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Articolo metodologico

Indurre Meningococcal Meningitis Serogroup C in Topi tramite consegna intracisternale

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DOI:

10.3791/60047

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5 novembre 2019

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1Department of Molecular Medicine and Medical Biotechnology, University of Naples Federico II, 2Department of Science and Technology, Sannio University, 3CEINGE – Advanced Biotechnology

In questo articolo

Sommario

Qui, descriviamo un metodo per indurre la meningite meningococcica attraverso una via intracisternale di infezione nei topi adulti. Vi presentiamo un protocollo passo dopo passo dell'infezione da meningococco dalla preparazione dell'inoculum all'infezione intracisternale; quindi registrare la sopravvivenza animale e valutare i carichi batterici nei tessuti murini.

Abstract

Neisseria meningitidis (meningococcus) è un microrganismo a portata stretta di ospite, riconosciuto a livello globale come la principale causa di meningite batterica. Il meningococco è un colonizzatore transitorio di nasofaringe nona l'uomo di circa il 10% del soggetto sano. In circostanze particolari, acquisisce una capacità invasiva di penetrare la barriera mucosale e invade il flusso sanguigno causando setticemia. Nell'ultimo caso, la sepsi fulminante potrebbe sorgere anche senza il conseguente sviluppo della meningite. Al contrario, i batteri potrebbero non moltiplicarsi male nel flusso sanguigno, attraversare la barriera ematoencefalica, raggiungere il sistema nervoso centrale, portando alla meningite fulminante. I modelli murini della meningite batterica rappresentano uno strumento utile per studiare le interazioni ospite-patogeno e per analizzare i meccanismi patogeni responsabili di questa malattia letale. Anche se, diversi sistemi di modelli sperimentali sono stati valutati nel corso degli ultimi decenni, nessuno di questi è stato in grado di riprodurre gli eventi patologici caratteristici della malattia meningococcica. In questo protocollo sperimentale, descriviamo una procedura dettagliata per l'induzione della meningite meningococco in un modello murino basato sull'inoculazione intracisternale dei batteri. I segni peculiari della meningite umana sono stati registrati nell'ospite murino attraverso la valutazione dei parametri clinici (ad esempio, temperatura, peso corporeo), la valutazione del tasso di sopravvivenza, l'analisi microbiologica e l'esame istologico della lesione cerebrale. Quando si utilizza l'inoculto intracisternale (i.cist.), le meningococci consegna completa direttamente in cisterna magna, portando ad una replica meningococcica molto efficiente nel tessuto cerebrale. Un aumento di 1.000 volte di conteggio praticabile di batteri è osservato in circa 18 h. Inoltre, le meningococchi si trovano anche nella milza e nel fegato dei topi infetti, suggerendo che il fegato può rappresentare un organo bersaglio per la replicazione meningococcica.

Introduzione

Neisseria meningitidis è un Gram negativo - proteobacterium limitato all'ospite umano, ben noto per essere una delle cause più comuni di meningite e sepsi nella popolazione umana in tutto il mondo. Colonizza il tratto respiratorio superiore (naso e gola) di portatori sani e asintomatici (2-30% della popolazione), ma il batterio a volte elude varie difese immunitarie dell'ospite e si diffonde dal flusso sanguigno al cervello causando un locale incontrollato infiammazione, conosciuta come meningite meningococcale. Una combinazione di fattori ospiti e batterici sembra contribuire alla transizione dal comportamento commensale al comportamento invasivo1.

