Formazione di covalente del DNA addotti da agenti cancerogeni enzimaticamente attivati e farmaci In Vitro e la loro determinazione di 32P-postlabeling

Marie Stiborova

doi:10.3791/57177

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Articolo metodologico

Formazione di covalente del DNA addotti da agenti cancerogeni enzimaticamente attivati e farmaci In Vitro e la loro determinazione di ³²P-postlabeling

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DOI:

10.3791/57177

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20 marzo 2018

Marie Stiborova¹

¹Department of Biochemistry, Charles University

In questo articolo

Sommario

Valutare la potenza dei prodotti chimici ambientali e farmaci, per essere enzimaticamente addotti bioactivated per intermedi generando covalente del DNA, è un campo importante nello sviluppo del cancro ed il relativo trattamento. Metodi sono descritti per l'attivazione di composto per formare che complessi del DNA, così come le tecniche per la loro rilevazione e quantificazione.

Abstract

Complessi covalenti del DNA formata da sostanze chimiche o farmaci con potenza cancerogena sono giudicati come uno dei fattori più importanti nella fase di inizio di processi cancerogeni. Questo legame covalente, che è considerata la causa della tumorigenesi, ora viene valutato come un dogma centrale della carcinogenesi chimica. Qui vengono descritti metodi che impiegano le reazioni catalizzate dal citocromo P450 e gli enzimi di biotrasformazione aggiuntive per indagare la potenza di sostanze chimiche o farmaci per la loro attivazione ai metaboliti che formano questi DNA addotti. Le procedure sono presentate che descrive l'isolamento delle frazioni cellulari che possiedono enzimi di biotrasformazione (campioni microsomiali e citosolici con citocromi P450 o altri enzimi di biotrasformazione, vale a dire, perossidasi, NADPH: citocromo P450 ossidoriduttasi, NAD (P) h: ossidoriduttasi o xantina ossidasi). Inoltre, vengono descritti metodi che può essere utilizzato per l'attivazione metabolica delle sostanze chimiche analizzate da questi enzimi come pure quelli per isolamento di DNA. Inoltre, i metodi appropriati in grado di rilevare e quantificare il DNA derivato chimico/droga addotti, cioè, diverse modifiche della tecnica P-postlabeling ³²e occupazione di radioattivo etichettato analizzati prodotti chimici, sono indicato nel dettaglio.

Introduzione

Il metabolismo degli xenobiotici (sostanze chimiche ambientali o farmaci) si verifica in due fasi¹. Fasi I e II mirano a rendere i composti originariamente idrofobici (non solubili in acqua) più idrofila (solubile in acqua), rendendoli così facilmente excretable tramite urine, feci e sudore. Fase I (funzionalizzazione) reazioni comprendono l'ossidazione, riduzione, e idrossilazione catalizzata da enzimi come la citocromo P450s (P450s, CYPs), perossidasi (cioè., ciclossigenasi, COX), aldo-cheto riduttasi (AKRs) e microsomico monossigenasi contenente flavina (protocolli). Fase I comprende anche reazioni di riduzione, mediate da una varie....