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Articolo metodologico

Acquisizione e analisi dei dati nel cervello evocato Audiometria di risposta nei topi

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DOI:

10.3791/59200

10 maggio 2019

In questo articolo

Sommario

L'audiometria di risposta evocata dal tronco encefalico è uno strumento importante nella neurofisiologia clinica. Al giorno d'oggi, l'audiometria di risposta evocata dal tronco encefalico viene applicata anche nella scienza di base e negli studi preclinici che coinvolgono modelli animali farmacologici e genetici. Qui forniamo una descrizione dettagliata di come le risposte del tronco encefalico uditivo possono essere registrate e analizzate con successo nei topi.

Abstract

Cervello evocato risposta audiometria (BERA) è di rilevanza centrale nella neurofisiologia clinica. Come altre tecniche di potenziale evocato (EP), come potenziali evocati visivamente (VEP) o somatosensoriali, i potenziali uditivi evocati (AImp) sono innescati dalla presentazione ripetitiva di stimoli identici, risposta elettroencefalografica (EEG) di cui viene successivamente mediata con conseguente distinte deviazioni positive (p) e negative (n). Nell'uomo, sia l'ampiezza che la latenza dei singoli picchi possono essere utilizzate per caratterizzare le alterazioni nella sincronizzazione e nella velocità di conduzione nei circuiti neuronali sottostanti. È importante sottolineare che gli AEP sono applicati anche nella scienza di base e preclinica per identificare e caratterizzare la funzione uditiva nei modelli animali farmacologici e genetici. Ancora di più, vengono utilizzati modelli animali in combinazione con test farmacologici per studiare potenziali benefici nel trattamento della perdita dell'udito neurosensoriale (ad esempio, deficit uditivi indotta dall'età o dal rumore). Qui forniamo una descrizione dettagliata e integrativa di come registrare le risposte uditive con cellule staminali cerebrali (ADR) nei topi utilizzando l'applicazione click e tone-burst. Un obiettivo specifico di questo protocollo è l'alloggiamento degli animali pre-sperimentale, l'anestesia, la registrazione ABR, i processi di filtraggio ABR, l'analisi automatizzata della funzione di crescita dell'ampiezza basata sulle wavelet e il rilevamento della latenza.

Introduzione

Un aspetto centrale della fisiologia cerebrale è la sua capacità di elaborare le informazioni ambientali con conseguente produzione intrinseca o estrinseca diversa, come l'apprendimento, la memoria, le reazioni emotive o le risposte motorie. Vari approcci sperimentali e diagnostici possono essere utilizzati per caratterizzare la reattività elettrofisiologica dei singoli tipi di cellule neuronali o ammassi/insiemi di neuroni all'interno di un circuito neuronale correlato allo stimolo. Queste tecniche elettrofisiologiche coprono diverse dimensioni spatiotemporali su micro, meso e macroscala1. Il livello di microscala comprende la tensione e gli a....

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Protocollo

Tutte le procedure sugli animali sono state eseguite secondo le linee guida del Consiglio tedesco sulla cura degli animali e tutti i protocolli sono stati approvati dal comitato istituzionale e nazionale locale per la cura degli animali (Landesamt fàr Natur, Umwelt, und Verbraucherschutz, Stato Ufficio della Renania Settentrionale-Vestfalia, Dipartimento della Natura, dell'Ambiente e del Consumismo [LANUV NRW], Germania). Gli autori certificano inoltre che tutta la sperimentazione animale è stata effettuata in conformità con il National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (NIH Publications n. 80-23) riveduto 1996 o il UK Animals (Proc....

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Risultati

Le registrazioni ABR evocate da raffiche di tipo click- e tono possono essere utilizzate per valutare le differenze di soglia dell'udito, la funzione di crescita dell'ampiezza e il confronto della latenza. ADR a cui è esibito con il clic nella modalità di aumento SPL sono illustrati nella Figura 1 per i controlli e due linee di mouse mutantiesemplari che sono carenti per il canale Cav3.2 T-type voltage-gated Ca2

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Discussione

Questo protocollo fornisce una descrizione dettagliata e integrativa di come registrare le risposte del tronco encefalico evocato uditivo nei topi. Si pone un'attenzione specifica sul pretrattamento degli animali, l'anestesia e i potenziali fattori di confusione metodologica. Questi ultimi includono, tra gli altri, il sesso, la linea del mouse, l'età e le condizioni abitative. Va notato che tutti questi fattori possono avere un impatto sulla perdita dell'udito sensoriale e sugli aspetti fondamentali dell'elaborazione udi.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

Gli autori desiderano ringraziare la Dott.ssa Christina Kolb (Centro tedesco per le malattie neurodegenerative[D-NE]) e il Dr. Robert Stark per l'assistenza nell'allevamento degli animali e nell'assistenza sanitaria degli animali. Questo lavoro è stato sostenuto finanziariamente dall'Istituto federale per la droga e i dispositivi medici (Bundesinstitut fàr Arzneimittel und Medizinprodukte, BfArM, Bonn, Germania).

