Questo articolo viene descritto l'incapsulamento di falcarindiol in nanoparticelle di nm 74 del lipido-rivestite. L'assorbimento cellulare delle nanoparticelle di cellule staminali umane in goccioline del lipido è monitorato da formazione immagine di fluorescenza e confocale. Le nanoparticelle sono fabbricate con il metodo di iniezione rapida di solvente spostando e loro dimensione viene misurata con la tecnica di dispersione della luce dinamica.
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Articolo metodologico
Assorbimento di nuove nanoparticelle rivestite con lipidi contenenti Falcarindiol di cellule staminali mesenchimali umane
In questo articolo
Sommario
Abstract
Le nanoparticelle sono al centro di un crescente interesse in sistemi di drug delivery per la terapia del cancro. Nanoparticelle lipidiche rivestite sono ispirate nella struttura e dimensione lipoproteine a bassa densità (LDL) perché le cellule tumorali hanno una maggiore necessità di colesterolo a proliferare, e ciò è stata sfruttata come un meccanismo per la consegna di farmaci anticancro per cancro cellule. Inoltre, a seconda di chimica di droga, che incapsula il farmaco può essere vantaggioso per evitare il degrado della droga durante la circolazione in vivo. Pertanto, in questo studio, questo disegno è usato per fabbricare nanoparticelle rivestite con del lipido della falcarindiol farmaco anticancro, fornendo un potenziale nuovo delivery system di falcarindiol al fine di stabilizzare la sua struttura chimica contro il degrado e migliorare la assorbimento dai tumori. Nanoparticelle di Falcarindiol, con un monostrato di fosfolipidi e colesterolo che incapsula il nucleo di droga purificato della particella, sono state progettate. Il rivestimento monostrato lipidico è costituito da 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC), colesterolo (Chol) e 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[methoxy(polyethylene glycol)-2000] (DSPE PEG 2000) insieme con il fluorescente etichetta DiI (rapporti molari di 43:50:5:2). Le nanoparticelle sono fabbricate utilizzando il metodo di iniezione rapida, che è una tecnica semplice e veloce per far precipitare le nanoparticelle di buono-solvente per lo scambio di anti-solvente. Si compone di un'iniezione rapida di una soluzione di etanolo contenente i componenti delle nanoparticelle in una fase acquosa. Le dimensioni delle nanoparticelle fluorescenti sono misurata mediante diffusione dinamica della luce (DLS) a 74,1 ± 6,7 nm. L'assorbimento delle nanoparticelle è testato in cellule staminali mesenchimali umane (hMSCs) e imaging utilizzando fluorescenza e microscopia confocale. L'assorbimento delle nanoparticelle è osservata in hMSCs, suggerente il potenziale per tale un sistema di consegna di droga stabile per falcarindiol.
Introduzione
Nanoparticelle lipidiche rivestite stanno vedendo un crescente interesse per quanto riguarda la loro funzione come sistemi di drug delivery per cancro terapia1. Tumori hanno una riprogrammazione del lipido-metabolica alterata2 e una maggiore necessità di colesterolo a proliferare3. Essi dei overexpress LDLs1 e prendere in più LDLs rispetto alle cellule normali, nella misura in cui conte di LDL di un malato di cancro possono anche andare verso il basso4. L'assorbimento di LDL promuove fenotipi aggressivo5 conseguente proliferaz....
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Protocollo
1. nanoparticella sintesi di solvente rapida tecnica di spostamento
- Impostare quanto segue per preparazione di nanoparticelle: un concentratore di blocco riscaldatore/campione, un essiccatore, un sistema di erogazione digitale con una siringa di vetro da 1 mL, un flaconcino di vetro di 12 mL, un agitatore magnetico, una pulce magnetico (15 mm x 4,5 mm, in una forma cilindrica con rivestimento di politetrafluoroetilene [PTFE]) dentro il flaconcino di vetro e un evaporatore rotatorio.
- Erogare 2,4 mL 250 µM falcarindiol Stock disciolto in 70% EtOH miscela acqua in un flaconcino di scintillazione.
