È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.

Articolo metodologico

Bioinchiostro a matrice extracellulare derivato dal tessuto pancreatico per la stampa di costrutti di tessuto pancreatico 3D Cell-Laden

10.6K visualizzazioni

⸱

DOI:

10.3791/60434

⸱

13 dicembre 2019

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Mechanical Engineering, Pohang University of Science and Technology, 2School of Interdisciplinary Bioscience and Bioengineering, Pohang University of Science and Technology, 3Asan Institute for Life Science, University of Ulsan College of Medicine and Asan Medical Center, 4Division of Hepato-Biliary and Pancreatic Surgery, Department of Surgery, University of Ulsan College of Medicine and Asan Medical Center, 5Department of Creative IT Engineering, Pohang University of Science and Technology

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

La matrice extracellulare decellularizzata (dECM) può fornire adeguati segnali microambientali per ricapitolare le funzioni intrinseche dei tessuti bersaglio in un costrutto ingegnerizzato. Questo articolo chiarisce i protocolli per la decellularizzazione del tessuto pancreatico, la valutazione del bioink dECM derivato dal tessuto pancreatico e la generazione di costrutti di tessuto pancreatico 3D utilizzando una tecnica di biostampa.

Abstract

Il trapianto di isole pancreatiche è un trattamento promettente per i pazienti che soffrono di diabete di tipo 1 accompagnato da ipoglicemia e complicazioni secondarie. Tuttavia, il trapianto di isole presenta ancora diverse limitazioni, come la scarsa vitalità delle isole trapiantate a causa di un cattivo innesto di isole e di ambienti ostili. Inoltre, le cellule che producono insulina differenziata dalle cellule staminali pluripotenti umane hanno capacità limitate di secernere ormoni sufficienti che possono regolare il livello di glucosio nel sangue; pertanto, è fortemente necessario migliorare la maturazione colticce le cellule con adeguati segnali microambientali. In questo articolo, chiariamo i protocolli per la preparazione di un bioink a matrice extracellulare decellularizzata decellularizzata (pdECM) derivato dal tessuto pancreatico per fornire un microambiente benefico che può aumentare la sensibilità al glucosio delle isole pancreatiche, seguito da descrivere i processi per la generazione di costrutti di tessuto pancreatico 3D utilizzando una tecnica di biostampa basata sulla microestrusione.

Introduzione

Recentemente, il trapianto di islet pancreatico è stato considerato un trattamento promettente per i pazienti con diabete di tipo 1. La relativa sicurezza e la minima invasività della procedura sono grandi vantaggi di questo trattamento1. Tuttavia, ha diverse limitazioni come il basso tasso di successo delle isole isolare e gli effetti collaterali dei farmaci immunosoppressori. Inoltre, il numero di isolotti innevati diminuisce costantemente dopo il trapianto a causa dell'ambiente ostile2. Vari materiali biocompatibili come algerino, collagene, poli(acido lattico-co-glicolico) (PLGA) o glicole di polietilene (PEG) sono stati applicati al trapianto di islet pancreatico per superare queste difficoltà.

La tecnologia di stampa cellulare 3D sta emergendo nell'ingegneria tissutale a causa del suo grande potenziale e delle sue alte prestazioni. Inutile dire che i bioinchi sono noti come componenti importanti per fornire un microambiente adatto e consentire il miglioramento dei processi cellulari nei costrutti di tessuto stampato. Un numero considerevole di idrogel che dilaniano la cesoia come fibrina, alginato e collagene sono ampiamente utilizzati come bioinks. Tuttavia, questi materiali mostrano una mancanza di complessità strutturale, chimica, biologica e meccanica rispetto alla matrice extracellulare (ECM) nel tessuto nativo3. I segnali microambientali come le interazioni tra isolotti ed ECM sono segnali importanti per migliorare la funzione delle isolotti. Decellularizzato ECM (dECM) può ricreare la composizione specifica del tessuto di vari componenti ECM tra cui collagene, glicosaminoglicani (GAG) e glicoproteine. Ad esempio, le isole primarie che mantengono le loro ECU periferiche (ad esempio, le interazioni di tipo I, III, IV, V e VI collagene, laminina e fibronectina) presentano una bassa apoptosi e una migliore sensibilità all'insulina, indicando così che le interazioni cellula-matrice specifiche del tessuto sono importanti per migliorare la loro capacità di funzionare in modo simile al tessuto originale4.