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Software AEP/OAE per RZ6 (software BioSigRZ)Tucker-Davis Technologies (TDT)BioSigRZ
Microscopio chirurgico binoculare per ingrandimentoZeiss Stemi 20000000001003877, 43554000000000, 0000001063306, 4170530000000, 4170959255000, 4551820000000, 4170959040000, 4170959050000
Gabbie (Macrolon)Techniplast1264C, 1290D
Carprox vet, 50mg/ mlVirbac Tierarzneimittel GmbHPZN 11149509
Sorgente di luce freddaSchott KL2500 LCD9.705 202
Applicatori di punte in cotone (sterili)Carl RothEH12.1
Gabbia di Faraday in metallo a rete su misura (acciaio inossidabile, spessore 2 mm, maglia 1 cm)
5% (crema per occhi e naso Bepanthen)Bayer Vital GmbHPZN: 01578681
Elettrodi monouso sottocutanei in acciaio inox Ago
, 27GA, 12mm
Rochester Electro-Medical, Inc.S03366-18
Teli chirurgici (sterili)HartmannPZN 0366787
Etanolo, 70%Carl Roth9065.5
1/4'' Kit microfono di calibrazione della misura in campo liberoTucker-Davis Technologies (TDT)PCB-378C0
Guanti (sterili)Unigloves1570
Graefe Forcipe-curvo, seghettatoFST11052-10
GraphPad Prism 6 Software, V6.07GraphPad Prism Software, Inc.https://www.graphpad.com/
Sterilizzatore per strumenti chirurgici a base di caloreFST18000-50
Homeothermic
riscaldamento tranciato
ThermoLux461265 / -67
Ketanest S (Ketamina), 25mg/mlPfizerPZN 08707288
Ringer' s soluzione (sterile)B.BraunPZN 01471434
Software MatlabMathWorks, Inc.
Medusa 4 canali a basso imped. HeadstageTucker-Davis Technologies (TDT)RA4LI
Medusa Pre-Amplificatore/Digitalizzatore a 4 canaliTucker-Davis Technologies (TDT)RA4PA
PCB MicrofonoPieztronics378C01
Altoparlante multicampo - StereoTucker-Davis Technologies (TDT)Oscilloscopio MF1-S
TektronixDPO3012
Scheda ottica PC1 express per interfaccia Optibit)Tucker-Davis Systems (TDT)PO5e
Askina Braucel pads (pad assorbenti in cellulosa)B.BraunPZN 8473637
Preamplifier PCB Pieztronics480C02
RZ6 Multi I/O Processor system (BioSigRZ)Tucker-Davis Technologies (TDT)RZ6-A-PI
0,9% soluzione salina (NaCl, sterile)B. BraunPZN:8609255
Software SigGenRZTucker-Davis Technologies (TDT)https://www.tdt.com/
Software R (versione 3.2.1) + Reshape 2 (Versione 1.4.1) + ggplot 2 (versione 1.0.1) + datatable (versione 1.9.4), + gdata (versione 2.13.3), + pastecs (versione 1.3.18), + waveslim (versione 1.7.5), + MassSpecWavelet (versione 1.30.0)The R Foundation, R Core Team 2015Open Source Software (liberamente distribuibile)
Cabina fonoassorbenteMed Associates Inc.ENV-018V
Pinze standard, lunghezza 12 cm e 14,5 cmFST11000-12, 11000-14
Nastro di seta BSNmedical GmbH & Co. KGPZN 00397109
Pinze per tessuti - 1x2 denti 12 cmFST11021-12
Armadio ventilato UniprotectBioscapeTHF3378
Armadio ventilatoTecniplast9AV125P
Xilazina (Rompun), 2%Bayer Vital GmbHPZN 1320422
Dexpanthenole su misura https://de.mathworks.com/products/matlab.html

Riferimenti

  1. Sporns, O., Tononi, G., Kotter, R. The human connectome: A structural description of the human brain. PLOS Computational Biology. 1 (4), e42(2005).
  2. Bebarova, M. Advances in patch clamp technique: towards higher quality and quantity. Ge....

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Ristampe e permessi

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Risposta uditiva del tronco encefalicoStimolazione a raffiche di toni clickAnalisi wavelet automatizzataRilevazione della soglia ABRAnalisi della latenza ABRProfilazione uditiva del topoCabina per l attenuazione del suonoPosizionamento di elettrodi sottocutaneiCalibrazione del preamplificatore