N. meningitidis è specializzata esclusivamente nella colonizzazione umana e nell'infezione. Ha una gamma di ospiti ristretta e, quindi, ha limitato gli studi di patogenesi in vivo a causa della mancanza di modelli animali adatti che riproducono la malattia meningococcale umana. Di conseguenza, aveva portato a lacune fondamentali nella comprensione per quanto riguarda la patogenesi della setticemia e meningite causata dal meningococco. Negli ultimi decenni, lo sviluppo di molti sistemi in vitro ha permesso l'identificazione di diversi fattori di virulenza meningococcica2,3,4. Sebbene questi preziosi studi abbiano fornito importanti informazioni per comprendere il ruolo di questi fattori per un'infezione meningococcica di successo, questi modelli non hanno permesso di valutare le conseguenze delle interazioni batteriche con l'ortore e il cellulare sistema immunitario e ancor meno con l'intero tessuto. I modelli animali in vivo di infezione sono di grande rilevanza anche per la valutazione del grado di protezione conferito dalle formulazioni del vaccino. Come patogeno umano-tropico, il meningococco possiede determinanti appropriati necessari per un'infezione di successo come le strutture superficiali (cioè, i pili di tipo IV e le proteine di opacità) e i sistemi di assorbimento del ferro per i recettori umani e le proteine di trasporto (ad es. transferrin e lattoferina)5,6,7 per aderire correttamente, sopravvivere e invadere l'ospite umano. Infine, le capacità di variazione genetica del patogeno per eludere e/o bloccare la risposta immunitaria umana contribuiscono ulteriormente al tropismo ad alta specie8,9. Pertanto, l'assenza di specifici fattori ospiti, coinvolti nell'interazione, può bloccare i passi del ciclo di vita dell'agente patogeno, stabilendo notevoli difficoltà nello sviluppo di piccoli modelli animali che riassumono il ciclo di vita meningococcico.

Negli ultimi decenni, sono stati sviluppati diversi approcci per migliorare la nostra comprensione del ciclo infettivo meningococcico. Le infezioni di due modelli animali, topo e ratto, sia per via intraperitonelale (i.p.) o per intranasale (i.n.), sono state sviluppate per riprodurre la malattia meningococcica10,11,12,13,14 ,15,16,17. Il topo da laboratorio è probabilmente uno degli animali più versatili per indurre l'infezione da meningococco sperimentale.

Tuttavia, il modo di infezione i.p. porta allo sviluppo di sepsi grave anche se non imita la via naturale dell'infezione, mentre la via dell'infezione i.n. è stata utile per valutare la patogenesi meningococcica, anche se può indurre l'infezione polmonare prima della sepsi10,11,12,13,14,15,16,17.

Il modello di mouse i.p. è stato strumentale per valutare la protezione dalla sfida meningococcico10,11,12. Il modello murino della colonizzazione meningococcica basata sulla via dell'infezione i.n. è stato sviluppato con topi infantili, in quanto sono più suscettibili alle meningococchi, per riprodurre un'infezione invasiva che imita il decorso della malattia meningococcica nell'uomo 13,14,15,16,17. Inoltre, per promuovere la replicazione meningococcica nell'ospite murino, sono state applicate anche un numero crescente di strategie tecniche tra cui la somministrazione del ferro agli animali per migliorare l'infezione, l'uso di inoculumbatterico elevato , ceppo batterico del passaggio di topo e l'impiego di ospiti animali infantili o immunocompromessi10,13,15,18,19. L'espressione di fattori umani specifici come CD4620 o transferrin21 ha aumentato la suscettibilità dei topi a questo batterio umano-tropico; l'impiego del modello xenotrapianto della pelle umana è stato utile anche per valutare la capacità di adesione di meningococci all'endotelio umano22,23. Collettivamente, il recente sviluppo di topi transgenici umanizzati ha migliorato la comprensione della patogenesi meningococcica e delle sue interazioni con l'ospite.

In precedenza, abbiamo sviluppato un modello murino di meningite meningococco dove l'inoculazione dei batteri è stata eseguita nella cisterna magna di topi adulti con batteri passati daitopi 24. I parametri clinici e il tasso di sopravvivenza dei topi infetti hanno dimostrato la creazione di meningite con caratteristiche paragonabili a quelle osservate nell'ospite umano, nonché le analisi microbiologiche e istologiche del cervello. Da questi topi infetti, i batteri sono stati, anche, recuperati dal sangue, fegato, e milza, e carichi batterici da organi periferici correlati con la dose infettiva. In particolare, questo modello è stato impiegato per valutare la virulenza di un ceppo mutante isogenico difettoso nel trasportatore L-glutammato GltT24. Recentemente, utilizzando il nostro modello murino di meningite meningococcica basata su i.cist. percorso con ceppo C sierogruppo C 93/42862,24 e un mutante isogenico difettoso nella codifica genica cssA per UDP-N-acetylglucosamine 2-epimerase2,abbiamo analizzato il ruolo dell'acido sialico esposto nello stabilimento della malattia nei topi.