In questo articolo, chiariamo i protocolli per la preparazione di bioinchiostro a matrice extracellulare decellularizzata decellularizzata (pdECM) di tessuto pancreatico per fornire segnali microambientali benefici per aumentare l'attività e le funzioni delle isole pancreatiche, seguiti dai processi per la generazione di costrutti di tessuto pancreatico 3D utilizzando una tecnica di biostampabasatasu microestrusingne ( Figura 1 ).

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Protocollo

Tessuti pancreatici porcini sono stati raccolti da un macello locale. Gli esperimenti sugli animali sono stati approvati dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) dell'Asan Medical Center di Seoul, Corea.

1. Decellularizzazione dei tessuti

  1. Preparare le soluzioni per la decellularizzazione.
    NOTA: 1x salina con buffer fosfato (PBS) utilizzata in tutti i preparati della soluzione viene diluita aggiungendo acqua distillata a 10 volte PBS.
    1. Per la soluzione 1% Triton-X 100, sciogliere 100 mL di 100% soluzione Triton-X 100 in 900 mL di 1x PBS utilizzando una barra di stiring magnetico con l'agitazione a 150 rpm per 6 h. Make 400 mL di 1% Soluzione Triton-X 100 con 40 mL di 10% Soluzione Triton-X 100 e 360 mL di 1x1x PBS preparato poco prima dell'uso.
      NOTA: la soluzione 10% Triton-X 100 può essere conservata a temperatura ambiente fino a quando necessario.
    2. Per la soluzione dell'acido peracetico dello 0,1%, diluire 8,5 mL di 4,7% di acido peraceto in 22,8 mL di 70% di etanolo con 368,7 mL di acqua distillata poco prima dell'uso.
  2. Rimuovere i tessuti periferici del pancreas e affettare il tessuto prima della decellularizzazione.
    1. Lavare il pancreas di porcina resezionato con acqua corrente del rubinetto e rimuovere i tessuti periferici utilizzando forbici sterilizzate.
    2. Trasferire il pancreas in un sacchetto di plastica con la forza e congelare a -80 gradi centigradi per 1 h per aiutare a tagliare il pancreas in modo efficace per il passo successivo.
    3. Affettare il pancreas congelato in pezzi spessi 1 mm con una grattugia.
    4. Trasferire 50 g di tessuto a fette in un contenitore di plastica da 500 ml.
      NOTA: Un contenitore di plastica con coperchio è consigliato qui per proteggere i tessuti dalla contaminazione e prevenire l'evaporazione della soluzione.
  3. Trattamento con reagenti.
    NOTA: L'intero processo di decellularizzazione deve essere effettuato a 4 gradi centigradi su uno shaker orbitale digitale a 150 giri/min. In tutte le fasi di decellularizzazione, il distacco fisico con la pinze è necessario per evitare che le fette di pancreas si attacchino insieme. Per rimuovere completamente i reagenti residui nel contenitore è necessario lavare il contenitore con acqua distillata.
    1. Prima di qualsiasi trattamento reagente, lavare 50 g di pancreas a fette con 300 mL di acqua distillata utilizzando uno shaker.
    2. Mescolare il tessuto continuamente a 150 giri/min fino a quando l'acqua torbida scompare (dopo circa 12 h). Sostituire l'acqua distillata ogni 2 h.
      NOTA: Si consiglia di cambiare l'acqua distillata ogni ora per l'efficienza per rimuovere più rapidamente l'acqua torbida.
    3. Scartare l'acqua e trattare i 50 g di tessuti con 400 mL di 1% Triton-X 100 in 1x soluzione PBS per 84 h. Aggiornare la soluzione ogni 12 h.
      NOTA: A questo punto, la quantità di tessuto diminuirà perché i componenti cellulari iniziano a essere rimossi.
    4. Trattare con 400 mL di isopropanolo (IPA) per 2 h per rimuovere il grasso rimanente dal pancreas.
      NOTA: È normale che il tessuto diventi duro a causa della rimozione del grasso in questo processo.
    5. Dopo 2 h, rimuovere l'IPA e lavare il tessuto con 400 mL di 1x PBS per 24 h. Aggiornare il 1x PBS ogni 12 h.
    6. Per sterilizzare il tessuto decellularizzato, scartare la soluzione precedente e trattare con 400 mL di 0,1% acido peracetico nel 4% di etanolo per 2 h.
    7. Per rimuovere il detergente residuo, lavare il tessuto con 400 mL di 1x PBS per 6 h. Aggiornare la soluzione ogni 2 h.
    8. Raccogliere i tessuti decellularizzati in un tubo conico da 50 mL con pinze.
    9. Congelare il campione a -80 gradi centigradi per 1 h. Coprire il tubo conico con una salvietta senza lanucca al posto del coperchio e fissare con un elastico per un'efficiente liofilizzazione.
    10. Liofilarizzare il tessuto decellularizzato a -50 gradi centigradi per 4 d.
      NOTA: Per il passaggio 1.3, 1 g di tessuto non decellularizzato deve anche essere liofilizzato alle stesse condizioni.

