Murino colostomia distale fornisce un modello murino per colite di diversione umana, una colite linfocitaria prevalentemente nel segmento del colon escluso dal flusso fecale.
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Articolo metodologico
Murino colostomia distale, un nuovo modello di colite di diversione in topi C57BL/6
In questo articolo
Sommario
Abstract
Colite di diversione (DC) è una condizione clinica frequente che si verificano in pazienti con segmenti intestinali esclusi dal flusso a seguito di un'enterostomia diversione fecale. L'eziologia di questa malattia rimane mal definita, ma sembra differire da quello di malattie intestinali infiammatorie classica come il morbo di Crohn e colite ulcerosa. Ricerca finalizzata a decifrare i meccanismi fisiopatologici che portano allo sviluppo di questa malattia è stata gravemente ostacolata dalla mancanza di un appropriato modello murino. Questo protocollo genera un modello murino di DC che facilita lo studio del ruolo del sistema immunitario e la sua interazione con il microbioma nello sviluppo della DC. In questo modello utilizzando animali C57BL/6, parti distali del colon sono esclusi dal flusso fecale creando un colostomy distale, innescare lo sviluppo di delicato per moderare l'infiammazione nei segmenti intestinali esclusi e riproducendo le lesioni di segno distintivo dell'essere umano DC con una risposta infiammatoria sistemica moderata. Contrariamente al modello di ratto, un gran numero di modelli murini geneticamente modificati sullo sfondo C57BL/6 è disponibile. La combinazione di questi animali con il nostro modello consente i possibili ruoli di diverse citochine, chemochine o recettori di molecole bioattive (ad es., interleuchina (IL) -17; IL-10, chemokine CXCL13, recettori per le chemochine CXCR5 e CCR7 e il recettore della sfingosina-1-fosfato 4) deve essere valutata nella patogenesi della DC. La disponibilità di diversi ceppi di topi Congenici sullo sfondo C57BL/6 facilita in gran parte gli esperimenti di trasferimento per stabilire i ruoli dei tipi cellulari coinvolti nell'eziologia della DC. Infine, il modello offre l'opportunità di valutare le influenze di interventi locali (ad esempio, modifica del microbioma locale o terapia antinfiammatoria locale) su immunità mucosale nei segmenti intestinali affetti e non affetti e il su omeostasi immunitaria sistemica.
Introduzione
Negli ultimi anni, un numero sostanza di colite non infettive entità diverse da malattie intestinali infiammatorie classica (IBDs; i. e., ulcerosa o colite di Crohn) sono stati caratterizzati clinicamente e histopathologically in esseri umani. I meccanismi fisiopatologici che portano allo sviluppo di queste forme di colite completamente non sono capiti parzialmente perché appropriati modelli animali sono scarse. Colite di diversione è un'entità recentemente descritta. Anche se il termine è stato coniato nel 1980 da Glotzer1, la prima descrizione di un simile fenotipo è stato dato nel 1972 da Morson2. La malattia....
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Protocollo
Tutti i metodi descritti qui sono stati approvati dall'autorità di governo veterinaria (Landesamt für Landwirtschaft, Lebensmittelsicherheit und Fischerei Mecklenburg-Vorpommern, (LALLF M-V)).
1. cura preoperatoria e la preparazione dell'animale
- All'arrivo nella struttura degli animali, animali (C57Bl/6) si divide in gruppi di dimensioni simili, ogni gruppo della gabbia insieme e mantenere gruppi costante durante gli esperimenti.
Nota: Utilizzare animali dello stesso sesso. I risultati descritti sono stati ottenuti con topi maschi.
Nota: Se vengono utilizzati gli animali maschii, gruppi gabbia insieme a partire da quando sono 7 settimane di età ....
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Risultati
Chirurgia è ben tollerato sia nei gruppi di sham (colotomy) e sperimentale (colostomia). Mortalità perioperatoria non deve superare il 10% quando la chirurgia e perioperative management viene eseguita correttamente. Nella prima settimana postoperatoria, perdita di peso significativa è visto in entrambi i gruppi sperimentali e sham. Gli animali del gruppo finto raggiungono loro nadir di peso solitamente verso il quarto giorno postoperatorio, ma si verifica un giorno più tardi nel gruppo sp.......
