Questo protocollo descrive un nuovo metodo colorimetrico per il rilevamento dei primachi antimalarici (PMQ) nelle urine sintetiche e nei sieri umani.
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Articolo metodologico
Reazione Griess ottimizzata per UV-Vis e determinazione a occhio nudo di Primaquine antimalarico
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Primachina (PMQ), un importante farmaco antimalarico, è stato raccomandato dall'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS) per il trattamento delle infezioni potenzialmente letali causate da P. vivax e ovale. Tuttavia, PMQ ha effetti avversi indesiderati che portano a emolisi acuta in pazienti con carenza di dehydrogenasi glucosio-6 fosfato (G6PD). C'è la necessità di sviluppare metodi semplici e affidabili per la determinazione PMQ con lo scopo di monitoraggio del dosaggio. All'inizio del 2019, abbiamo segnalato un approccio UV-Vis e basato ad occhio nudo per la quantificazione colorimetrica PMQ. Il rilevamento si è basato su una reazione simile a Griess tra PMQ e aniline, che può generare prodotti azo colorati. Il limite di rilevazione per la misurazione diretta del PMQ nelle urine sintetiche è nella gamma nanomolare. Inoltre, questo metodo ha mostrato un grande potenziale per la quantificazione di PMQ da campioni di siero umano a concentrazioni clinicamente rilevanti. In questo protocollo, descriveremo i dettagli tecnici riguardanti le sintesi e la caratterizzazione dei prodotti azo colorati, la preparazione del reagente e le procedure per la determinazione del PMQ.
Introduzione
PMQ è uno dei più importanti farmaci antimalarici, funziona non solo come uno schizontocidio tissutale per prevenire le ricadute, ma anche come un gametocitocide per interrompere la trasmissione della malattia1,2,3,4. L'emolisi intravascolare è uno degli effetti collaterali relativi al PMQ, che diventa estremamente grave in quelli carenti in G6PD. È noto che la malattia genetica del G6PD è distribuita in tutto il mondo con una frequenza genica tra il 3-30% nelle aree endemiche della malaria. La gravità della debolezza della PMQ dipende dal g....
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Protocollo
1. Sintesi di Azos colorati
- In un flacone rotondo da 25 mL (RBF), sciogliere l'anilina (0,1 mmol) e il bisphosphate primachina (45,5 mg, 0,1 mmol) in 10 mL di H3PO4 soluzione (5% v/v). Mettere l'RBF su un bagno di ghiaccio, aggiungere una barra di mescolare con le dimensioni corrette nella soluzione, e mettere l'RBF su un piatto di mescolare.
NOT: Per la sintesi di azo 3g (Figura 2), utilizzare 0.2 mmol di bisfosfato primadotra. - Sciogliere NaNO2 (6,9 mg, 0,1 mmol) in 1 mL di acqua raffreddata e quindi aggiungere nella miscela di reazione drop....
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Risultati
Per ottimizzare le condizioni di reazione (Figura 2), sono state utilizzate varie aniline per accoppiarsi con PMQ attraverso la reazione di Griess. Abbiamo raggiunto una serie di azos con colori diversi. È stato scoperto che le aniline con un elettrone che dona un solvente possono causare uno spostamento rosso nello spettro di assorbimento della visone UV. I calcoli teorici sono stati effettuati attraverso la teoria funzionale della densità dipendente dal tempo (TD-DFT). Come illustrato nell.......
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Discussione
Abbiamo descritto un metodo colorimetrico per una comoda quantificazione PMQ. È potenzialmente il metodo attuale più semplice ed economico. Ancora più importante, questo metodo offre la misurazione basata su PMQ ad occhio nudo senza utilizzare alcuna apparecchiatura.
La reazione Griess ottimizzata per il rilevamento PMQ può generare un azo di colore rosso con un massimo assorbimento a 504 nm. La potenziale influenza derivante dall'assorbimento UV-vis è limitata, rendendo così il metodo promett.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da dichiarare.
Ringraziamenti
Gli autori riconoscono la Start-Up Grant dell'Università di Medicina Cinese di Guangzhou e il progetto di formazione per la ricerca scientifica per i giovani di G'UMCm (2019QNPY06). Riconosciamo anche il Lingnan Medical Research Center dell'Università di Medicina Cinese di Guangzhou per il supporto sulle strutture.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 4-metossianilina | Aladin | K1709027 | |
| 2,4-dimetossianilina | Heowns | 10154207 | |
| 3,4-dimetossianilina | bidepharm | BD21914 | |
| 4-metilanilina | Adamas-beta | P1414526 | |
| 4-nitroanilina | Macklin | C10191447 | |
| 96 pozzetti,Flat Botton | Labserv | ||
| Gaussian@16 software | Gaussian, Inc | Versione: x86-64 SSE4_2-enabled/Linux | |
| Acido cloridrico | GCRF | 20180902 | |
| Marvin sketch (software) | CHEMAXON | edizione gratuita: 15.6.29 | |
| Acido fosforico | Macklin | C10112815 | |
| Primachina bisifosfato | 3A Chemicals | ||
| Nitrito di sodio | Alfa Aesar | 5006K18R | |
| Sulfamidici | TCI(shanghai) | GCPLO-BP | |
| Varioskan LUX Lettore di piastre | Thermo Fisher | Fornito con software SkanIt 4.1 |
Riferimenti
- Fernando, D., Rodrigo, C., Rajapakse, S. Primaquine in vivax malaria: an update and review on management issues. Malar Journal. 10, 351(2011).
- Deng, C., et al. Large-....
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Ristampe e permessi