2. Valutazione dei tessuti decellularizzati

NOTA: Per valutare la quantità residua di dsDNA, glicosaminoglicani (GAG) e collagene nel tessuto decellularizzato rispetto al tessuto nativo, sono necessari almeno 1 g di ciascuno dei tessuti non decellularizzati (tessuto nativo) e del tessuto decellularizzato gruppo di valutazione. La quantità di dsDNA, GAG e collagene può essere calcolata in base al peso secco del tessuto.

  1. Preparare soluzioni per saggi biochimici.
    1. Preparare la soluzione papaina per la digestione del campione.
      NOTA: la quantità di buffer da effettuare può essere regolata in base al numero di campioni.
      1. Sciogliere 119 mg di fosfato di sodio 0,1 M (monobasico), 18,6 mg di 0,5 mM Na2-EDTA e 8,8 mg di 5 mM di cisteina-HCl in 10 mL di acqua autoclaved.
      2. Regolare il pH della soluzione a 6,5 aggiungendo una soluzione NaOH da 10 M.
      3. Aggiungere 125 luna di 10 mg/mL soluzione di brodo papaina alla soluzione di cui sopra e vortice, permettendo ad ogni elemento di mescolare in modo uniforme.
    2. Preparare le soluzioni per il saggio di methyl-metilene blu (DMMB).
      1. Per fare la tintura DMMB, sciogliere 8 mg di 1,9-dimetil-metilene-cloruro di zinco blu, 1,52 g di glicina, e 1.185 g di NaCl in 500 mL di acqua autoclata. Regolare il pH a 3 aggiungendo una soluzione HCl da 0,5 M mentre si misura il cambio di pH utilizzando un misuratore di pH bench-top. Quindi, filtrare questo attraverso un filtro a vuoto da 500 mL.
      2. Rendere 15 ll di 10 mg/mL di solfato di condroitina Una soluzione per lo standard.
    3. Preparare le soluzioni per il saggio di idrossiprolina.
      1. Per la soluzione di lavoro della cloramina, sciogliere 2,4 g di acetato di sodio, 1 g di acido citrico e 0,68 g di idrossido di sodio in 24 mL di acqua distillata e aggiungere 240L di acido glaciale acetico, 10 ll di toluene e 6 mL di IPA.
        NOTA: Sciogliere tutte le polveri in soluzione utilizzando un miscelatore vortice. La soluzione di lavoro Chloramine può essere immagazzinata a 4 gradi centigradi per un massimo di tre mesi.
      2. Per la soluzione chloramina T, sciogliere 0,35 g di cloramina T in 20 mL di soluzione di lavoro cloramina e aggiungere 2,5 mL di IPA. Vortice per mescolare tutti i componenti.
        NOTA: Preparare immediatamente prima dell'uso.
      3. Per la soluzione P-DAB, inserire 3,75 g di P-DAB in 6,5 mL di acido perclorico e 15 mL di IPA; avvolgerlo in un foglio di alluminio.
        NOTA: Preparare immediatamente prima dell'uso.
  2. Aggiungere 1 mL di soluzione papaina a 10 mg di tessuto liofilizzato in un tubo di microcentrifuga di 1,5 mL e vortice il tubo per digerire meglio il campione.
  3. Mettere il tubo di microcentrifuga da 1,5 ml in un rack di gomma e digerire i campioni in un becher da 500 mL che contiene 300 mL di acqua a 60 gradi centigradi per 16 h.
  4. Centrifuga a 9.500 x g per 20 min, raccogliere il supernatante, e trasferirlo in un nuovo tubo.
  5. Quantificare il DNA residuo e le principali proteine nel tessuto decellularizzato.
    1. Caricare 1 l di campione digerito nello spettrometro e misurare la quantità di dsDNA secondo le istruzioni del produttore.
      NOTA: Lo sperimentatore deve legare i capelli indietro e indossare una maschera per evitare di contaminare il campione.
  6. Eseguire un saggio DMMB per quantificare la quantità di GAG che rimane nel tessuto decellularizzato.
    1. Mescolare 1 ll di solfato di condroitina Una soluzione e 499 -L di 1x PBS per fare gli standard. Diluire il solfato di condroitina Una soluzione con acqua distillata a concentrazioni di 0, 4, 8, 12, 16 e 20 g/mL.
    2. Caricare i triplicati di 50 gradi di ogni concentrazione dei campioni standard e digeriti in una piastra di 96 pozze.
    3. Aggiungere 200 l del coloranti DMMB ad ogni pozzo utilizzando una pipetta multicanale.
    4. Leggere immediatamente l'assorbimento a 525 nm su un lettore di microplacino.
  7. Eseguire un saggio di idrossiprolina per quantificare la quantità di collagene.
    1. Per condurre un'acido idrossiprolina, incubare 250 l di campione digerito con volumi uguali di HCl a 120 gradi centigradi per 16 h.
    2. Asciugare i residui a temperatura ambiente per 3 h per raffreddare i campioni e quindi ri-dissolviare i campioni in 1 mL di 1x PBS.
    3. Centrifuga a 2.400 x g per 10 min a 4 gradi centigradi.
    4. Preparare la soluzione di idrossido di 100 g/mL di serie.
    5. Diluire la soluzione idrossiprolina con acqua distillata ad una concentrazione di 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 15, 20, 30 g/mL per una soluzione standard.
    6. Caricare in una piastra di 96 pozzetto triplicati di 50 litri di campioni e soluzione standard.
    7. Aggiungere 50 -L di chloramina T soluzione quindi incubare per 20 min a temperatura ambiente.
    8. Aggiungere 50 -L di soluzione p-DAB e incubare per 30 min a 60 gradi centigradi.
      NOTA: Aliquota in una stanza buia. Dopo l'aggiunta, avvolgere la piastra con un foglio di alluminio.
    9. Incubare a temperatura ambiente per 30 min.
    10. Dopo il raffreddamento, misurare l'assorbimento a 540 nm su un lettore di microplacio.

