Qui, descriviamo lo sviluppo di un modello murino clinicamente rilevante del cancro al fegato che riassume le caratteristiche immunitarie tipiche del cancro epatocellulare (HCC).
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Articolo metodologico
Un modello di topo ortotopico oncogenico indotto dall'epatocito del cancro epatocellulare in aumento nell'impostazione dell'infiammazione epatica e della fibrosi
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'assenza di un modello animale clinicamente rilevante che affronti le caratteristiche immunitarie tipiche del cancro epatocellulare (HCC) ha ostacolato significativamente la chiarimento dei meccanismi sottostanti e lo sviluppo di strategie immunoterapeutiche innovative. Per sviluppare un modello animale ideale che riassume l'HCC umano, i topi maschi immunocompetenti C57BL/6J ricevono prima un'iniezione di tetracloruro di carbonio (CCl4)per indurre la fibrosi epatica, quindi ricevono epatociti oncogenici istogenici-normali dal giovane maschio L'antigene SV40 T (TAg)-mice transgenico (MTD2) per inoculazione intrasplenica (ISPL). Androgeno generato in topi maschi destinataria alla pubertà avvia l'espressione TAg sotto il controllo di un promotore specifico del fegato. Di conseguenza, gli epatociti trasferiti diventano cellule tumorali e formano masse tumorali nell'impostazione della fibrosi epatica/cirrosi. Questo nuovo modello imita l'inizio e la progressione umana dell'HCC nel contesto della fibrosi/cirrosi epatica e riflette le caratteristiche più tipiche dell'HCC umano, inclusa la disfunzione immunitaria.
Introduzione
Il cancro epatocellulare (HCC) è il tipo di cancro in più rapido aumento negli Stati Uniti (USA)1,2,3. Ogni anno, circa 850.000 nuovi casi vengono diagnosticati4,5 e 700.000 pazienti muoiono per questa malattia letale6,7,8,9,10 , rendendola la seconda causa più alta di morte legata al cancro al mondo. La gestione dell'HCC comprende resezione chirurgica, tra....
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Protocollo
NOTA: Tutta la procedura, inclusi i soggetti animali, è stata approvata dall'IACUC presso l'Università del Missouri. Tutti i topi hanno ricevuto cure umane secondo i criteri delineati nella "Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio". La seguente procedura per l'isolamento cellulare e l'inoculazione deve essere eseguita in un cofano. Tutti gli esecutori devono indossare l'attrezzatura protettiva personale standard per la manipolazione dei topi e dei tessuti.
1. Induzione di fibrosi e cirrosi del fegato con iniezione IP di tetracloruro di carbonio (CCl4)
NOTA: vedere la figura 1.
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Risultati
Gli epatociti oncogeni isolati dai topi transgenici TAg (Figura 2) sono stati seminati nel fegato di topi selvatici mediante iniezione intrasplenica (Figura 3). Gli epatociti trapiantati con successo e in modo affidabile sono cresciuti con successo e in modo affidabile tumori HCC ortotopici (Figura 4) con antigene tumorale specifico SV40 TAg (Figura 5) nell'impostazione di infiammazione epatica e fibrosi ( Figura1).
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Discussione
Con questo protocollo, abbiamo stabilito un modello murino affidabile e riproducibile di HCC che imita l'inizio e la progressione umana dell'HCC. Clinicamente, molti fattori di rischio successivamente inducono lesioni epatiche, fibrosi epatica, cirrosi e la fase finale di HCC. Nel nostro protocollo, l'iniezione IP di CCl4 viene utilizzata per produrre prima fibrosi epatica in topi selvatici, che consente ai successivi epatociti oncogeni di formare i tumori nell'impostazione della fibrosi epatica. Abbiamo scope.......
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Dichiarazioni
Non ce ne sono da dichiarare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è supportato da NIH/NCI R01 CA164335-01A1 (K. F. Staveley-O'Carroll, PI) e NIH/NCI R01CA208396 (Mark Kester, Guangfu Li, Kevin F. Staveley-O'Carroll).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Macchina per anestesia | VETEQUIP | IMPAC6 | macchina per anestesia per chirurgia |
| Ago a farfalla | BD | 8122963 | Ago utilizzato per la perfusione epatica |
| C57BL / 6 topi | Jackson Lab | 000664 | Topi utilizzati nel prototolo |
| Carprofene | CRESCENT CHEMICAL | 20402 | carprofene per il rilascio del dolore |
| Cell Strainer | CORNING | REF 431751 | Filtro cellulare, 70µ m, per isolamento di epatociti |
| Centrifuga | Beckman Coulter | Allegra X-30R | centrifuga per isolamento cellulare |
| Clips | Teleflex Medical | REF 523700 | Clip in Titanio per |
| Microscopio Milza | Zeiss | Primovert | Microscopio per osservazione cellulare |
| Topi Mtd2 | N/A | Dono del Dr. William A Tenuto presso il Roswell Park Cancer Institute nel 2002, mantenuto nel nostro laboratorio | |
| Ago | BD | REF 305109 | Ago BD precisionglide, 27G x 1/2 (0,4 mm x 13 mm) |
| Sutura | ETHICON | J303H | sutura VICRYL rivestita |
| SV40 T Ag anticorpo | Abcam | ab16879 | anti-SV40 Anti-antigene T per siringa IHC |
| BD | REF 309626 | Siringa TB da 1 mL per iniezione cellulare | |
| Trypan blue | SIGMA | T 8154 | Soluzione di trypan blue per test di vitalità cellulare |
| Clip per ferite | Reflex | reflex9, Part. No. 201-1000 | clip per ferite in acciaio inox per chiusura della ferita |
Riferimenti
- O'Connor, S., Ward, J. W. Hepatocellular carcinoma - United States. Morbidity and Mortality Weekly Report. 59, 517-520 (2010).
- Petrick, J., Kelly, S., Altekruse, S., McGlynn, K., Rosenberg, P.
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Ristampe e permessi
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