In questo protocollo, descriviamo un metodo semplice per indurre meningite sperimentale meningococcica basata sull'i.cist. dell'infezione nei topi adulti balb/c. Questo metodo è particolarmente utile per la caratterizzazione dell'infezione da meningococco in un ospite murino, nonché per la valutazione della virulenza tra ceppi di riferimento di tipo selvaggio e mutanti isogenici. La via intra-cisternale dell'infezione garantisce la consegna completa delle meningocci direttamente nella cisterna magna, che a sua volta facilita la replica batterica nel liquido cerebrospinale (CSF) e induce la meningite con caratteristiche che imitano quelle presentesull'uomo 2,24,25,26.

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Protocollo

Questo protocollo è stato condotto per ridurre al minimo la sofferenza degli animali e il numero di topi in conformità con la direttiva del Consiglio delle Comunità europee del 24 novembre 1986 (86/609/CEE). Gli esperimenti in vivo riportati in questo studio sono stati approvati dall'Ethical Animal Care and Use Committee (Prot. numero 2, 14 dicembre 2012) e dal Ministero della Salute italiano (Prot. numero 0000094-A-03/01/2013). Tutte le procedure devono essere eseguite all'interno del Gabinetto per la biosicurezza 2 (BSC2) in una stanza BSL2 e i potenziali rifiuti infetti devono essere smaltiti in contenitori dedicati.

1. Infezione dei topi con N. meningitidis Serogroup C Strain

AVVISO: N. meningitidis è potenzialmente un agente patogeno dannoso e tutte le precauzioni necessarie devono essere prese quando si maneggia questo microrganismo. L'intera sperimentazione richiede il contenimento del livello di biosicurezza 2 (BSL2). Il ricercatore coinvolto negli studi sugli animali deve indossare dispositivi di protezione personale usa e getta (PPE) per tutta la durata dell'esperimento.