- Evaporare la frazione liquida, con il concent....
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Risultati
Due diversi tipi di nanoparticelle sono stati fabbricati, vale a dire puro falcarindiol nanoparticelle e nanoparticelle rivestite con lipidi falcarindiol. Le varie concentrazioni di lipidi e di colesterolo sono state testate. Come illustrato nella tabella 1, le nanoparticelle non patinate formata in acqua e misurato in PBS avevano un diametro di 71 ± 20,3 nm con un indice di polidispersione (PDI) di 0,571. Tali parametri sono stati misurati su un analizzatore di liste di .......
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Discussione
Un protocollo dettagliato per la realizzazione di nanoparticelle lipidiche-rivestite per il drug delivery con il semplice, metodo di iniezione rapida veloce, riproducibile e scalabile di solvente spostando era seguita27,28 e viene presentato in questa carta, come applicato a falcarindiol. Controllando la velocità dell'iniezione della fase organica in fase acquosa e utilizzando i lipidi rivestimento a concentrazioni appropriate per rivestire il nucleo di falcarind.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori ringraziano il Dr. Moustapha Kassem (Odense University Hospital, Danimarca) per le cellule staminali mesenchimali umane. Gli autori ringraziano il centro di Bioimmagini del medico danese per l'accesso ai loro microscopi. Gli autori ringraziano i fondamenti di Carlsberg e Villum sostegno finanziario (per E.A.C.). Gli autori riconoscono il sostegno finanziario fornito dal premio Niels Bohr cattedra dalla Danish National Research Foundation.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Fiala con collo a vite da 12 mL (vetro trasparente, filettatura 15-425, 66 X 18,5 mm) | Microlab Aarhus A/S | ML 33154LP | |
| Piastre a 6 pozzetti | Greiner Bio One International GmbH | 657160 | |
| Absolute Ethanol | EMD Millipore (VWR) | EM8.18760.1000 | |
| Cloroformio | Rathburn Chemicals Ltd. | RH1009 | |
| Colesterolo | Avanti Polar Lipids, Inc. | 700000P | |
| Zeiss LSM510 | |||
| Vetrini coprioggetto spessore #1.5 | Paul Marienfeld GmbH & Co | 117650 | |
| Essiccatore | Autocostruito | ||
| DiI | Invitrogen | D282 | |
| DLS | Beckman Coltro | DelsaMAXpro 3167-DMP | |
| DSPC (Cloroformio stock) | Avanti Polar Lipids, Inc. | 850365C | |
| DSPE PEG 2000 (cloroformio) | Avanti Polar Lipids, Inc. | 880120C | |
| eVol XR | SGE scienza analitica, Trajan Scientific Australia Pty Ltd. | 2910200 | |
| Siero fetale bovino | Gibco | 10270-106 | |
| Microscopio a fluorescenza | Olymous IX81 | con manuale TIRF e Andor iXon EMCCD | |
| Incubatore | Panasonic | MCO-18AC | |
| Pulce magnetica | VWR Chemicals | 15 x 4,5 mm | Forma cilindrica con rivestimento in PTFE |
| Agitatore magnetico | IKA | RT-10 | |
| Minimo Essential Media | Gibco | 32561-029 | |
| Compresse PBS per colture cellulari | VWR Chemicals | 97062-732 | |
| Pen/strep | VWR Chemicals | 97063-708 | |
| Soluzione tampone fosfato soluzione salina (PBS, pH 7,4) | Thermo Fisher | 10010031 | |
| Evaporatore rotante | Rotavapor, Bü chi Labortechnik AG | R-210 | |
| Concentratore di campioni | Stuart, Cole-Parmer Instrument Company, LLC | SBHCONC/1 |
Riferimenti
- Firestone, R. A. Low-Density Lipoprotein as a Vehicle for Targeting Antitumor Compounds to Cancer Cells. Bioconjugate Chemistry. 5 (2), 105-113 (1994).
- Beloribi-Djefaflia, S., Vasseur, S., Guillaumond, F. Lipid metabolic reprogramming in cancer cells. Oncogenesis.....
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Ristampe e permessi