3. Preparazione Bioink

NOTA: la polvere pdECM può essere conservata stabilmente a -80 gradi centigradi per almeno un anno. Prima della regolazione del pH, la soluzione pdECM digerita può essere conservata a -20 gradi centigradi per un mese. Prima dell'uso, scongelare il campione di soluzione pdECM congelata a 4 gradi centigradi durante la notte. La soluzione pdECM regolata in pH può essere conservata a 4 gradi centigradi per un massimo di una settimana. La soluzione pdECM digerita può essere conservata a 4 gradi centigradi per almeno un paio di giorni, ma non deve superare 1 settimana.

  1. Digerire il pdECM liofilizzato con pepsina.
    1. Per una digestione efficace del bioink, polverizza il pdECM lofilofilfato con azoto liquido utilizzando un mortaio e un pestello.
    2. Raccogliere 200 mg della polvere pdECM nel tubo conico 50 mL e aggiungere 20 mg di pepsina e 8,4 mL dell'acido acetico 0,5 M (la concentrazione finale è 2 w/v%).
    3. Posizionare la barra magnetica di agitazione nel tubo conico 50 mL e mescolare a 300 giri/m per 96 h.
  2. Regolare il pH della soluzione pdECM digerita.
    NOTA: Al fine di evitare la gelazione prima della regolazione del pH, questo processo deve essere condotto sul ghiaccio.
    1. Filtrare le particelle non digerite nella soluzione pdECM utilizzando un colino cellulare di 40 m utilizzando una pipetta di spostamento positivo sul ghiaccio per ottenere la digestione ottimale delle parti.
    2. Aggiungere 1 mL di 10x PBS e vortice prima di utilizzare NaOH.
    3. Regolare il pH a 7 con 10 M NaOH controllando il pH con strisce indicatore pH.
      NOTA: Vortice ogni volta che NaOH viene aggiunto in modo che il bioinchiostro sia accuratamente mescolato con gli altri reagenti.