  1. Preparazione di batteri per studi di infezione in vivo
    1. Scegli una singola colonia da una nuova cultura Meningitidis Neisseria su piastra di agar GC (Gonococcal) integrata con supplemento Polyvitox dell'1% (vol/vol) e inoculato in 10 mL di brodo GC.
    2. Far crescere i batteri a 37 gradi centigradi in un incubatore di shaker orbitale con una velocità di 220 giri/min. Continua a controllare l'O.D. della cultura con uno spettrometro. Far crescere la coltura fino alla fase esponenziale iniziale a una densità ottica OD600nm di 0,7, corrispondente a 7 x 108 CFU/mL.
    3. Una volta ottenuta la causa del sistema operativo richiesto, effettuare le scorte congelate aggiungendo il 10% di glicerolo. Distribuisci 1 mL della cultura nei crioviali. Conservare le fiale a -80 gradi centigradi fino all'uso.
      NOT: Anche se è meglio usare la coltura batterica fresca, gli stock surgelati sono stati utilizzati per semplificare e standardizzare l'esperimento in vivo. Di solito le scorte congelate sono state impiegate entro circa 6 mesi dalla preparazione.
    4. Prima dell'infezione, scongelare i batteri congelati a temperatura ambiente.
    5. Raccogliere le cellule batteriche per centrifugazione per 15 min a 1.500 x g e rimovicare in 1 mL di brodo fresco GC contenente dextran di ferro (5 mg/kg).
      NOT: Il brodo GC viene preparato con l'aggiunta di dextran di ferro (5 mg/kg) al fine di favorire la replicazione delle meningocci nel tessuto ospite14,18,27.
    6. Prima dell'uso, eseguire conteggi vitali di batteri per determinare il numero esatto di CFU per l'infezione. Per farlo, raccogliere 10 oL di sospensione batterica e procedere con diluizioni seriali e stendere ogni diluizione sulle piastre di agar GC e incubare a 37 gradi centigradi con 5% di CO2, per 18-24 h.
  2. Iniezione intra-cisternale di topi
    nota:L'intera procedura viene eseguita nell'armadio del flusso laminare per mantenere le condizioni asettiche.
    1. Topi da laboratorio di casa (8 settimane, balb/c femminili) in condizioni specifiche prive di agenti patogeni. Fornire pellet alimentari e acqua al libitum.
    2. Sistemare gli animali nel nuovo ambiente per 1 settimana prima di iniziare l'esperimento.
    3. Prima di iniziare l'esperimento, pesare e valutare la loro temperatura corporea.
      NOT: I topi femmina di Balb/c inbred di otto settimane pesano in media circa 19 g. La temperatura media dei topi di laboratorio è fisiologicamente variabile dai 36-38 gradicentigradi.
    4. Scruff l'animale dal collo, pulire l'area dell'addome con il 70% di etanolo e iniettare i.p. dextran di ferro (sciolto in 1 % fosfato tampone salina, 250 mg/kg) nel quadrante inferiore destro dell'addome murino utilizzando un ago da 25 G 0,5 mm x 16 mm circa 2-3 h prima dell'infezione.
      NOT: L'iniezione intraperitoneale è stata eseguita nel quadrante inferiore destro dell'addome murino per evitare di danneggiare gli organi addominali come vescica urinaria, cecum, ecc. La somministrazione di sorgente di ferro esogena, sotto forma di dextran di ferro, agli animali prima dell'infezione favorisce la moltiplicazione batterica nell'ospite14,18,27.
    5. Dopo 2-3 h, eseguire l'anestesia animale con chetamina (50 mg/kg) e xilizina (3 mg/kg) e lubrificante oftalmico.
    6. Controllare la profondità dell'anestesia assicurando l'assenza di risposta al dolore dopo aver pizzicando il dito del dito del dito del tutto.
    7. Posizionare il mouse in decubito sternale e allungare con attenzione gli arti e la colonna vertebrale cervicale per mantenere la colonna vertebrale in posizione dritta.
    8. Mescolare delicatamente le sospensioni batteriche per mantenere una sospensione costante prima di caricare una siringa di 30 G ago x 8 mm.
      NOT: Preparare la sospensione batterica il più vicino possibile al tempo di iniezione; nel frattempo, conservarlo a temperatura ambiente.
    9. Sulla base del titro batterico post scongelamento (CFU/mL), procedere con il calcolo della CFU totale da utilizzare, rispetto al numero totale di animali da infettare (dose batterica CFU per numero di animali). Procedere con il calcolo del volume esatto da prelevato dalla fiala per ottenere la CFU totale applicando una proporzione tra il titro batterico post scongelato (CFU/mL) e la CFU totale utile per l'infezione di n topi (CFU titro batterico post scongelato : ml : CFU totale : x). Stabilire il volume finale rispetto al numero totale di animali da infettare.
      NOT: In questi esperimenti, è stata utilizzata una vasta gamma di titro da 104 a 109 per animale.
    10. Pulire l'area chirurgica con il 70% di etanolo.
    11. Identificare il punto di iniezione con l'aiuto di un ago e iniettare la CFU stabilita di meningococci (ceppo di tipo selvaggio e ceppo mutante isogenico), o brodo GC integrato con dextran di ferro (5 mg/kg) come controllo, in un volume totale di 10 l nella cisterna magna dei topi attraverso un foro di bava occipitale utilizzando un ago 30 G x 8 mm.
      1. Eseguire l'inoculo cisternale posizionando l'ago alla giunzione craniocervica, in particolare nello spazio subaracnoideo dorsale. Ventroflex la testa per rendere questo spazio accessibile28.
      2. In breve, mettere l'animale in recumbency laterale, tenere le orecchie fuori strada e flettere il collo moderatamente (da 90 a 100 gradi). Assicurarsi che la linea mediana del collo e della testa (dal naso all'occipite) siano perfettamente in posizione parallela rispetto al tavolo.
      3. Toccare le ali dell'atlante e assicurarsi che si sovrappongano, eliminando la rotazione assiale. Un'indentazione naturale di solito può essere toccata sulla linea mediana dove l'ago è più probabile che entri nel foro occipitale.
      4. Scartare la siringa e l'ago in modo sicuro dopo l'iniezione di topi con Neisseria.
    12. Mettere l'animale nella gabbia e attendere il risveglio e il pieno recupero del movimento.
    13. Tenere le gabbie con topi infetti sotto un armadio a flusso laminare.
    14. Monitorare i topi, 24 h dopo l'infezione, per i segni clinici di coma secondo la scala del coma29. Scala del coma: 1 coma, 2 - non sta in piedi dopo essere stato acceso sul retro, 3 - si erge entro 30 s, 4 - si erge entro 5 s, attività ambulatoriali minime, 5 - normale.
        NOT: Quando negli animali è stato registrato dolore, è stata somministrata analgesia con melossicam (5 mg/kg i.p. per la durata dello studio).
    15. Procedere per la sopravvivenza degli animali o la CFU conta il saggio sugli animali infetti come descritto al punto 2.
    16. Eseguire l'eutanasia dei topi con un punteggio di 2 dalla lussazione cervicale e registrare come morto per l'analisi statistica.

