Isolamento di cellule deciduali umane primarie dalle membrane fetali del termine intempestivo della placenta

Tali Farine; Michael Parsons; Stephen Lye; Oksana Shynlova

doi:10.3791/57443

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Articolo metodologico

Isolamento di cellule deciduali umane primarie dalle membrane fetali del termine intempestivo della placenta

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DOI:

10.3791/57443

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30 aprile 2018

Tali Farine¹^,² , Michael Parsons² , Stephen Lye¹^,²^,³ , Oksana Shynlova¹^,²^,³

¹Department of Physiology, University of Toronto, ²Lunenfeld-Tanenbaum Research Institute, Sinai Health System, ³Department of Obstetrics and Gynecology, University of Toronto

In questo articolo

Sommario

Questo protocollo viene illustrato un metodo per l'isolamento di cellule deciduali umane primarie raccolti da membrane fetali di placente di termine che possono essere utilizzate per una varietà di applicazioni (cioè immunocitochimica, citometria a flusso, ecc.) con l'obiettivo per studiare il ruolo delle diverse popolazioni cellulari in complicazioni di gravidanza.

Abstract

La decidua, noto anche come l'endometrio incinta, è un tessuto riproduttivo criticamente importante. Le cellule deciduali, costituite principalmente da proteina cellule stromali e le cellule immuni, sono responsabili della secrezione di fattori ormonali e infiammatorie che sono critici per l'impianto di blastocisti successo, sviluppo placenta e svolgere un ruolo inizio del lavoro a termine e pretermine. Molte complicazioni di gravidanza possono derivare da perturbazioni di un delicato equilibrio di diverse popolazioni cellulari che comprende decidua. Alterazioni nella proporzione di tipi specifici delle cellule deciduali possono interferire con questi processi cruciali e aumentare il rischio di sviluppare gravi complicazioni della gravidanza, come il mancato impianto dell'embrione, restrizione della crescita intrauterina, preeclampsia e travaglio pretermine. Il protocollo descritto qui di seguito viene illustrato un costo e tempo metodo efficace per l'isolamento di cellule deciduali umane primarie raccolti da membrane fetali di placente a termine. Combinando la digestione enzimatica e delicata rottura meccanica del tessuto deciduale, un'alta resa delle cellule deciduali è stata ottenuta con virtualmente nessuna contaminazione del corion. Cosa importante, sono state caratterizzate cellule deciduali isolate (cellule stromali (55-60%), leucociti (35%), epiteliale (% 1) o cellule del trofoblasto (0,01%)) e mantenuto alta attuabilità (80%) che è stata confermata dall'analisi di citometria a flusso imaging multicolor. Questo protocollo è specifico per il parietalis decidua e può essere adattato alle placente di primo e secondo trimestre. Una volta isolato, cellule deciduali possono essere utilizzate per una moltitudine di applicazioni sperimentali con l'obiettivo di comprendere il ruolo delle sottopopolazioni differenti delle cellule deciduali a complicazioni durante la gravidanza.

Introduzione

L'endometrio, uno dei più attivi tessuti femminili adulti, subisce drammatica che ritocca ogni ciclo mestruale in risposta alla stimolazione di ormoni ovarici, estrogeni (E2) e progesterone (P4). La decidua, noto anche come l'endometrio incinta, è un tessuto riproduttivo criticamente importante che si è formato alla fine della fase di postovulatory a seguito di P4-driven differenziazione seguendo la fase proliferativa di E2-dominante. Le cellule deciduali sono responsabili della secrezione di fattori ormonali per l'impianto della blastocisti successo e sviluppo dell'interfaccia utero-placentare per il mantenimento della tolleranza materno fetale documento non autograf....