Questo protocollo descrive un metodo per infliggere un'abrasione sulla superficie oculare del mouse e a seguire da allora in poi il processo di cicatrizzazione. Il protocollo si avvale di un oculare burr parzialmente rimuovere l'epitelio di superficie dell'occhio nei topi anestetizzati.
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Articolo metodologico
Guarigione delle ferite di abrasione epiteliale corneale con oculare Burr come un modello per Cornea
In questo articolo
Sommario
Abstract
La cornea murina fornisce un eccellente modello per studiare la guarigione della ferita. La cornea è lo strato più esterno dell'occhio e così è la prima difesa per infortunio. Infatti, il tipo più comune di lesioni oculari trovati nella clinica è un'abrasione cornea. Qui, utilizziamo un oculare burr per indurre un'abrasione conseguente rimozione dello epitelio corneale in vivo sui topi anestetizzati. Questo metodo consente per rottura epiteliale mirata e riproducibile, lasciando altre aree intatte. In più, descriviamo la visualizzazione dell'epitelio abrasa con la macchiatura della fluorescina e fornire consigli concreti su come visualizzare la cornea abrasa. Quindi, seguiamo la linea temporale di guarigione delle ferite 0, 18 e 72 h dopo abrasione, fino a quando la ferita è re-epithelialized. Il modello di abrasione epiteliale della lesione corneale è ideale per gli studi sulla riepitelizzazione degli strati corneali, la migrazione e la proliferazione delle cellule epiteliali. Tuttavia, questo metodo non è ottimo per studiare l'attivazione stromal durante la guarigione delle ferite, perché la bava oculare non penetrano negli strati di cellule stromali. Questo metodo è anche adatto per applicazioni cliniche, ad esempio, i test pre-clinici di efficacia del farmaco.
Introduzione
Strati epiteliali di numerosi organi sono esposti alle lesioni. Tuttavia, essi contengono anche la capacità di compensare la perdita di tessuto attraverso la guarigione della ferita. La cornea offre un eccellente modello per studiare la guarigione della ferita. Forma la superficie esterna dell'occhio e fornisce uno strato protettivo per il macchinario di oculare sensibile. In tal modo, cornea funziona come una barriera fisica per gli agenti patogeni e perdita di acqua. Si compone di tre strati; epitelio, stroma ed endotelio. L'epitelio della cornea costituisce lo strato più esterno della cornea. Cellule epiteliali mantengono la funzione di barriera della cornea aderen....
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Protocollo
Tutti gli esperimenti sono approvati dal Consiglio nazionale esperimento sugli animali.
1. preparati
- Tutte le soluzioni di preparare e tenere a temperatura ambiente, se non diversamente indicato. Seguire le normative sullo smaltimento dei rifiuti per dispose utilizzato materiali e soluzioni.
- Uso NMRI e ICR esogami scorte, fra 4-12 settimane di età e di entrambi i sessi. Se si utilizza il ceppo C57BL/6, seguire il metodo di preparazione di ketamina-medetomidina nel passaggio 1.3.2. Per altre fasi, seguire le istruzioni descritte in 1.3.3.-1.3.5.
- Preparare la medicina veterinaria fresco e in tempo prima di inizia....
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Risultati
Questo protocollo descrive un modello per infliggere un danno all'abrasione alla cornea del mouse e suggerisce come seguire e visualizzare il processo di guarigione dopo abrasione. Recentemente, abbiamo usato questo metodo per studiare il ruolo delle cellule progenitrici epiteliali corneali durante6di cicatrizzazione. L'uso di strumenti consolidati è la chiave per un esperimento di successo all'abrasione. Noi ed altri, abbiamo utilizzato la bava oculare di Algerbru.......
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Discussione
Metodi di ferimento sono popolari strumenti per studiare diversi aspetti dell'omeostasi cornea e patologie. Il modello di abrasione offre un metodo ben controllato per risolvere problemi rilevanti in Oftalmologia. Tuttavia, alcuni punti critici nel protocollo sono la pena sottolineare. In particolare, i dettagli descritti per quanto riguarda la medicina veterinaria, timeline di guarigione della ferita ed il risultato sono ottimizzati per l'uso con le scorte nazionali di NMRI e ICR, ma possono variare tra i ceppi di topi<.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Vorremmo ringraziare Kaisa Ikkala per la sua preziosa assistenza tecnica e aiuto perspicace quando sta attuando questo metodo e anche più tardi durante l'attuazione alle nostre domande di ricerca centrale. Vorremmo anche ringraziare il laboratorio Animal Center e Anna Meller per aiutarla con le linee guida del lavoro veterinario di pianificazione.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| NMRI mouse | Envigo | 275 | |
| 0,9% NaCl | uso sterile | ||
| Medetomidina | Vetmedic | Vnr087896 | Nome di mercato: Cepetor Vet |
| Ketamine | Intervet | Vnr511485 | Nome di mercato: Ketaminol |
| Vet Buprenorfin | Invidior | 3015248 | Nome di mercato: Temgesic |
| Atipamezol | Orion Pharma | Vnr471953 | Nome di mercato: Antisedan Vet |
| Carprofen | Norbrook | Vnr027579 | Nome di mercato: Norocarp Vet |
| 1% fucidina acido unguento per gli occhi | Dechra | Vnr080899 | Nome di mercato: Isathal |
| Sale di fluoresceina | Sigma-Aldrich | F6377 | |
| Soluzione salina | PBS | ||
| Algerbrush ii bava oculare ( 0,5 mm punta) | Algerbrush | 6.39768E+11 | |
| Cobalto Blu penna luce | SP Servizi | DE/003 | |
| Piastra riscaldante | Kunz Instruments | 2007-0217 | |
| Fotocamera reflex digitale | Nikon | D80 | |
| Braccio e morsetto per fotocamera regolabili | Neewer | 10086132 | Altezza 28 cm |
| Lampada da tavolo con braccio flessibile e morsetto | Prisma | ||
| Salvietta morbida | KimtechScience | 7552 | |
| di CO2 | |||
| Set di strumenti di dissezione | Strumenti | ||
| fine Siringhe | Beckton Dickinson | 303172 | |
| 26G Beckton | Dickinson | 303800 | |
| 2 mL Eppendorf tubo | Sarstedt | 689 | |
| Cassetta per tessuti | Sakura Finetech | 4118F | |
| Macchina per la lavorazione dei tessuti ASP200S | Leica | ||
| Xylene | VWR | UN1307 | |
| Cera di paraffina | Millipore | K95523361 | |
| Stampo per inclusione di tessuti 32 x 25 x 6 mm | Sakura Finetech | 4123 | |
| Microtome | Microm | HM355 | |
| Bagnomaria per sezionamento | Orthex | 60591 | |
| Bagnomaria per sezionamento | Leica | HI1210 | |
| Lama per microtomo | Feather | S35 | |
| Vetrino | Th.Geyer GmbH & Co. | 7.695.019 | |
| Acqua ultrapura | Millipore | MPGP04001 | |
| Paraformaldeide | MilliQ Sigma-Aldrich | 158127 | PFA |
Riferimenti
- Yi, X., Wang, Y., Yu, F. S. Corneal epithelial tight junctions and their response to lipopolysaccharide challenge. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41 (13), 4093-4100 (2000).
- Wang, Y., Chen, M., Wolosin, J. M.
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Ristampe e permessi