2. La sopravvivenza animale e i conteggi della CFU

  1. Sopravvivenza animale
    1. Preparare l'inocula batterica a diverse dosi (che vanno da 104 a 109 CFU per topo) per infettare gli animali dall'i.cist. percorso (vedere il punto 1.2).
    2. Topi da controllo inoculare con brodo GC, integrati con dextran di ferro (5 mg/kg), nello stesso modo.
    3. Monitorare gli animali per i sintomi clinici: pelliccia arruffata, aspetto curvo, ipotermia, perdita di peso, letargia, omoribondo 24,25,26,30, ogni giorno per tutto l'esperimento per 168 h (7 giorni) almeno due volte al giorno per tutta la durata dell'esperimento.
    4. Misurare il peso corporeo e la temperatura utilizzando un equilibrio digitale e un termometro rettale, rispettivamente ogni giorno.
    5. Registrare la sopravvivenza dei topi per una settimana.
      NOT: Registrare la morte naturale dell'infezione post animale, mentre gli animali che raggiungono un valore di coma di 2 o che sopravvivono oltre 168 h di osservazione saranno eutanasia.
    6. Anestesizza i topi con un valore coma di 2 o che sopravvivono nel corso del tempo di osservazione con ketamina (50 mg/kg) e xilazina (3 mg/kg) e applica unguento oftalmico.
    7. Controllare che la risposta al dolore sia assente dal pizzico del dito del dito del dito.
    8. Eseguire l'eutanasia dei topi per lussazione cervicale e registrare come morto per l'analisi statistica.
  2. Valutazione dei conteggi delle unità formanti di colonia (CFU) negli organi periferici
    1. Utilizzare una dose batterica subletale (5 x 105CFU/topi) sulla base dei risultati di sopravvivenza degli animali per inoculare gli animali da parte dell'i.cist. percorso (cfr. sottosezione 1.2).
    2. Monitorare la temperatura rettale ogni giorno durante l'infezione ed eseguire l'anestesia degli animali a 48 h post infezione, come indicato nel passaggio 2.
    3. Procedere con la disinfezione del 70% di etanolo del torace e prelevare 600-700 - l'l di sangue per foratura cardiaca della cavità toracica utilizzando un ago da 25 G 0,5 mm x 16 mm.
    4. Raccogliere il sangue in un tubo contenente il 3,8% di citrato di sodio e conservarlo a -80 gradi centigradi per i successivi conteggi di cellule batteriche vitali.
    5. Eseguire lussazione cervicale per sacrificare gli animali. Confermare la morte registrando l'assenza di battito cardiaco, dopo aver sacrificato il mouse secondo tutte le linee guida istituzionali ed etiche pertinenti.
    6. Posare il topo in posizione supina e utilizzare forbici e pinze per procedere con il taglio della pelliccia lungo il piano sagittale del corpo. Fissare la pelle con la pelliccia sui lati del corpo con spilli.
    7. Tagliare la membrana peritoneale con forbici affilate. Utilizzare forbici e pinze monouso per accise gli organi (ad esempio, milza e fegato) e mettere ciascuno in parabola Petri sterile con 1 mL di brodo GC integrato con 10% (vol/vol) glicerolo.
    8. Smaltire in modo sicuro il corpo del topo in base alle linee guida IACUC.
    9. Omogeneizzare gli organi meccanicamente a temperatura ambiente con lo stantuffo di una siringa 5 mL per circa 2-3 min fino a quando non si forma una sospensione a cella singola e trasferirlo in un tubo.
    10. Mettere immediatamente il tubo con il campione di tessuto omogeneizzato sul ghiaccio secco.
      NOT: I campioni possono essere conservati a -80 gradi centigradi in un tubo sterile da 2 mL per eseguire la valutazione del numero di cellule batteriche vitali nei punti successivi.
    11. Fare piatti di agar GC con antibiotici quando necessario. Asciugare le piastre prima dell'uso pre-incubazione a 37 gradi centigradi per 2-3 h.
    12. Preparare diluizioni seriali di 10 volte dei campioni in brodo GC da ogni tessuto omogeneizzato e piastra su piastre di agar GC. Incubare pernottamento a 37 gradi centigradi con il 5% di CO2.

