Qui presentiamo un protocollo basati sulla spettrometria di massa tandem per la quantificazione degli antibiotici frequentemente utilizzati nelle unità di cura intensiva, cioè cefepime, meropenem, ciprofloxacina, moxifloxacina, linezolid e piperacillina.
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Articolo metodologico
Multiplex monitoraggio terapeutico del farmaco da diluizione dell'isotopo HPLC-MS/MS di antibiotici in malattie critiche
In questo articolo
Sommario
Abstract
C'è una domanda sempre crescente per il monitoraggio terapeutico del farmaco di antibiotici in molte strutture cliniche, soprattutto per quanto riguarda l'attuazione di programmi di stewardship antibiotica ospedaliera.
Nel lavoro attuale, presentiamo un protocollo multiplex ad alte prestazioni liquido cromatografia-spettrometria di massa tandem (HPCL-MS/MS) per la quantificazione di cefepime, meropenem, ciprofloxacina, moxifloxacina, linezolid e piperacillina, comunemente usato antibiotici in terapia intensiva. Il metodo è stato convalidato in precedenza completamente secondo le linee guida dell'Agenzia europea dei medicinali.
Dopo una pulizia rapida campione, gli analiti sono separati su una colonna HPLC di inverso-fase C8 entro 4 minuti e quantificati con il corrispondente stabile isotopo-etichetta standard interni in spettrometria di massa electrospray ionizzazione (ESI +) nella reazione più tempo di monitoraggio (MRM). Il metodo proposto utilizza una strumentazione semplice impostazione con condizioni cromatografiche uniforme, consentendo il monitoraggio terapeutico del farmaco antibiotico giornaliero e robusto in laboratori clinici. La curva di taratura si estende la gamma di concentrazione farmacocinetiche, compresi quindi gli importi antibiotici vicino la concentrazione inibitoria minima (MIC) di batteri sensibili e le concentrazioni di picco (Cmax) che si ottengono con bolo regimi di somministrazione. Senza la necessità della diluizione del siero prima la pulizia del campione, l'area sotto la curva per un antibiotico somministrato può essere ottenuta attraverso misurazioni multiple.
Introduzione
Anche se gli antibiotici hanno rivoluzionato la pratica della medicina, gravi infezioni batteriche rimangono delle cause principali di morbilità e mortalità in malattie critiche1. A questo proposito, la gestione rapida di un antinfettivo adatto in una dose adeguata è dell'importanza più in alto per controllo di malattia2.
Un corpo crescente di prova dimostra che il trattamento empirico con antibiotici ad ampio spettro sta diventando sempre più problematico con la complessità delle popolazioni di pazienti. Questo è particolarmente vero per le unità di terapia intensiva (ICU), dove un'enorme var....
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Protocollo
Nota: Si consiglia di lavorare in una cappa quando si maneggia il solvente organico, come il metanolo. Preparare tutti i buffer e fasi mobili in matracci tarati. Se non diversamente specificato, le soluzioni possono essere conservate a temperatura ambiente per fino a 1 mese dopo la preparazione.
1. preparazione dei calibratori e campioni di controllo di qualità
Nota: Una scheda di analisi di dati corrispondente per la preparazione di soluzioni stock e spike è data nel File supplementare. Per motivi di tracciabilità, inserire il produttore, numero di catalogo e molto numero di ciascun antibiotico ne....
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Risultati
Utilizzando il protocollo descritto, un tipico cromatogramma è raffigurato in Figura 2. Secondo la farmacopea degli Stati Uniti (USP) cromatografia orientamenti16, il volume morto di colonna nel sistema attuale è stato determinato con ~0.22 mL e il volume extra-colonna (tra cui l'iniettore, tubi e connettori) con ~0.08 mL, dando un volume di hold-up di ~0.30 mL. I fattori di ritenzione calcolato per tutti gli analiti sono stati 2,8 (pe.......
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Discussione
In questo manoscritto, segnaliamo il protocollo per un metodo basati sulla spettrometria di massa tandem semplice e robusto per la quantificazione degli antibiotici utilizzati di frequente in ICU19, vale a dire cefepime, meropenem, ciprofloxacina, moxifloxacina, linezolid, e La piperacillina14. Un foglio di calcolo accompagna il manoscritto per la preparazione di soluzioni stock di antibiotici, calibratori e controlli di qualità, tenendo conto la purezza degli antibiotici e.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori ringraziano il Dr. Schütze per il suo aiuto con la creazione del metodo presentato e Dr. Zoller per il prezioso contributo per quanto riguarda l'intervallo di calibrazione corretta. Gli autori riconoscono anche lo staff tecnico della struttura di spettrometria di massa.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| cefepime cloridrato | Sigma-Aldrich | 1097636 | USP Standard |
| di riferimento meropenem triidrato | Sigma-Aldrich | Y0001252 | EP Standard di riferimento |
| ciprofloxacina | Sigma-Aldrich | 17850 | |
| moxifloxacina cloridrato | Sigma-Aldrich | SML1581 | |
| linezolid | Toronto Research Chemicals | ||
| piperacillina sale sodico | Sigma-Aldrich | 93129 | |
| cefepime-13C12D3 solfato | Alsachim | C1297 | Standard interno marcato con isotopi per cefepime |
| meropenem-D6 | Toronto Research Chemicals | M225617 | Standard interno marcato con isotopi per meropenem |
| ciprofloxacina-D8 | Toronto Research Chemicals | C482501 | Standard interno marcato con isotopo per ciprofloxacina |
| moxifloxacina-13C1D3 cloridrato | Toronto Research Chemicals | M745003 | Standard interno marcato con isotopo per moxifloxacina |
| linezolid-D3 | Toronto Research Chemicals | L466502 | Standard interno marcato con isotopo per linezolid |
| piperacillina-D5 | Toronto Research Chemicals | P479952 | Isotopo marcato interno standard per piperacillina |
| , metanolo | JT Baker, | 8402 | |
| acqua di grado HPLC, | JT Baker | 4218 | |
| acido formico | Biosolve | 6914132 | |
| acido acetico | , Biosolve | 1070501 | |
| formiato di ammonio, | Sigma-Aldrich | 70221-25G-F | |
| etere metilico terz-butilico | Merck | 101845 | |
| Fortis 3 μ m C8 100 * 2,1 mm | Fortis | F08-020503 | |
| Prifilter incassato in Ti-PEEK (2 μ m) | Chromsystems | 15011 | |
| 2795 Alliance HPLC system | Waters | 176000491 | |
| Quattro micro API Tandem Quadrupole System | Waters | 720000338 | |
| QuanLynx 4.1 software | Waters | / | Data evaluation software fornito dal produttore dello spettrometro di massa |
Riferimenti
- Fleischmann, C., et al. Assessment of Global Incidence and Mortality of Hospital-treated Sepsis. Current Estimates and Limitations. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 193 (3), 259-272 (2016).
- Dellinger, R. P., et al.
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Ristampe e permessi
