Modelli murini di patologie gastriche e infezione da Helicobacter

Kimberley D'Costa; Michelle Chonwerawong; Le Son Tran; Richard L. Ferrero

doi:10.3791/56985

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Articolo metodologico

Modelli murini di patologie gastriche e infezione da Helicobacter

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DOI:

10.3791/56985

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18 ottobre 2018

Kimberley D'Costa¹ , Michelle Chonwerawong¹ , Le Son Tran¹ , Richard L. Ferrero¹^,²

¹Centre for Innate Immunity and Infectious Diseases, Hudson Institute of Medical Research, ²Infection and Immunity Program, Monash Biomedicine Discovery Institute and Department of Microbiology, Monash University

In questo articolo

Sommario

Topi rappresentano un modello prezioso in vivo per studiare l'infezione e malattie causate da microrganismi gastrointestinale. Qui, descriviamo i metodi utilizzati per studiare la colonizzazione batterica e cambiamenti istopatologici in modelli murini di Helicobacter pylori-malattia correlata.

Abstract

Helicobacter pylori è un agente patogeno gastrico che è presente a metà della popolazione mondiale ed è una causa significativa della morbosità e della mortalità negli esseri umani. Diversi modelli di mouse dell'infezione gastrica Helicobacter sono stati sviluppati per lo studio dei meccanismi molecolari e cellulari per cui H. pylori batteri colonizzano lo stomaco degli umani e causare la malattia. Qui, descriviamo i protocolli per: 1) preparare sospensioni batteriche per l'infezione in vivo dei topi tramite sonda gastrica intragastrica; 2) determinare i livelli di colonizzazione batterica in tessuti gastrici del mouse, da reazione a catena della polimerasi (PCR) e contando praticabile; e 3) valutare le alterazioni patologiche, dall'istologia. Per stabilire la Helicobactinfezione nei topi, animali (SPF) esenti da patogeni specifici prima vengono inoculati con sospensioni (contenenti ≥ 10⁵ unità formanti colonie, CFUs) di mouse-colonizzazione di ceppi di entrambi i pilori di Helicobacter o altre speci di Helicobacter gastrico da animali, come Helicobacter felis. Presso post-l'infezione tempo-punti appropriati, stomaci sono asportati e dissecati sagittally in due frammenti di tessuto uguale, ciascuno costituito da regioni antrum e corpo. Uno di questi frammenti viene quindi utilizzato per conteggio praticabile o estrazione del DNA, mentre l'altro è sottoposto a elaborazione istologica. Colonizzazione batterica e cambiamenti istopatologici nello stomaco possono essere valutati ordinariamente in sezioni di tessuto gastrico macchiate con macchie Warthin-Stellato, Giemsa o Haematoxylin ed eosina (H & E), come appropriato. Analisi immunologiche supplementari possono essere effettuati anche da immunohistochemistry o immunofluorescenza su sezioni di tessuto gastrico di topo. I protocolli descritti di seguito sono progettati specificamente per consentire la valutazione nei topi di patologie gastriche che assomigliano a quelli in umani relativi pilori del H. malattie, compreso infiammazione, atrofia della ghiandola e formazione follicolo linfoide. La preparazione dell'inoculo e protocolli intragastrico "gavage" possono anche essere adattati per studiare la patogenesi di altri patogeni enterici umani che colonizzano i topi, come Salmonella Typhimurium o Citrobacter rodentium.

Introduzione

Helicobacter pylori è un patogeno gastrico a forma di spirale, gram-negativo, umano presente in tutte le popolazioni in tutto il mondo, con tassi di infezione nei paesi in via di sviluppo stimati nell'ordine di 80%¹. Anche se la maggior parte dei pilori del H.-individui infetti sono asintomatici, alcuni sviluppano malattie più gravi, che vanno dall'ulcerazione peptica a cancro gastrico². H. pylori-tumori associati ampiamente sono caratterizzati da cambiamenti maligni in cellule epiteliali (GECs) o dalla formazione di tessuti linfoidi supplementare-nodale nello stomaco, risultante nell'adenocarc....