3. Preparazione dei tessuti cerebrali per il conteggio CFU

  1. Utilizzare una dose batterica subletale (5 x 105 CFU/topi) sulla base dei risultati di sopravvivenza degli animali per inoculare gli animali da parte dell'i.cist. percorso (cfr. sottosezione 1.2).
  2. Eseguire l'anestesia degli animali al momento dell'infezione stabilito, come indicato nel passaggio 2.
  3. Eseguire l'eutanasia degli animali con lussazione cervicale.
  4. Pulire l'area chirurgica con il 70% di etanolo.
  5. Tagliare la testa del mouse con una grande forbice.
  6. Resect la pelliccia e la pelle con l'aiuto di piccole forbici chirurgiche e una sottile punta pinza d'acciaio, procedendo verso la parte superiore del cranio per essere in grado di vedere chiaramente le suture e di guidare l'apertura del cranio.
  7. Inserire la punta di una piccola forbice attraverso il forame magnum per aprire il cranio.
  8. Tagliare verso il centro del cranio e attraverso la linea mediana dell'osso parietale sul lato opposto del cranio. Tagliare delicatamente lungo il bordo laterale della sutura lambdoid.
  9. Sollevare il cranio partendo dall'angolo parietale posteriore e tirarlo in diagonale verso l'alto per scoprire il cervello, utilizzando pinze sottili ribaltate.
  10. Assicurati che il tessuto cerebrale non sia attaccato ad alcun osso della testa, quando il cranio viene sollevato.
  11. Utilizzare pinze usa e getta per rimuovere qualsiasi tessuto connettivo tra il cranio e il cervello, per garantire che il tessuto cerebrale venga rimosso insieme al cranio.
  12. Non permettere che il tessuto cerebrale si asciughi troppo. Posizionare il cervello, usando pinze usa e getta, in un piatto Petri con 1 mL di brodo GC integrato con 10% (vol/vol) glicerolo.
  13. Omogeneizzare il cervello meccanicamente con lo stantuffo di una siringa da 5 mL (vedi passo 2.2.9). Trasferire i campioni in un tubo sterile da 2 mL e conservarli a -80 gradi centigradi per la successiva valutazione dei conteggi delle cellule batteriche vitali, come discusso al punto 2.2.

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Risultati

Sopravvivenza di topi infettati da N. meningitidis tipo selvaggio e ceppi mutanti isogenici.
I ceppi di meningitidis Neisseria utilizzati in questi risultati rappresentativi sono il ceppo di riferimento C sierogruppo C 93/4286 (ET-37) e il suo mutante isogenico 93/4286,xx ottenuto mediante inattivazione adinsertionale del gene cssA, codifica per l'UDP-N-acetylglucosamina 2-epimerasi, che mappa nel locus di sintesi della capsula25. Per valutar...

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Discussione

In questo studio, descriviamo un protocollo sperimentale per indurre la meningite meningococcica nei topi adulti da i.cist. inoculazione di batteri meningococcici. A nostra conoscenza, nessun altro modello di meningite meningococcica è stato sviluppato in topi di laboratorio infettati da i.cist. percorso; in passato, in questo modo è stato esplorato per fornire modelli di meningite meningococcale sia in ratto31 che in coniglio32. È noto che il più alto tasso di malattia men...

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

Gli studi sono stati sostenuti in parte da PRIN 2012 [grant number 2012WJSX8K]: "Modelli di interazione host-microbe nelle infezioni mucosali: sviluppo di nuove strategie terapeutiche" e da PRIN 2017 [2017SFBFER]: "Un approccio integrato per affrontare l'interazione tra adattamento, condizioni stressanti e resistenza antimicrobica di agenti patogeni impegnativi".