4. Analisi reologica

  1. Configurazione sperimentale
    1. Preparare il bioinchiostro 1.5% (w/v) del pdECM per valutare le proprietà reologiche.
    2. Stabilire una geometria della piastra del cono da 20 mm (diametro del cono di 20 mm con un angolo di 2 gradi) in modalità di controllo della velocità di un reometro.
    3. Creare sequenze sperimentali nel software installato (TRIOS) per misurare la viscosità, la cinetica della gelazione e il modulo dinamico del bioink pdECM.
      1. Viscosità: Posizionare il bioinchiostro pdECM sulla piastra. Misurare la viscosità complessa (Paàs) del bioink pdECM con un tasso di taglio crescente da 1 a 1.000 s-1 ad una temperatura costante di 15 gradi centigradi.
      2. Cinetica di gelazione: Posizionare il bioinchiostro pdECM sulla piastra. Calcolare il complesso modulo (G) misurando il modulo di archiviazione e perdita di pdECM bioink a 4-37 s c con un tasso di aumento incrementale di 5 C/min (modalità di spazzamento temporale).
      3. Modulo dinamico: Posizionare il bioinchiostro pdECM sulla piastra a 37 gradi centigradi per 60 minuti prima della misurazione. Misurare il modulo di archiviazione dipendente dalla frequenza (G') e il modulo di perdita (G'') del bioink pdECM nell'intervallo di 0,1-100 rad/s con una deformazione del 2%.

5. Stampa di cellule 3D di costrutti di tessuto pancreatico con isolotto

  1. Preparazione di isolotti isolati
    1. Isolare le isole primarie da un ratto secondo i protocolli descritti in un lavoro precedente5.
    2. Per separare i detriti e le cellule morte dall'isolotto isolato isolato, passare la sospensione cellulare attraverso un colino cellulare di 70 m. Le isole con un diametro inferiore a 70 m sono considerate morte o anormali.
    3. Sospendere le isole isolate nel mezzo RPMI-1640 e posizionarle sulla piastra di Petri. Rimuovere le isole di diametro superiore a 300 m utilizzando una pipetta di volume P200 al microscopio (4x obiettivo obiettivo) nell'armadio di biosicurezza.
  2. Incapsulamento delle islet nel bioink pdECM
    1. Preparare il bioinchiostro pdECM regolato in pH e l'isolotto isolato.
      NOTA: Per evitare la gelazione prima della regolazione del pH, questo processo deve essere eseguito sul ghiaccio.
    2. Mescolare delicatamente il bioinchiostro pdECM e il supporto sospesi con isolotti (rapporto 3:1) utilizzando una pipetta di spostamento positivo fino a quando non viene mescolato uniformemente.
      NOTA: la concentrazione finale del bioinchiostro pdECM è dell'1,5% e la densità cellulare nel bioinchiostro pdECM è 3.000 IEQ/mL.
  3. Stampa cellulare 3D di costrutti di tessuto pancreatico
    1. Preparare una siringa sterilizzata e un ugello da 22 G.
      NOTA: Questo misuratore è stato selezionato per la stampa di isolotti con un diametro di 100-250 m.
    2. Caricare il bioinchiostro pdECM carico di iletto nella siringa.
    3. Stampare il bioinchiostro con la condizione di stampa ottimizzata (velocità di alimentazione: 150 mm/min; pressione pneumatica: 15 kPa) a 18 gradi centigradi a forma di reticolo.
    4. Per collegare in modo incrociato il bioinchiostro, posizionare il costrutto stampato nell'incubatrice per 30 min.
    5. Immergere il costrutto stampato nel supporto di coltura dell'isolotto che è RPMI-1640 medio integrato con 10% siero bovino fetale (FBS), 100 U/mL penicillina e 100 U/mL streptomicina.