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Discussione
Il modello murino di DC ha presentato in questo protocollo affidabile riproduce le caratteristiche istopatologiche del DC umana (ad es., lo sviluppo del de novo di follicoli linfoidi nel submucosa dei segmenti dell'intestino infiammato, cripta accorciamento e riduzioni in numeri delle cellule di calice). Oltre a questo vantaggio, questo modello è indotta da un fattore scatenante molto simile e presenta con un decorso clinico di moderata gravità lieve, come è il caso in esseri umani più colpiti.
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Dichiarazioni
Tutti gli autori dichiarano di non avere nessun interessi concorrenti.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Materiale operativo | |||
| sottofondo termico, 6 watt | ThermoLux, Witte + Sutor GmbH | 461265 | |
| Etanolo 70% (con metiletilchetone) | Pharmacie dell'Ospedale Universitario Greifswald | ||
| Applicatori in legno, testina di cotone piccola unilaterale, bastoncino di legno, lunghezza 150 mm | Centramed GmbH, Germania | 8308370 | per la disinfezione del campo operatorio |
| Forbice | Aesculap (BRAUN) | BC064R | |
| Pinza DeBakey atraumatica | Aesculap (BRAUN) | OC021R | |
| Porta aghi | Aesculap (BRAUN) | BM012R | |
| Vasofix Safety i.v. cannula 22G | Braun Melsungen AG, Germania | 4268091S-01 | |
| VICRYL Plus 4-0 viola intrecciato; V-5 17 m 1/2c; 70 cm | ETHICON, Inc. | ||
| PDS II 6-0 monofil; V-18 13 mm 3/8c; 70 cm | ETHICON, Inc. | Z991H | |
| BD Plastipak 1 mL (Siringhe con ago con interno sterile) | BD Medical | 305501 | |
| Triacid-N (N-Dodecylpropan-1,3-diamin) | ANTISEPTICA, Germany | 18824-01 | disinfezione degli strumenti chirurgici in bagno ad ultrasuoni |
| Farmaci | |||
| ketamina 10%, 100 mg/mL (ketamina cloridrato) | selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH | 9089.01.00 | 87 mg/kg i.p. |
| Xylasel, 20 mg/mL (xilazina cloridrato) | selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH | 400300.00.00 | 13 mg/kg i.p. |
| NaCl 0,9% | Braun Melsungen AG, Germania | 6697366.00.00 | |
| Buprenovet 0,3 mg/mL (buprenorfina) | Bayer, Germania | PZN: 01498870 | 0,1 mg/kg s.c. |
| Tramal Gocce, 100 mg/mL (tramadolo cloridrato) | Grü nenthal GmbH, Germania | 10116838 | 1 mg/mL di acqua potabile |
| Ceftriaxon-saar 2 g (ceftriaxone) | Cephasaar GmbH, Germania | PZN: 08844252 | 25 mg/kg di peso corporeo i.p. |
| >metronidazolo 5 mg/mL | Braun Melsungen AG, Germania | PZN: 05543515 | 12,5 mg/kg di peso corporeo i.p. |
| Food | |||
| ssniff M-Z Ereich | ssniff, Germania | V1184-3 | |
| Bevanda solida Dehyprev Vit BIO, buste | TripleATrading, Paesi Bassi | SDSHPV-75 | |
| Attrezzatura | |||
| Nikon Eclipse Ci-L | Nikon Instruments Europe BV, Germania | microscopia ottica | |
| VetScan HM 5 | Abaxis, USA | 770-9000 | Analizzatore ematologico veterinario di 50 & micro; l EDTA-sangue venoso |
| Bandelin SONOREX (Bagno ad ultrasuoni) | Bandelin electronics, Germania | RK 100 H | disinfezione degli strumenti chirurgici |
| Software | |||
| NIS-Element BR4 software | Nikon Instruments Europe BV, Germania | ||
| GraphPad Prism Versione 6 | GraphPad Software, Inc. |
Riferimenti
- Glotzer, D. J., Glick, M. E., Goldman, H. Proctitis and colitis following diversion of the fecal stream. Gastroenterology. 80, 438-441 (1981).
- Morson, B., Dawson, I. Gastrointestinal Pathology. , Blackwell Scientific Publications. London. (1972).
- Whelan, R. L., Abramson, D., Kim, D. S., Hashmi, H. F.
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Ristampe e permessi
