Le stime del numero di nefrone rene intero sono importanti clinicamente e sperimentalmente, in quanto vi è un'associazione inversa tra il numero di nefrone e un aumentato rischio di malattie renali e cardiovascolari. Qui è dimostrato l'uso del metodo di macerazione acida, che fornisce stime rapide e affidabili del numero di nefrone renale intero.
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Articolo metodologico
Stima del numero di Nephron in rene intero utilizzando il metodo di macerazione acida
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'investitura di nephron si riferisce al numero totale di nefroni a cui è nato un individuo, poiché la nefrogenesi nell'uomo è completata da 36 settimane di gestazione e non si formano nuovi nefroni dopo la nascita. Il numero di nephron si riferisce al numero totale di nefroni misurati in qualsiasi momento post-parto. Sia i fattori genetici che quelli ambientali influenzano sia il numero che l'investitura dei nevi. Comprendere come i geni o i fattori specifici influenzano il processo di perdita o scomparsa di nefrogenesi e di nefrone è importante in quanto gli individui con una dotazione o un numero di nefrone inferiore sono pensati per essere ad un rischio maggiore di sviluppare malattie renali o cardiovascolari. Comprendere come le esposizioni ambientali nel corso della vita di una persona influisce sul numero di nefrone sarà anche vitale per determinare il rischio di malattia futuro. Pertanto, la capacità di valutare in modo rapido e affidabile il numero di nefratti renali interi è un requisito sperimentale di base per comprendere meglio i meccanismi che contribuiscono o promuovono la perdita di nefrogenesi o di nefrone. Qui, descriviamo il metodo di macerazione acida per la stima del numero di nefrone renale intero in base alla procedura descritta da Damadian, Shawayri e Bricker, con lievi modifiche. Il metodo di macerazione acida fornisce stime rapide e affidabili del numero di nefratti (valutati dal conteggio dei glomeruli) che sono entro il 5% di quelli determinati utilizzando metodi più avanzati, seppur costosi, come l'imaging a risonanza magnetica. Inoltre, il metodo di macerazione acida è un ottimo metodo ad alto rendimento per valutare il numero di nefrini in un gran quantità di campioni o condizioni sperimentali.
Introduzione
Il nefrone è sia la struttura di base che l'unità funzionale del rene1. Strutturalmente, il nefrone è costituito dal glomerulo (capillari e podociti) che si trova all'interno della capsula del Bowman e del tubulo renale, costituito dal tubulo prossimale, dal loop di Henle e dal tubulo distale che termina nel condotto di raccolta. Funzionalmente, il ruolo del nefrone è la filtrazione e il riassorbimento di acqua ed elettroliti e la secrezione di rifiuti. In generale, la nefrogenesi è completata a 36 settimane di gestazione negli esseri umani e poco dopo la nascita in diverse specie come il topo e il ratto2. L'investitura ....
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Protocollo
Le forniture e i reagenti elencati di seguito sono per la determinazione del numero di nefrone renale intero in un topo, cioè due reni. Le modifiche per l'uso del metodo di macerazione acida per ratto sono identificate con asterischi. Tutti i protocolli sperimentali sono conformi alla guida nazionale degli istituti di salute per la cura e l'uso degli animali da laboratorio e sono stati approvati dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali presso l'Università del Mississippi Medical Center.
1. procedura di isolamento dei reni
- Pesare il topo (o altre specie) ed eutanizzare con un isoflurano (5%-8%) sovradosaggio o p....
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Risultati
Di seguito sono riportate le stime rappresentative del numero di nefrone del rene intero da un modello murino di ipertensione e un modello genetico di ratto della malattia renale cronica legata all'età. Le caratteristiche chiave di identificazione dei glomeruli, come una struttura sferica con o senza strutture pre-o post-arteriolari o tubolari collegate, sono evidenziate per quelle nuove al metodo di macerazione acida (Figura 1).
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Discussione
Con una buona tecnica sperimentale, il metodo di macerazione acida è ideale per stimare il numero di nefrone in rene intero. Anche se il rene viene sciolto in acido, i glomeruli rimangono in gran parte integri e sono facilmente identificabili, rendendo il conteggio dei singoli glomeruli relativamente facile e diretto. La tecnica di macerazione acida è particolarmente vantaggiosa per diversi motivi. In primo luogo, il metodo di macerazione acida è un metodo rapido e conveniente che richiede relativamente poco in termini d.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto in parte dagli istituti nazionali di salute, cuore nazionale, polmone, e Blood Institute (R01HL107632).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Anestesia con isoflurano | Abbott Laboratories | 05260-05 | |
| Sistema di vaporizzazione e flussometro con isoflurano | Braintree Scientific | VP I | Include fornitura di ossigeno per uso medico |
| Microscopio invertito Leica DMIL LED Leica | Microsystems | DMIL LED | Qualsiasi marca adatta anche |
| Bagno d'acqua digitale | Fisher Scientific | 2239 | Qualsiasi marca adatto |
| ToughCut Forbici chirurgiche fini | Fine Science Tools | 14058-11 | tagliente da 25 mm, lunghezza 11,5 cm; Punte: affilate-affilate; Forma della punta: diritta |
| Micro pinza da dissezione 4 1/4 in. | Biomed Res Instruments, Inc | 10-1760 | con punta curva |
| 5 pollici x 7 pollici. | qualsiasi fonte adatta | n/a | Qualsiasi marca adatta anche |
| Piatto di pesata esagonale in polistirene | Fisher Scientific | 02-2002-100 | Qualsiasi marca adatta anche |
| Lame di rasoio | Fisher Scientific | 12-640 | Acciaio al carbonio a bordo singolo 0,009 |
| Spugne di garza 4 x 4 pollici 8 strati | Fisher Scientific | MSD-1400250 | |
| 10x soluzione salina concentrata tamponata con fosfato (PBS) | Sigma Aldrich | P5493-4L | Diluire a 1x |
| 6 N Soluzione di acido idrocolrico | Sigma Aldrich | 3750-32 | |
| 15 mL provetta da centrifuga conica | Fisher Scientific | 14-959-70C | Qualsiasi marca adatta anche |
| 50 mL provetta da centrifuga conica | Fisher Scientific | 14-959-49A | Qualsiasi marca adatta anche |
| Siringa monouso da 5 ml | Cole Palmer | EW-07944-06 | Qualsiasi marca adatta anche |
| 18G1.5 usa e getta ago | Fisher Scientific | 14-826-5D | Qualsiasi marca adatta anche |
| 21G1.5 ago monouso | Fisher Scientific | 14-826-5B | Qualsiasi marca adatta anche |
| piastre per colture cellulari a 12 pozzetti multipli con coperchio | Cole Palmer | #FW-01959-06 | Qualsiasi marca adatta anche |
| Rack per provette modulari in polipropilene | Cole Palmer | #EW-06733-00 | In grado di contenere provette coniche da 15 e 50 mL; qualsiasi marca adatta anche |
Riferimenti
- Hall, J. E., Guyton, A. C. Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , 13th, Elsevier. Philadelphia, PA. (2016).
- Wang, X., Garrett, M. R. Nephron number, hypertension, and CKD: physiological and genetic insight from humans and animal models. Physiological Genomics.....
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Ristampe e permessi
