequenza protetta da copyright | ||
| Perossido di idrogeno acquoso | Merk | 1072090250 | |
| Tampone citrato | Sigma-Aldrich | 20276292 | |
| Triton | Sigma-Aldrich | 101473728 | |
| Tris | Merk | 108382 | |
| NaCl | Merk | 106404 | |
| Goat Anti-OTX2 | Antibody Vector Laboratories | Fuori produzione. Numero di catalogo non disponibile | |
| Rabbit Anti-Goat Antibody | Vector Laboratories | BA5000 | |
| ABC-Peroxidasi Complex | Vector Laboratories | PK6100 | |
| 3,3'-diaminobenzidina tetraidrocloride (DAB) | Sigma-Aldrich | D5905 | |
| Harris Hematoxylin | Bioptica | 0506004/L | |
| Pertek | Kaltek SRL | 1560 | |
| BioClear | Bioptica | W01030799 |
Riferimenti
- Boncinelli, E., Simeone, A., Acampora, D., Gulisano, M. Homeobox genes in the developing central nervous system. Ann genet. 36 (1), 30-37 (1993).
- Omodei, D., et al. Expression of the Brain Transcription Factor....
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Ristampe e permessi
