Unraveling i giocatori chiave di immunità umorale: avanzata e ottimizzata protocollo di isolamento del linfocita da Patches murino placche di Peyer

Yavuz F. Yazicioglu; Halil I. Aksoylar; Rinku Pal; Nikolaos Patsoukis; Vassiliki A. Boussiotis

doi:10.3791/58490

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Articolo metodologico

Unraveling i giocatori chiave di immunità umorale: avanzata e ottimizzata protocollo di isolamento del linfocita da Patches murino placche di Peyer

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DOI:

10.3791/58490

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21 novembre 2018

Yavuz F. Yazicioglu¹^,² , Halil I. Aksoylar¹^,² , Rinku Pal¹^,² , Nikolaos Patsoukis¹^,² , Vassiliki A. Boussiotis¹^,²

¹Division of Hematology-Oncology, Beth Israel Deaconess Medical Center, Harvard Medical School, ²Department of Medicine, Beth Israel Deaconess Medical Center, Harvard Medical School

In questo articolo

Sommario

In questo studio, presentiamo un romanzo e un efficace protocollo per l'isolamento dei linfociti da placche di Peyer (PPs), che può essere utilizzati successivamente per saggi funzionali in vivo ed in vitro come pure gli studi cytometric di flusso di follicolare T Helper e cellule centro germinale B.

Abstract

Nella mucosa dell'intestino, cellule immunitarie costituiscono un'entità unica immunologica, che promuove la tolleranza immunitaria mentre contemporaneamente conferimento difesa immunitaria contro gli agenti patogeni. È affermato che di Peyer (PPs) hanno un ruolo essenziale nella rete immune mucosa ospitando diversi T effettrici e sottoinsiemi delle cellule B. Una certa frazione di queste cellule effettrici, follicolare T helper (TFH) e cellule di B del centro germinativo (GC) sono professionalizzata nella regolazione dell'immunità umorale. Quindi, la caratterizzazione di questi sottoinsiemi di cellule all'interno di PPs in termini di loro programma di differenziazione e proprietà funzionali può fornire informazioni importanti sull'immunità mucosale. A tal fine, un metodo facilmente applicabile, efficace e riproducibile di isolamento dei linfociti da PPs sarebbe prezioso per i ricercatori. In questo studio, abbiamo mirato a generare un metodo efficace per isolare i linfociti da mouse PPs con resa elevata delle celle. Il nostro approccio ha rivelato che l'elaborazione come l'uso di reagenti digestivi e agitazione del tessuto, il tessuto iniziale così come colorazione condizioni e selezione dei pannelli di anticorpo delle cellule, hanno una grande influenza sulla qualità e identità dei linfociti isolati e il risultati sperimentali.

Qui, descriviamo un protocollo che consente ai ricercatori di isolare in modo efficiente popolazioni linfocitarie da PPs permettendo la valutazione di base di citometria a flusso riproducibile dei sottoinsiemi di cellule T e B concentrandosi soprattutto su sottoinsiemi di cellule TFH e GC B.

Introduzione

L'intero tratto gastrointestinale dall'inizio alla fine è addobbato con una vasta rete di linfoide che contiene le cellule immunitarie più di qualsiasi altro organo in essere umano e del mouse¹. Peyer di patch (PPs) costituiscono una componente importante del ramo intestinale di questa organizzazione immune cellulare, cosiddetto tessuto linfoide associato all'intestino (GALT)²^,³. All'interno di PPs, migliaia di milioni di antigeni derivati da materiali dietetici, agenti patogeni e commensale microbiota sono campionati continuamente e quando necessarie e appropriato le risposte immunitar....