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
1,8 Cryovial con gonna Con filettatura esternaStarlabE3090-6222
50 mL Provetta conica in polipropileneFalcon35207030 mm x 115 mm
Pinza AdsonF.S.T.11006-12Termometro
allarmeTESTO
BactoTM Proteose PeptoneBD211693
BD Siringa Micro FineBD320837U-100 Siringa per insulina
BD Plastipak 1 mL 25 G 5/8 polliciBD 30001405 mm x 16 mm
Siringa BD Plastipak 5 mLBD30806207 mm x 30 mm
BIOHAZARD AURA B CABINA A FLUSSO LAMINARE VERTICALEBio Air s.c.r.l.Biofotometro Aura B3
EppendorfModello #6131
Bottiglia DTecniplastDGraduato fino a: 400 mL, Volume totale 450 mL, 72 mm x 72 mm x 122 mm
C150 CO2 Legante per incubatore9040-0078
Corpo della gabbia Eurostandard Tipo IITecniplast1264C267 x 207 x 140 mm3, Superficie 370 cm2
Piastra Petri per colture cellulari con coperchioThermo Scientific150288Volume di lavoro: 5 mL
CentrifugaEppendorfMicrocentrifuge 5415R
Cuvetta semi-micro L. FormaKartell S.p.A.01938-00
di-Potassio idrogeno fosfato triidratoCarlo erba471767
di-Sodio idrogeno fosfato anidro ACS-per analisiCarlo Erba480141g1000
Diete Standard CertificateMucedola s.r.l.4RF21Pellet di cibo per animali
Dumont Hp Pinzette 5 Acciaio InoxF.S.T. by DUMONTAGT50340,10 x 0,06 mm2 punta
Bilancia elettronicaGibertiniEU-C1200Max 1200 g, d = 0,01 g, T = -1200 g
Eppendorf Microcentrifuge tube safe-lockEppendorfT3545-1000EA
EritromicinaSigma-AldrichE-637625 g
Forbici Bonn Extra FiniF.S.T.14084-08Filtro Superiore in Acciaio Inox
(mini-Isolatore), H-Temp con morsetti di bloccaggioTecniplast1264C400SUC
GC agar baseOXOIDCM0367
Gillies Pinza 1 x2 dentiF.S.T.11028-15Acciaio
Inox Glicerin RPECarlo Erba4537521 L
Graefe ForcipeF.S.T.11052-10Larghezza della punta seghettata: 0,8 mm
Coperchio internoTecniplast1264C116
Soluzione di destrano di ferroSigma-AldrichD8517-25ML
KetaminaIntervet
Cabina di sicurezza microbiologica BH-EN e BHG Classe IIFasterBH-EN 2004
Provette per microcentrifuga 1,5 mL MARCAPP780751tappo a vite PP,
grad Pinze per la manipolazione del mouseF.S.T.11035-20Gomma seghettata; Superficie di presa: 15 mm x 20 mm
Mucotit-F2000MERZ618462000 mL
Guanti in lattice naturaleMedicaM101
New Brunswick Classic C24 Incubatore AgitatorePBI internationalC-24 Classic Benchtop Incubator Shaker
Petri PS PiattiVWR391-045390 x 14,2 mm2
Pipetman Classic P20GilsonF1236002-20 μ L
Pipetman Classic P200GilsonF12360120-200 μ LL
Pipetman Classim P1000GilsonF123602200-1.000 μ L
PolyvitoxOXOIDSR0090A
cloruro di potassioJ.T. Baker Chemicals B.V.0208250 g
Diidrogeno Fosfato di PotassioJ.T. Baker Chemicals B.V.02401 kg
PS Pinze monousoVWR232-0191
Divisore rimovibileTecniplast1264C812
Provette in polipropilene a fondo tondoFalcon3520635 mL
cloruro di sodioMOLEKULA41272436
fermo SS e FilterSheet in poliestereTecniplast1264C
Pinza modello standardF.S.T.11000-12Forbici per
tenotomia StevensF.S.T.14066-11Forbice chirurgica in acciaio inox
- ToughCutF.S.T.14130-17Guanti monouso in
nitrile Stainless Touch N TuffAnsell92-500
Congelatore a bassissima temperatura (ULT)HaierDW-86L288Volume = 288 L
Forbici WagnerF.S.T.14070-12Sottovaso
xilazina
di in acciaio inossidabile 9000530 di in acciaio inox in in acciaio inossidabile

Riferimenti

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