L'approccio di marcatore trofica dell'acido grasso, vale a dire, l'assimilazione degli acidi grassi come intera molecola e trasferimento nel tessuto dei consumatori con no o minori modifiche, è ostacolata da lacune nel metabolismo dell'acido grasso di invertebrati del suolo piccolo. Isotopologue profilatura viene fornito come un prezioso strumento per districarsi tra interazioni trofiche.
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Articolo metodologico
Acido grasso 13C Isotopologue profilatura fornisce approfondimenti trasferimento trofico carbonio e metabolismo dei lipidi dei consumatori invertebrati marini
In questo articolo
Sommario
Abstract
Gli acidi grassi (FAs) sono biomarcatori utili in ecologia alimentare web perché in genere sono assimilati come una molecola completa e trasferiti nel tessuto dei consumatori con minore o nessuna modifica, che consente il routing dietetico tra diversi livelli trofici. Tuttavia, l'approccio di trofico marcatore FA è ancora ostacolata dalla conoscenza limitata nel metabolismo dei lipidi della fauna del suolo. Questo studio ha utilizzato interamente etichettato acido palmitico (C16: 013, 99% di atomo) come tracciante nelle vie di metabolismo dell'acido grasso del suolo diffuso due Collembola, Protaphorura fimata e Heteromurus nitidus. Al fine di indagare il destino e metaboliche modifiche di questo precursore, è presentato un metodo di profiling isotopologue, eseguita mediante spettrometria di massa utilizzando Monitoraggio singolo ione. Inoltre, il laboratorio a Monte alimentazione esperimento è descritto, così come l'estrazione e la metilazione delle frazioni lipidiche dominante (lipidi neutri, fosfolipidi) e formula correlata e dei calcoli. Profilatura di Isotopologue non solo rendimento complessivo 13C arricchimento in acidi grassi derivato da 13C etichettato precursore, ma produce anche il modello di isotopomeri supera la massa dello ione genitore (vale a dire, lo ione molecolare FA M+) di ciascuna etichetta FA da uno o più unità di massa (M+ 1, M+ 2, M+ 3, ecc.). Questa conoscenza permette di conclusioni sul rapporto di routing dietetica di un FA interamente consumato rispetto biosintesi de novo . La profilatura di isotopologue è suggerita come uno strumento utile per la valutazione del metabolismo dell'acido grasso in animali di suolo per districare le interazioni trofiche.
Introduzione
In un habitat criptico come il suolo, le relazioni trofiche sono difficili da indirizzo e sono ulteriormente limitate dalle ridotte dimensioni della fauna. Nell'ultimo decennio ha visto progressi in ecologia biochimica, specialmente nell'uso degli acidi grassi come biomarcatori per la definizione di strategie d'alimentazione della fauna del suolo sotto campo condizioni1,2,3. Questa è basata sul fatto che gli acidi grassi dalle risorse possono essere incorporati nel tessuto dei consumatori come molecole intero, un processo definito dietetico routing4. T....
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Protocollo
Il protocollo descritto non rientra tra le competenze dell'etica animale. Tuttavia, quando persone adatta i protocolli descritti per gli più alti animali, fare attenzione che il Comitato di etica animale istituzionale ha approvato il protocollo per la movimentazione degli animali.
1. coltivazione degli animali
Nota: Tutto spiegato procedure sperimentali sono basate su protocolli ben stabiliti26,27,28. Biotest in laboratorio hanno bisogno di un approvvigionamento continuo di organismi facilmente coltivabili. Qui, le specie ....
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Risultati
Contenuti freschi di peso e del lipido di collemboli
Nel corso dell'esperimento descritto, il contenuto in NLFAs e PLFAs non è cambiato significativamente nel corso del tempo, mentre il peso fresco degli esemplari è aumentato leggermente ma non significativamente24. Entrambi i parametri indicano un buon livello di forma fisica degli esemplari collemboli. Essere consapevoli di indagare del lipido e peso contenuti freschi di collemboli in tutto l'.......
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Discussione
Profilo di Isotopologue
Un'analisi dettagliata degli aspetti quantitativi nella distribuzione di 13C in FAs ha bisogno di una tecnologia all'avanguardia per assegnare carbonio partizionamento in reti alimentari. Il presente lavoro impiegato isotopologue profilatura per valutare il 13C /12C rapporti in comune biomarcatori FA per interazioni tropici. Questo metodo è affermato per l'analisi dell'amminoacido mediante cromatografia liquida (LC-MS) e.......
