L'obiettivo di questo protocollo è quello di mostrare come caricare il CFDA in diversi siti delle parti inferiori di Arabidopsis. Presentiamo quindi il modello di distribuzione risultante di CF nei germogli.
Articolo metodologico
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L'obiettivo di questo protocollo è quello di mostrare come caricare il CFDA in diversi siti delle parti inferiori di Arabidopsis. Presentiamo quindi il modello di distribuzione risultante di CF nei germogli.
Il simplastico Tracer 5 (6)-carbossimetilfluoreina diacetato (CFDA) è stato ampiamente applicato in piante viventi per dimostrare la connessione intercellulare, il trasporto floema e il patterning vascolare. Questo protocollo Mostra il movimento da basso a superiore della carbossimetilfluoreina (CF) nell' Arabidopsis utilizzando rispettivamente la procedura di taglio radicale e di ipocotilizzazione. Queste due diverse procedure si traducono in diverse efficienze del movimento CF: circa il 91% dell'aspetto di CF nei germogli con la procedura di ipocotilio-pizzicamento, mentre solo circa 70% aspetto di CF con la procedura di root-Cutting. Il semplice cambiamento dei siti di carico, con conseguenti cambiamenti significativi nell'efficienza mobile di questo colorante simplastico, suggerisce che il movimento CF potrebbe essere soggetto alla regolazione simplastico, molto probabilmente dalla giunzione radice-ipocotyl.
Molti traccianti fluorescenti con una gamma di proprietà spettrali, come 5 (6)-carbossilfluoreina (CF) 1,8-idrossipirene-1, 3, 6-acido trisolfonico2, Lucifero giallo ch (Lych)3, esculin e CTER4, sono stati sviluppati e applicato nelle piante per monitorare il movimento simplastico e l'attività floema. Generalmente, un colorante simplastico viene caricato in un taglio nel tessuto bersaglio e la dispersione sequenziale del reporter in altre parti dell'impianto dimostrerà la comunicazione intercellulare. Anche se il meccanismo di assorbimento del colorante non è pienamente com....
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1. Arabidopsis crescita verticale in MS medio
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Il movimento symplastic è spesso soggetto a fluttuazioni ambientali. Perturbazione dello stato vegetativo in crescita, e anche il processo di preparazione dei tessuti influenzerà il limite di esclusione di dimensioni di Plasmodesmata, influenzando così il trasporto simplastico22. Per migliorare l'efficienza di colorazione, confiniamo il nostro funzionamento nella sala di crescita, dove la temperatura e l'umidità è strettamente controllata, e anche eseguire l'intera.......
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Studi emergenti hanno dimostrato che le piante possono reagire rapidamente agli stimoli esterni23, compresa la manipolazione introdotta nelle procedure sperimentali22. Nel nostro esperimento iniziale, la nostra supervisione di questa conoscenza spesso porta a un fallimento di colorazione. Con queste lezioni, suggeriamo di tenere a mente le seguenti precauzioni quando si esegue questo esperimento: (1) i semi dopo la raccolta devono essere conservati in un armadio di stoccagg.......
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Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Questo lavoro è stato finanziato dalla Fondazione nazionale di scienze naturali della Cina (31671257) e dal centro di innovazione collaborativa di Hubei per l'industria del grano (LXT-16-18).
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| KNO3 | Reagente chimico Sinopharm | 10017218 | |
| KH2PO4 | Reagente chimico Sinopharm | 10017608 | |
| MgSO4· 7H2O | Reagente chimico Sinopharm | 10013018 | |
| CaCl2· 2H2O | Reagente chimico Sinopharm | 20011160 | |
| MnSO4· H2O | Reagente chimico Sinopharm | 10013418 | |
| Na2MoO4· 2H2O | Reagente chimico Sinopharm | 10019818 | |
| Acido borico | Reagente chimico Sinopharm | 10004818 | |
| ZnSO4· 7H2O | Reagente chimico Sinopharm | 10024018 | |
| CuSO4· 5H2O | Reagente chimico Sinopharm | 10008218 | |
| CoCl2· 6H2O | Reagente chimico Sinopharm | 10007216 | |
| Reagente chimico KI | Sinopharm | 10017160 | |
| FeSO4· 7H2O | Reagente chimico Sinopharm | 10012118 | |
| EDTA | Reagente chimico Sinopharm | 10009717 | |
| NaOH | Reagente chimico Sinopharm | 10019718 | |
| KOH | Reagente chimico Sinopharm | 10017018 | |
| saccarosio | Reagente chimico Sinopharm | 10021418 | |
| Myo-inositol | MACKLIN | I811835 | |
| Acido nicotinico | MACKLIN | N814565 | |
| Piridossina HCl | MACKLIN | V820447 | |
| Tiamina HCl | MACKLIN | T818865 | |
| Glicina | MACKLIN | G800880 | |
| Agar polvere | Novon | ZZ14022 | |
| Microscopio a fluorescenza | Zeiss | Axio Zoom V16 | |
| Microscopio da dissezione | SDPTOP | SRE-1030 | |
| 200μ l. pipetta | Dragon Laboratory Instruments | 713111110000-20-200ul | |
| 2.5μ l. pipetta | Eppendorf | 3120000011 | |
| Pinza fine | PINZE | ST-15 | |
| Parafilm | PARAFILM | PM-996 | |
| Lama a doppia faccia in acciaio inossidabile | Gillette | Platinum-Plus Lama |
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