Qui presentiamo un elegante protocollo per la valutazione in vivo di vaccino efficacia e host le risposte immunitarie. Questo protocollo può essere adattato per i modelli di vaccino che studiano virale, batterica o parassitari patogeni.
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Articolo metodologico
Valutazione delle risposte ospite-patogeno e l'efficacia del vaccino nei topi
In questo articolo
Sommario
Abstract
I vaccini sono una meraviglia medica di 20th secolo. Hanno drasticamente ridotto la morbilità e la mortalità causata da malattie infettive e contribuito ad un aumento notevole nella speranza di vita intorno al globo. Tuttavia, determinare l'efficacia del vaccino rimane una sfida. La prova emergente suggerisce che l'attuale vaccino acellulare (aPV) per Bordetella pertussis (pertosse del b.) induce immunità non ottimali. Di conseguenza, una sfida importante è la progettazione di un vaccino di prossima generazione che induce immunità protettiva senza gli effetti collaterali di un vaccino a cellule intere (wPV). Qui descriviamo un protocollo che abbiamo usato per testare l'efficacia di un adiuvante promettente, romanzo che inclina le risposte immunitarie ad un fenotipo Th1/Th17 protettivo e promuove una migliore distanza di una sfida di b. pertussis dal tratto respiratorio murino. Questo articolo viene descritto il protocollo per l'immunizzazione del mouse, inoculazione batterica, tessuto raccolta e analisi delle risposte immunitarie. Utilizzando questo metodo, all'interno del nostro modello, abbiamo con successo Abbiamo delucidato meccanismi cruciali suscitate da un vaccino di pertosse acellulare promettente, generazione. Questo metodo può essere applicato a qualsiasi modello di malattia infettiva al fine di determinare l'efficacia del vaccino.
Introduzione
I vaccini rappresentano uno dei più grandi successi di salute pubblica del ventesimo secolo, ma noi ancora non comprendiamo pienamente i meccanismi da cui successo vaccini stimolano l'immunità protettiva. L'identificazione di marcatori molecolari (ad es., gli indicatori di attivazione delle cellule, espansione dei sottotipi cellulari e pattern di espressione genica) indotto dopo vaccinazione offre una pletora di informazioni per la previsione e generando un efficace risposta immunitaria. La complessità delle risposte ospite-patogeno non può essere replicata adeguatamente utilizzando in vitro delle cellule di coltura sistemi1. ....
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Protocollo
Tutti gli esperimenti con gli animali vivi sono stati condotti seguendo un protocollo approvato da The Ohio State University IACUC conformemente agli orientamenti IACUC. Topi C57BL/6 sono stati utilizzati in tutte le vaccinazioni e infezioni. Topi maschi e femminili sono utilizzati in ogni gruppo secondo le linee guida NIH. Il numero di animali per ogni gruppo è stato determinato dai calcoli di potere basati sulle differenze previste nel risultato fra gruppi sperimentali. Ad esempio, 8 topi per ogni gruppo produrrà 80% della potenza a α = 0.05 (2-sided) per un esempio di 2 t- test per rilevare differenze nel risultato di interesse di 1,33 deviazioni standard ....
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Risultati
Il modello descritto illustra un metodo per valutare l'efficienza del vaccino e le risposte immunitarie durante le interazioni ospite-patogeno. Figura 1 illustra la pianificazione rappresentante vaccino usata per immunizzare e infettare i topi e tessuti per l'analisi della raccolta. Figura 2 viene illustrato il programma di installazione del sistema di anestesia impiegato per indurre i topi, consentendo gli investigatori a conseg.......
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Discussione
Il protocollo completo descritto qui per studiare l'immunità indotta dal vaccino all'infezione di b. pertussis permetterà anche la valutazione della risposta ospite ad una varietà di altri agenti patogeni. Il protocollo viene descritto metodi per consegnare le immunizzazioni, determinare vaccino efficacia segue agente patogeno sfida e dissezione parallela della funzione immune. Adattare il protocollo al fine di studiare altri agenti patogeni, diversi parametri avrebbero bisogno di essere modificati. Questi inclu.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato da fondi 1R01AI125560-01 e Start-up da The Ohio State University.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Camera di induzione da 2 litri | Vet Equip | 941444 | |
| qualsiasi marca è appropriata | |||
| Bordet Gengou Agar Base | BD bioscience | 248200 | |
| Caseina | Sigma | C-7078 | |
| Acidi casamino | VWR | J851-500G | Filtro Scholte (SS) componenti dei media |
| Acido L-glutammico | Prodotti di ricerca Int | G36020-500 | |
| L-Prolina | Prodotti di ricerca Int | P50200-500 | |
| Cloruro di sodio | Fisher | BP358-10 | |
| Fosfato di potassio monobasico | Fisher | BP362-1 | |
| Cloruro di potassio | Fisher | P217-500 | |
| Cloruro di magnesio esaidrato | Fisher | M2670-500G | |
| Cloruro di calcio | Fisher | C75-500 | |
| Tris base | Fisher | BP153-1 | |
| L-cisteina HCl | Fisher | BP376-100 | SS media suplements |
| Solfato ferroso eptaidrato | Sigma | F-7002 | |
| Niacina | Prodotti di ricerca Int | N20080-100 | |
| Glutatione | Prodotti di ricerca Int | G22010-25 | |
| Acido ascorbico | Prodotti di ricerca Int | A50040-500 | |
| RPMI 1640 | ThermoFisher Scientific | 11875093 | |
| FBS | Sigma | F2442-500mL | qualsiasi fonte statunitense, gentamicina non inattivata dal calore |
| ThermoFisher Scientific | 15710064 | ||
| B-mercaptoetanolo | Fisher | BP176-100 | |
| 15mL dounce macina tessuti | Wheaton | 357544 | qualsiasi marca simile è appropriato |
| Omogeneizzatore manuale senza fili | Kontes/Sigma | Z359971-1EA | qualsiasi marca simile è appropriata |
| Strumenti - forbici, forbici curve, pinze, pinze fini, divaricatori triangolari | qualsiasi marca è appropriata | ||
| Siringhe da 3 ml | BD bioscience | 309657 | |
| tubi conici da 15 ml | Fisher | ||
| provette per microfuge da 1,5 ml | Denville | C2170 | |
| 70um filtri cellulari | Fisher | ||
| piastre da 60 mm | ThermoFisher Scientific | 130181 | |
| piastre per coltura tissutale a 48 pozzetti | ThermoFisher Scientific | 08-772-1C | |
| Siringa da insulina da 1 ml 28G1/2 | Fisher Scientific/Excel Int. | 14-841-31 | |
| Mouse IFN-gamma ELISA Ready-SET-Go! Kit | Invitrogen / eBioscience | 50-173-21 | |
| Mouse IL-17 ELISA Ready-SET-Go! Kit | Invitrogen / eBioscience | 50-173-77 | |
| Mouse IL-5 ELISA Ready-SET-Go! Kit | Invitrogen / eBioscience | 50-172-09 |
Riferimenti
- Tacken, P. J., Figdor, C. G. Targeted antigen delivery and activation of dendritic cells in vivo: steps towards cost effective vaccines. Seminars in Immunology. 23 (1), 12-20 (2011).
- Kilgore, P. E., Salim, A. M., Zervos, M. J., Schmitt, H. J.
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Ristampe e permessi
