Qui, presentiamo un sistema affidabile e semplice coculture bidimensionale (2D) per studiare l'interazione tra le cellule del tumore e adipociti del midollo osseo, che rivela un duplice effetto di fattori derivati da cellule di melanoma su adipociti del midollo osseo differenziazione e pone anche un metodo classico per lo studio meccanicistico della metastasi dell'osso.
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Articolo metodologico
Effetti doppi di fattori derivati da cellule di Melanoma su differenziazione adipociti del midollo osseo
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il crosstalk tra adipociti del midollo osseo e le cellule del tumore può giocare un ruolo critico nel processo di metastasi ossee. Una varietà di metodi sono disponibili per studiare il crosstalk significativo; Tuttavia, un sistema di transwell bidimensionale per coculture rimane un classico, affidabile e facile modo per questo studio di diafonia. Qui, presentiamo un protocollo dettagliato che mostra il coculture delle adipociti del midollo osseo e le cellule del melanoma. Tuttavia, un tale sistema di coculture potrebbe non solo contribuire allo studio di trasduzioni segnale cellulare delle cellule di cancro indotte dagli adipociti del midollo osseo, ma anche per il futuro meccanicistico studio della metastasi dell'osso che può rivelare nuovi bersagli terapeutici per osso metastasi.
Introduzione
Le metastasi dell'osso sono diffuse fra i pazienti di cancro avanzato, ma un trattamento curativo non è ancora disponibile. Di là di specializzata nella conservazione di energia come grasso, adipociti è in grado di supportare la crescita del tumore e metastasi nel midollo osseo e altri organi1,2,3,4,5,6. Inoltre, adipociti svolgono un ruolo essenziale nella regolazione del cancro cellula biologia7,8,
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Protocollo
Nota: Tutte le celle utilizzate nel presente protocollo dovrebbero essere cresciute da almeno tre generazioni dopo lo scongelamento da cellule stock congelate.
1. raccogliere i fattori derivati da cellule di Melanoma
-
Preparazioni
- Ottenere le cellule B16F10 e una linea cellulare di melanoma del topo.
Nota: Per questo protocollo, una linea cellulare di melanoma del topo è stata ottenuta dalla banca della cellula formativa dell'Accademia cinese delle scienze. - Rendere un supporto completo per la coltura delle cellule B16F10 (100 mL). Utilizzare medium dell'Aquila per volta di Dulbecco (DMEM) s....
- Ottenere le cellule B16F10 e una linea cellulare di melanoma del topo.
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Risultati
Nel midollo osseo, adipociti possono apparire nel tumore microambiente1,13,33,34,35 in una fase precoce per sostenere la progressione del tumore attraverso fattori solubili o attivazione12,6,osteoclastogenesis36, soprattutto nel contes.......
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Discussione
Cocultures con inserti sono stati ampiamente usati per studiare le interazioni cellula--cellula. Il sistema di coculture 2D è un modo efficace per osservare come le due parti diafonia in vitro, mediante il quale abbiamo mostrato qui due differenti del cancro delle cellule-guidati effetti sugli adipociti del midollo osseo. Molti laboratori hanno utilizzato questo metodo per indagare il crosstalk tra adipociti e cancro cellule6,12,
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da dichiarare.
Ringraziamenti
Ringraziamo gentilmente Dov Zipori (The Weizmann Institute of Science, Rehovot, Israele) per averci fornito le cellule stromali del midollo osseo murino linea 14F1.1. Questo studio è stato sostenuto da sovvenzioni da Fondazione Scienza naturale nazionale cinese (nn. 81771729) e l'Università ospedale di Chongqing Yongchuan medica (Nos. YJQN201330; YJZQN201527).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen Inc. | ||
| Siero fetale bovino | Invitrogen Inc. | 16000– 044 | |
| Soluzione salina tamponata con fosfato | Invitrogen Inc. | 14190-144 | |
| Insulina | Sigma-Aldrich | 91077C | |
| 3-isobutil-1-metil-xantina | Sigma-Aldrich | I5879 | |
| Desametasone | Sigma-Aldrich | D4902 | |
| Olio Rosso o | Sigma-Aldrich | O0625 | |
| Piastra a 24 pozzetti | Corning | CLS3527 | |
| Inserto | TranswellMillipore | MCHT24H48 | |
| Penicillina/Streptomicina | Invitrogen | 15140-122 | |
| isopropanolo | Sigma-Aldrich | I9516 | |
| 0,25% tripsina | Thermo Scientific | 25200056 | |
| emocitometro | Bio-Rad | 1450016 | |
| Incubatore per colture | Thermo Scientific | ||
| 50 mL falcon | Corning | CLS430828 | |
| Banco | Pulito Termo Scientifico-Microscopia | ||
| Olympus-200 | |||
| μ Puntali per pipette a L | BeyoGold | FTIP620 | |
| Puntali per pipette da 1.000 mL | BeyoGold | FTIP628 |
Riferimenti
- Wang, J., et al. Adipogenic niches for melanoma cell colonization and growth in bone marrow. Laboratory Investigation. 97 (6), 737-745 (2017).
- Trotter, T. N., et al. Adipocyte-Lineage Cells Support Growth and....
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Ristampe e permessi