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Ringraziamenti
Si ringraziano il sostegno finanziario di Menzel R. e L. Ruess dalla Deutsche Forschungsgemeinschaft (RU RU780/11-1). R. Nehring è stato finanziato da RU 780/10-1. Infine, siamo estremamente grati a Dr. Hazel Ruvimbo Maboreke per la correzione del nostro manoscritto.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| neoLab-Barattoli rotondi | neoLab | 2-1506 | 69 x 40 mm, 10 pacchetti/confezione |
| Carbone attivato | Carl Roth | X865.1 | p.a., polvere, CAS n. 7440-44-0 |
| Alabastro Dental | RÖ HRICH-GIPSE | ---http://www.roehrich-gipse.de/dentalgipse.php | |
| Cloroformio | Carl Roth | 7331.1 | HPLC ≥ 99,9 % |
| Metanolo | Carl Roth | P717.1 | HPLC ≥ 99,9 % |
| Hexan | Carl Roth | 7339.1 | HPLC ≥ 98 % |
| tert-butil metil etere (MTBE) | Carl Roth | T175.1 | HPLC ≥ 99,5 % |
| Aceton | Carl Roth | 7328.2 | HPLC ≥ 99,9 % |
| NaOH | Carl Roth | 6771.1 | p.a. ≥ 99 %, in pellet |
| di sodio idrogenofosfato | Carl Roth | P030.1 | p.a. ≥ 99 % , senza acqua |
| Na-diidrogenofosfato Dihydrat | Carl Roth | T879.1 | p.a. ≥ 99 % |
| Acido ipocloridrico (6 N) | VWR International | 26,115,000 | AVS TITRINORM vol. soluzione |
| Bond Elut (Colonne) | Agilent Tech. | 14102037 | HF Bond Elut-SI, 500 mg, 3 mL, 50/PK |
| Prä paratenglä ser Duran | Glasgerä tebau Ochs | 135215 | Ø 16 x 100 mm, più tappo a vite con pratica zigrinatura e guarnizione integrata in PTFE/silicone |
| Supelco 37 Component FAME Mix | Sigma-Aldrich | 47885-U Supelco | 10 mg/mL in cloruro di metilene, standard analitico |
| FlowMesh | Carl Roth | 2796.1 | Rete in polipropilene, spessore circa 0,3 mm, con interasse tra i fili di 1 mm |
| Miscela di estere metilico acido batterico (BAME) | Sigma-Aldrich | 47080-U Supelco | 10 mg/mL in caproato di metile, standard analitico |
| Metil nonadecanoato | Sigma-Aldrich | 74208 | standard analitico ≥ 98,0 % |
| Acido esadecanoico-1-13C (palmitico) | Larodan Fine Chemicals | 78-1600 | GC ≥ 98,0 % (13C: 99,0 %) |
| RVC 2-25 CDplus | Martin Christ Gefrier-trocknungsanlagen | Concentratore | |
| midi compatto da bancoAlpha 2-4 LDplus | Martin Christ Gefrier-trocknungsanlagen | Collettore di essiccazione | |
| MZ 2C NT | Vacuubrand GMBH | Pompa a vuoto | |
| Roto-Shake Genie | Scientific Industries | Dispositivo combinato di oscillazione e rotazione | |
| XP64 Micro Comparatore | Mettler Toledo | Bilancia ad altissima precisione | |
| GC-System 7890A | Agilent Tech. | Gascromatografo | |
| 7000 GC/MS Triple Quad | Agilent Tech. | Spettrometro di massa triplo quad | |
| serie 7683B iniettore | Agilent Tech. | Iniettore di campioni | |
| Heraeus Multifuge 3SR+ | Thermo Scientific | Centrifuga con rotore in provetta da 10 ml |
Riferimenti
- Ruess, L., et al. Application of lipid analysis to understand trophic interactions in soil. Ecology. 86 (8), 2075-2082 (2005).
- Ruess, L., et al. Lipid composition of Collembola and their food resources in deciduous forest stands - Implications for feeding strategies. Soil Biology and Biochemistry. 39 (8), 1990-2000 (1990).
- Chamberlain, P. M., Bull, I. D., Black, H. I. J., Ineson, P., Evershed, R. P.
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Ristampe e permessi
Tag
Profilazione degli isotopologhi degli acidi grassiAnalisi del tracciante carbonio 13Vie del metabolismo lipidicoConsumatori invertebrati del suoloEstrazione di lipidi neutriAcidi grassi fosfolipidiciMonitoraggio di ioni selezionatiAnalisi mediante gascromatografiaRilevamento del pattern isotopologico
