Qui, presentiamo un protocollo per testare la virulenza della pianta con la pianta patogeno Magnaporthe grisea. Questa relazione contribuirà alla proiezione su grande scala di patotipi di funghi isolati e servire come un ottimo punto di partenza per la comprensione dei meccanismi resistenti delle piante durante l'allevamento molecolare.
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Articolo metodologico
La prova di infezione di pianta: Spray e ferita-mediata di inoculazione con la pianta patogeno Magnaporthe Grisea
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Piante possiedono un potente sistema per difendersi contro le minacce potenziali dei funghi patogeni. Per piante sul piano agricolo importanti, tuttavia, attuali misure di lotta contro tali agenti patogeni hanno dimostrato troppo conservatore e, quindi, non sufficientemente efficaci e possono potenzialmente rappresentare rischi ambientali. Pertanto, è estremamente necessario identificare i fattori di resistenza ospite per assistere nel controllo malattie delle piante naturalmente attraverso l'identificazione di germoplasma resistente, l'isolamento e caratterizzazione di geni di resistenza e l'allevamento molecolare di cultivar resistenti. A questo proposito, c'è bisogno di stabilire un metodo di inoculazione accurata, rapida e su larga scala per allevare e sviluppare i geni di resistenza della pianta. Il riso blast agente patogeno fungoso Magnaporthe grisea cause sintomi di grave malattia e le perdite di rendimento. Recentemente, M. grisea è emerso come organismo modello per lo studio dei meccanismi delle interazioni pianta-fungo patogeno. Quindi, segnaliamo lo sviluppo di un metodo di test di virulenza di pianta che è specifico per M. grisea. Questo metodo fornisce per inoculazione di spruzzo con una sospensione conidial e ferendo inoculazione con cubetti di micelio o goccioline di conidial sospensione. Il passaggio chiave del metodo ferentesi inoculazione per foglie di riso indipendente è di rendere le ferite sulle foglie delle piante, che evita qualsiasi interferenza causata da resistenza di penetrazione ospite. Questo spray/ferendo protocollo contribuisce per lo screening rapido, accurato e su larga scala di patotipi degli isolati di M. grisea . Questo integrato e metodo di infezione sistematica impianto servirà come punto di partenza eccellente per ottenere una prospettiva ampia di problemi in patologia vegetale.
Introduzione
Esplosione di riso, causata da M. grisea, è una delle malattie più gravi per riso varietà in tutto il mondo1,2. Il processo mediante il quale M. grisea infetta piante ospiti comprende una produzione di conidi e collegamento di superficie, una germinazione di conidi e appressorium formazione, una formazione del peg di penetrazione e differenziazione di IFA infettiva, e una malattia diffusa 3. tutte queste fasi sono comuni in molti altri funghi patogeni vegetali e, infatti, un blocco di ogni singola fase previene l'infezione delle piante ospiti. Grazie alla sua importanz....
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Protocollo
1. spray inoculazione con una sospensione di M. grisea conidi
-
Coltura fungosa per M.grisea
- Preparare il terreno di coltura agar (OTA) pomodoro fiocchi d'avena per ceppi fungini.
- Pesare 30-50 g di farina d'avena, aggiungere questo a 800 mL di acqua distillata/deionizzata (ddH2O) e far bollire per 30 min in pentola elettrica.
- Filtrare il succo bollito farina d'avena nel becher attraverso un pezzo di garza.
- Aggiungere 150 mL di succo di pomodoro e 20 g di agar per il filtrato nel becher e aggiungere ddH2O fino a 1.000 mL.
- Preparaz....
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Risultati
L'intero flusso di lavoro per la tecnica è illustrata nella Figura 1. I dosaggi di infezione della pianta sono stati effettuati su semenzali del riso suscettibili 14-giorno-vecchio (o. sativa cv CO-39) o suscettibile 7-giorno-vecchio orzo lascia (H. vulgare cv Golden Promise)7,8,9. Per verificare un'infezione sulle foglie di riso, una sospensione co.......
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Discussione
Geni di resistenza di malattia pianta svolgono un ruolo essenziale nella prevenzione delle infezioni da agenti patogeni, tra cui funghi patogeni1,12. Esplosione di riso è stato utilizzato come modello per comprendere la natura delle strutture di popolazione dell'agente patogeno e per identificare geni della pianta resistenza4. Pertanto, è necessario esaminare il genotipo di resistenza di malattia e genotipi di avirulenza delle principali v.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto il progetto speciale di ricerca scientifica dell'Università di agricoltura di Pechino (YQ201603) e il progetto scientifico del Comitato educativo di Pechino (KM201610020005).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Carta da filtro | marchio GE Healthcare (Svezia) | ||
| Provetta da 50 mL | CORNING(Amercia) | 430290 | |
| Centrifuga | Eppendorf(Amercia) | 5804R | |
| Piatto di coltura | Thermofisher(Amercia) | 150326 | |
| Pipetta da 0,5-5 mL | Eppendorf | ||
| Pipetta 100-1000uL | Eppendorf | 4920000083 | |
| Pompa a vuoto | Leybold | D25B | |
| Ago di dissezione | FST | 26000-35 | |
| Incubatore | MEMMERT | PYX313 | |
| Anello di inoculazione | Greiner Bio One | 731175 |
Riferimenti
- Li, W. T., et al. A natural allele of a transcription factor in rice confers broad-spectrum blast resistance. Cell. 170 (1), 114-126 (2017).
- Chi, M. H., Park, S. Y., Kim, S., Lee, Y. H. A novel pathogenicity gene is re....
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Ristampe e permessi
