Gli adipociti esistono in depositi discreti e hanno ruoli diversi all'interno dei loro microambienti unici. Poiché vengono scoperte le differenze regionali nel carattere e nella funzione degli adipociti, l'identificazione standardizzata e l'isolamento dei depositi sono fondamentali per l'avanzamento del campo. Qui, vi presentiamo un protocollo dettagliato per l'escissione di vari depositi adiposi del topo.
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Articolo metodologico
Identificazione e dissezione dei diversi depositi di adiposi del mouse
In questo articolo
Sommario
Abstract
I tessuti adipose sono organi complessi con una vasta gamma di funzioni, tra cui lo stoccaggio e la mobilitazione dell'energia in risposta alle esigenze locali e globali, il disaccoppiamento del metabolismo per generare calore e la secrezione di adipochine per regolare l'omeostasi di tutto il corpo e risposte immunitarie. La ricerca emergente sta identificando importanti differenze regionali nei profili di sviluppo, molecolari e funzionali degli adipociti situati in depositi discreti in tutto il corpo. Diverse proprietà dei depositi sono rilevanti dal punto di vista medico poiché le malattie metaboliche spesso dimostrano effetti specifici del deposito. Questo protocollo fornirà agli sperimentatori una dettagliata guida anatomica dell'atlante e di dissezione per l'identificazione e l'escissione riproducibili e accurate di diversi tessuti adipose del topo. La dissezione standardizzata dei depositi adipose discreti consentirà di confrontare dettagliatamente le loro caratteristiche molecolari e metaboliche e i contributi agli stati patologici locali e sistemici in varie condizioni nutrizionali e ambientali.
Introduzione
I tessuti adipose svolgono un ruolo fondamentale nell'omeostasi di tutto il corpo, compreso lo stoccaggio e il rilascio di energia in risposta alle esigenze locali e globali, alla termoregolazione e alla secrezione di adipochine per regolare l'equilibrio energetico, il metabolismo e le risposte immunitarie1 , 2. Gli adipociti sono distribuiti in tutto il corpo in depositi discreti, e in alcuni casi svolgono ruoli specializzati all'interno dei loro microambienti3,4,5. Storicamente, lo studio del tessuto adiposo si è ce....
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Protocollo
Tutte le procedure sugli animali vengono eseguite con l'approvazione dell'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) dell'Università del Michigan.
1. Eutanasia
NOT: Ai fini di questo protocollo video, vengono utilizzati mouse C57BL/6J di 4-6 mesi.
- Posizionare il mouse in una camera vaporizzatore isoflurane e regolare la portata dell'isoflurane al 5% o superiore. Continuare l'esposizione agli isoflurani fino a un minuto dopo che la respirazione si ferma. Quindi rimuovere il mouse dalla camera vaporizzatore e confermare l'eutanasia utilizzando una misura secondaria approv....
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Risultati
L'identificazione e l'isolamento di vari depositi adipose del topo possono essere raggiunti utilizzando il protocollo descritto in precedenza. Le posizioni anatomiche lorde dei depositi sottocutanei (A, E-F), marrone (B), viscerali (C, D, G-J) e popliteal (K) sono mostrate nella Figura 2.
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Discussione
Poiché l'importanza delle diverse caratteristiche molecolari e funzionali dei cluster di adipociti discreti è sempre più riconosciuta, è fondamentale che i ricercatori all'interno del campo identifichino uniformemente ed estincano depositi adiposi per ulteriori analisi. Ad oggi, esistono pochi protocolli per la localizzazione standardizzata e l'isolamento della vasta gamma di depositi adiposi del topo. I metodi pubblicati in precedenza si concentrano principalmente su uno o due depositi e mancano dei dettagli necessari p.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
O.A.M. è supportato da sovvenzioni NIH DK062876 e DK092759; D.P.B. è supportato dal programma di formazione per gli scienziati medici dell'Università del Michigan (T32GM007863), dal programma di formazione dell'Università del Michigan in Organogenesi (T32HD007605), dalla borsa di studio per il merito di Rackham e dalla Tylenol Future Care Fellowship.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Formalina tamponata neutra al 10% | Fisher Scientific | 22-110-869 | |
| Piastre a 24 pozzetti, non trattate | Sigma-Aldrich | CLS3738 | |
| etanolo al 70% (diluito dal 95%) | Fisher Scientific | 04-355-226 | |
| Pinza da dissezione con punte curve | VWR | 89259-946 | |
| Padella da dissezione | Carolina Biological Supply Company | ||
| Forbici da dissezione (punta affilata/smussata) | VWR | 82027-588 | |
| Spugne di garza | Vitality Medical | 2634 | Curity 4 pollici x 4 pollici spugna di garza, 12 strati |
| Handi-Pins per dissezione | Carolina Biological Supply Company | 629132 | |
| Forbici per iride (diritte) | VWR | 470018-890 | |
| Isoflurane | VetOne | ||
| Bisturi | VWR | 100499-578 | Manico per bisturi in piuma con lama, monouso |
Riferimenti
- Cinti, S. The adipose organ at a glance. Disease Models & Mechanisms. 5 (5), 588-594 (2012).
- Rosen, E. D., Spiegelman, B. M. What we talk about when we talk about fat. Cell. 156 (1-2), 20-44 (2014).
- Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A.
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Ristampe e permessi
