Un protocollo per migliorare i segnali dello ione del carboidrato in spettrometria di massa MALDI di riforma delle strutture cristallina durante i processi di preparazione del campione è dimostrato.
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Articolo metodologico
Un metodo di preparazione efficiente dei campioni per migliorare i segnali dello ione del carboidrato in spettrometria di massa di Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization
In questo articolo
Sommario
Abstract
Preparazione del campione è un processo critico nell'analisi di spettrometria di massa (MS) dei carboidrati. Anche se matrix-assisted laser desorption/ionizzazione (MALDI) MS è il metodo di scelta nell'analisi del carboidrato, riproducibilità di segnali e dati di poveri dello ione di campioni di carboidrati continuano ad essere gravi problemi. Per l'analisi quantitativa dei carboidrati, è necessario un efficace protocollo analitico, fornendo la qualità superiore dei dati. Questo video dimostra protocolli di preparazione del campione per migliorare l'intensità del segnale e minimizzare la variazione dati di carboidrati in MALDI-MS. Dopo l'essiccazione e cristallizzazione di gocce di campione, la morfologia di cristallo è riformata dal metanolo prima analisi spettrometria totale. Il miglioramento nel segnale del carboidrato è esaminato con spettrometria di massa MALDI imaging (IMS). Risultati sperimentali dimostrano che la riforma di cristallo regola strutture cristalline e ridistribuisce carboidrati analiti. In confronto con il metodo di preparazione delle gocce essiccate in convenzionale MALDI-MS, riformando morfologie di cristallo del carboidrato con metanolo spettacoli significativamente migliore intensità del segnale, distribuzione di immagini di ioni e stabilità dei dati. Poiché i protocolli hanno dimostrati nel presente documento non comportano modifiche nella composizione del campione, sono generalmente applicabili a vari carboidrati e matrici.
Introduzione
Analisi del carboidrato sono un argomento importante e impegnativo. Carboidrati e loro derivati svolgono i ruoli importanti vivere organismi1,2,3. Queste molecole hanno complicate strutture e sono inclini a decomporsi. Molti di loro non può essere caratterizzati chiaramente a causa di difficoltà nella separazione e nella rilevazione. Anche se spettrometria di matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI) massa (MS) è stata applicata all'analisi di una vasta gamma di biomolecole, grazie alla sua sensibilità e risultati comprensibili4, analisi dei ....
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Protocollo
1. campione piatto precondizionamento
-
Pulizia del piatto del campione
- Indossare guanti in nitrile per evitare la contaminazione del piatto del campione durante la pulizia.
- Lavare a mano piatto del campione ad 100,0 mL di soluzione detergente (1,0 mg/mL).
- Lavare a mano piatto del campione con acqua distillata deionizzata (DDW).
- Sciacquare la superficie della piastra campione con 30,0 mL di MeOH.
- Mettere il piatto di campione in un becher da 600 mL e riempire con DDW fino al piatto del campione è completamente immerso in acqua.
- Porre il becher in un ultrasuoni bagno (Vedi
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Risultati
Immagini di SEM rappresentative di SLeA mescolano con DHB preparato usando DD e ricristallizzazione metodi sono illustrati nella Figura 1. Una tipica morfologia DHB come preparato con il metodo DD è grandi cristalli aghiformi a cerchio e belle strutture cristalline nel centro di punti campione. Le lunghezze tipiche di tali cristalli aghiformi sono ~ 100 µm. Dopo ricristallizzazione da MeOH, il campione ha una più grande zona coperta uniformemente c.......
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Discussione
Eterogeneità di campione è che un problema cruciale in MALDI-MS. DD è il più diffuso metodo di preparazione del campione, ma i cristalli risultanti sono altamente eterogenei. Tali campioni mostrano riproducibilità povero segnale shot-to-shot e campione a campione. Di conseguenza, alla ricerca di "sweet spot" in aree campione durante l'acquisizione dei dati è una procedura comune in esperimenti di MALDI. Tali campioni eterogenei non sono adatti per quantificazione in analisi di routine.
Nello s.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori non hanno nessun ringraziamenti.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Reagente | |||
| Detersivo in polvere | Alconox | 242985 | |
| Metanolo | Merck | 106009 | |
| Acetonitrile | Merck | 100003 | |
| Acido 2,5-diidrossibenzoico (DHB) | Alfa Aesar | A11459 | |
| sialil-lewis A (SLeA) | Sigma-Aldrich | S1782 | |
| Maltoeptaosio | Sigma-Aldrich | M7753 | |
| Puntali per pipette | Mettler Toledo | 17005091 | |
| Provetta per microcentrifuga | Axygen | MCT-150-C | |
| Equipment | |||
| Milli-Q sistema di purificazione dell'acqua | Millipore | ZMQS6VFT1 | |
| Guanti in nitrile senza polvere | Microflex | SU-690 | |
| Becher da 600 mL | Duran | 2110648 | |
| Pulitore ad ultrasuoni | Delta | DC300H | |
| Igrometro | Wisewind | 5330 | |
| Misuratore di portata di azoto gassoso | Dwyer | RMA-6-SSV | |
| Termocoppie di tipo K | Digitron | 311-1670 | |
| Miscelatore a vortice | Scientific Industries | SI-0236 | |
| Mini centrifuga | Seleziona BioProducts | Force Mini | |
| Pipetta | Rainin | pipet-lite XLS | |
| Stereomicroscopio | Olympus | SZX16 | |
| Camera di essiccazione a temperatura controllabile | Questo laboratorio | ||
| Ultraflex II TOF/TOF spettrometro di massa | Bruker Daltonics | ||
| MTP 384 piastra bersaglio acciaio lucido BC | Bruker Daltonics | 8280781 | |
| Flexcontrol Versione 3.4 | Bruker Daltonics | Software di controllo | |
| Fleximaging Versione 2.1 | Bruker Daltonics | Software di imaging | |
| Flexanalysis Versione 3.4 | Bruker Daltonics | Software di analisi |
Riferimenti
- Holme, D. J., Peck, H. Analytical Biochemistry. , 3rd edn, Addison Wesley Longman Limited. (1998).
- Costello, C. E. Time, life ... and mass spectrometry - New techniques to address biological questions. Biophysical Chemistry. 68 (1-3), 173-188 (1997).
- Caroff, M., Karibian, D.
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Ristampe e permessi
