In Vitro Differenziazione dei Mouse del Granulocyte-macrofago-colony-stimulating Factor (GM-CSF)-producendo le cellule T Helper (THGM)

Yi Lu; Xin-Yuan Fu; Yongliang Zhang

doi:10.3791/58087

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Articolo metodologico

In Vitro Differenziazione dei Mouse del Granulocyte-macrofago-colony-stimulating Factor (GM-CSF)-producendo le cellule T Helper (T_HGM)

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DOI:

10.3791/58087

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10 settembre 2018

Yi Lu¹^,²^,³ , Xin-Yuan Fu³ , Yongliang Zhang¹^,²

¹Department of Microbiology and Immunology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore, ²Immunology Programme, Life Sciences Institute, National University of Singapore, ³Cancer Science Institute of Singapore, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore

In questo articolo

Sommario

Qui, presentiamo un protocollo per differenziare murino granulocyte-macrophage-colony-stimulating-factor-producing linfociti T helper (T_HGM) da cellule T CD4 + ingenuo, incluso l'isolamento delle cellule T CD4 + Naive, differenziazione di T_HGM, e analisi delle cellule di T_HGM differenziate. Questo metodo può essere applicato agli studi del regolamento e la funzione delle cellule di T_HGM.

Abstract

Il fattore di stimolazione del granulocyte-macrofago-colonia (GM-CSF)-la produzione di cellule T helper (T_HGM) è un sottoinsieme di cellule helper T recentemente identificato che principalmente secerne GM-CSF senza produrre l'interferone (IFN) γ o interleuchina (IL) -17 e si trova a svolgono un ruolo essenziale nella neuroinfiammazione autoimmuni. Un metodo di isolamento di cellule T CD4 + ingenuo da una cella singola sospensione degli splenocytes e generazione di cellule T_HGM da cellule T CD4 + ingenuo sarebbe una tecnica utile nello studio dell'immunità mediata da cellule T e malattie autoimmuni. Qui descriviamo un metodo che differenzia le cellule di T di CD4 + ingenuo di topo in cellule di T_HGM promosse da IL-7. L'esito della differenziazione è stata valutata tramite l'analisi dell'espressione di citochine utilizzando diverse tecniche, tra cui intracellulare cytokine colorazione combinato con citometria a flusso, una reazione a catena quantitativa in tempo reale della polimerasi (PCR), e analisi enzima-collegata dell'immunosorbente (ELISA). Utilizzando il protocollo di differenziazione T_HGM come descritto qui, circa il 55% delle cellule espresso GM-CSF con una minima espressione di IL2 o IL-17. L'espressione predominante di GM-CSF dalle cellule di T_HGM è stato ulteriormente confermato dall'analisi dell'espressione di GM-CSF, IL2 e IL-17 a livelli di mRNA e di proteina. Pertanto, questo metodo può essere utilizzato per differenziare le cellule CD4 + T naive a T_HGM cellule in vitro, che saranno utili nello studio della biologia delle cellule di T_HGM.

Introduzione

Linfociti CD4 + T helper (T_H) sono componenti essenziali del sistema immunitario, avendo un ruolo cruciale nella difesa ospite contro gli agenti patogeni microbici, nella sorveglianza del cancro e nell'autoimmunità¹^,²^,³. Al momento dell'attivazione del ricevitore (TCR) di cellule T, cellule T CD4 + ingenuo possono essere differenziate in T_H1, T_H2, T_H 17, o regolamentazione T (Treg) cellule sotto l'influenza di citochine differenti ambienti²^,⁴^, ^5<....