Utilizzando sistemi di coltura di multi-step, segnaliamo un in vitro delle cellule B al modello di differenziazione delle cellule di plasma.
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Articolo metodologico
In Vitro modello di differenziazione delle cellule di memoria umana normale B a plasmacellule longevo
In questo articolo
Sommario
Abstract
Le cellule di plasma (pz) secernono grandi quantità di anticorpi e si sviluppano dalle cellule di B che sono state attivate. PC sono rare cellule situate nel midollo osseo o mucosa e garantire l'immunità umorale. A causa della loro bassa frequenza e la posizione, lo studio dei PC è difficile nell'essere umano. Abbiamo segnalato un B per PC modello di differenziazione in vitro utilizzando combinazioni selezionate di citochine e l'attivazione di molecole che consentono di riprodurre la differenziazione delle cellule sequenziale che si verificano in vivo. In questo modello in vitro, cellule di B (MBCs) differenzierà in pre-plasmablasts (prePBs), plasmablasts (PBs), presto PC memoria e infine, longevo pz, con un fenotipo vicino alle loro controparti in individui sani. Abbiamo inoltre sviluppato un accesso aperto bioinformatica strumenti per analizzare le informazioni più importanti dai dati GEP legate alla differenziazione di PC. Queste risorse possono essere utilizzate per studiare umano B alla differenziazione di PC e nello studio corrente, abbiamo studiato la regolazione dell'espressione genica di fattori epigenetici durante B umana alla differenziazione di PC.
Introduzione
La differenziazione dei linfociti B a plasmacellule (pz) è essenziale per l'immunità umorale e proteggere l'ospite contro le infezioni1. B alla differenziazione di PC è associata con importanti cambiamenti nel metabolismo e capacità di trascrizione per ospitare a secrezione dell'anticorpo. I fattori di trascrizione che controllano B alla differenziazione di PC sono stati ampiamente studiati e rivelate reti esclusive tra cui trascrizione B - e PC-specifici fattori (TFs)2. In cellule di B, PAX5, BCL6 e BACH2 TFs sono i guardiani delle cellule B identità2,3. Induzio....
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Protocollo
Il protocollo segue le linee guida in conformità con l'accordo del centro ospedale università di Montpellier per le risorse biologiche e la dichiarazione di Helsinki.
1. in Vitro normale modello di differenziazione delle cellule di Plasma
Nota: Pezzi vengono generati attraverso una cultura di quattro fasi11,12,13.
-
Differenziazione e amplificazione delle cellule di b
- Utilizzare globuli periferici da volontari sani per la purificazione delle cellule di B di memoria.
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Risultati
La procedura complessiva di differenziazione in vitro di PC normale è rappresentata nella Figura 1. Utilizzando il protocollo presentato qui, potremmo generiamo un'adeguata quantità di cellule che non potrebbero essere ottenuti con campioni ex vivo umano. Anche se è stato studiato il ruolo della complessa rete di fattori di trascrizione coinvolti nella differenziazione dei PC, i meccanismi che regolano la reti di trascrizione chiave PC differenziazione ancora.......
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Discussione
Negli umani, PC sono rare cellule con fasi di differenziazione che si svolgono in luoghi anatomici che ostacolare la caratterizzazione biologico completo. Abbiamo sviluppato un B in vitro per modello di differenziazione PC utilizzando sistemi di coltura multifase dove varie combinazioni di molecole di attivazione e citochine vengono successivamente applicate al fine di riprodurre il differenziamento sequenziale che si verificano nella diversi organi/tessuti in vivo11,1.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni dal francese INCA (Institut National du Cancer) Institute (PLBIO15-256), ANR (Tie-Skip) e cancro ITMO (MM & TT).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| perline magnetiche anti-CD2 | Invitrogen | 11159D | |
| Anti-CD138-APC | Beckman-Coulter | B49219 | |
| Anti-CD19-APC | BD | 555415 | |
| Anti-CD20-PB | Beckman-Coulter | B49208 | |
| Anti-CD27-PE | BD | 555441 | |
| Anti-CD38-PE | Beckman-Coulter | A07779 | |
| Anti-istidina | R& D Systems | MAB050 | |
| CpG ODN(PT) | sigma | T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*T*T*T*C* G*T*T*T*C*G*T*T | |
| transferina umana | Sigma-Aldrich | T3309 | |
| IFN-α | Merck | Intron A | |
| IMDM | Gibco | 31980-022 | |
| Ricombinante Umano CD40L-hi | R& D Systems | 2706-CL | |
| Umano Ricombinante APRIL | R& D Systems | 5860-AP-010 | |
| IL-10 umano ricombinante | R& D Systems | 217-IL-IL-Ricombinante | |
| Umano IL-15 | Peprotech | 200-15-10ug | |
| Ricombinante Umano IL-2 Proteina | R & D Systems | 202-IL-IL-Ricombinante | |
| Umano IL-6 | Peprotech | 200-06 |
Riferimenti
- Shapiro-Shelef, M., Calame, K. Regulation of plasma-cell development. Nature Reviews Immunology. 5 (3), 230-242 (2005).
- Nutt, S. L., Hodgkin, P. D., Tarlinton, D. M., Corcoran, L. M. The generation of antibody-secreting plasma cells. Nature Reviews Immunology. 15 (3), 160-17....
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Ristampe e permessi