6. Stampa di celle 3D del costrutto pancreatico con struttura modellata

  1. Preparazione di due tipi di bioink
    1. Per convalidare la versatilità di stampa utilizzando più bioinks, preparare due serie di bioink pdECM e macchiarli aggiungendo 0,4% Trypan Blue e Rose Bengal soluzione in ogni bioink pdECM con un rapporto di 1:20, rispettivamente.
      NOTA: Per evitare la gelazione prima della regolazione del pH, questo processo deve essere condotto sul ghiaccio.
    2. Mescolare delicatamente il bioinchiostro pdECM e il supporto sospesi con isolotti (rapporto 3:1) utilizzando una pipetta di spostamento positivo fino a quando non viene mescolato uniformemente.
      NOTA: la concentrazione finale del bioinchiostro pdECM è dell'1,5% e la densità cellulare nel bioinchiostro pdECM è 3.000 IEQ/mL.
  2. Stampa di cellule 3D di costrutti di tessuto pancreatico multimateriale
    1. Preparare siringhe sterilizzate e un ugello da 25 G.
    2. Caricare ogni bioinchiostro (blu e rosso) in due siringhe diverse, rispettivamente.
    3. Stampare il bioinchiostro con una condizione di stampa ottimizzata (velocità di avanzamento: 150 mm/min; pressione pneumatica: 15 kPa) a 18 gradi centigradi a forma di reticolo con linee alternate di blu e rosso.
    4. Per collegare in modo incrociato il bioinchiostro, posizionare il costrutto stampato nell'incubatrice per 30 min.
    5. Immergere il costrutto stampato in supporti di coltura dell'isolotto che è RPMI-1640 medio integrato con 10% siero bovino fetale (FBS), 100 U/mL penicillina e 100 U/mL streptomicina.

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Risultati

Decellularizzazione dei tessuti pancreatici
Abbiamo sviluppato il processo di preparazione del bioink pdECM per fornire microambienti specifici del tessuto pancreatico per migliorare la funzionalità delle isolotti in un costrutto di tessuto biostampato 3D (Figura 2A). Dopo il processo di decellularizzazione, il 97,3% del dsDNA è stato rimosso e componenti ECM rappresentativi come collagene e GAG sono rimasti rispettivament...

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Discussione

Questo protocollo ha descritto lo sviluppo di bioinks pdECM e la fabbricazione di costrutti di tessuto pancreatico 3D utilizzando tecniche di stampa cellulare 3D. Per ricapitolare il microambiente del tessuto bersaglio nel costrutto di tessuto ingegnerizzato 3D, la scelta del bioink è fondamentale. In uno studio precedente, abbiamo convalidato che i bioink dECM specifici dei tessuti sono utili per promuovere la differenziazione delle cellule staminali e la proliferazione10. Rispetto ai polimeri si...

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Ringraziamenti

Questa ricerca è stata sostenuta dal Bio & Medical Technology Development Program della National Research Foundation (NRF) finanziato dal governo coreano (MSIT) (2017M3A9C6032067) e da "ICT Consilience Creative Program" (IITP-2019-2011-1-00783) supervisionato dall'IITP (Institute for Information & Communications Technology Planning & Evaluation).

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Armadi di Sicurezza BiologicaCRYSTEPURICUBE 1200
CongelatoreThermo Scientific Forma957
Agitatore orbitale digitaleDAIHAN ScientificDH.
Forno a seccoDAIHAN ScientificWON-155
LiofilizzatoreLABCONCO7670540
FrigoriferoSANSUNGCRFD-1141
GrattugiaABM1415605793
Microscopi invertiti LeicaDMi1
MicrocentrifugaCRYSTEPURISPIN 17R
Lettore di micropiastreThermo Fisher ScientificMultiskan GO
Mini centrifugaDAIHAN ScientificCF-5
Agitatori multi-piastra riscaldanteDAIHAN ScientificSMHS-6
NanodropThermo Fisher Scientific Misuratoreda banco ND-LITE-PR Thermo
Fisher ScientificSTARA2110
ReometroTA StrumentoDiscovery HR-2
Miscelatore a vorticeDAIHAN ScientificVM-10
Cirurgical Instruments
Forbici operativeHiroseHC.13-122
ForcepKorea Ace ScientificHC.203-30
Materials
Provetta per microcentrifuga da 1,7 mLAxygenMCT-175-C
Flaconcino di vetro da 10 mlScilabSL. VI1243
40 µ filtro cellulare Falcon352340
becher da 5 LDong Sung ScienceSDS 2400
provetta cornicale da 50 mLFalcon352070
becher da 500 mLKorea Ace ScientificKA.23-08
filtro sottovuoto per flaconi da 500 mLCorning431118
contenitore in plastica da 500 mLLOCK& LOCKINL301
Piastra a 96 pozzettiFalcon353072
Foglio di alluminioDAEKYO
KimwipeKimtech
Barra magneticaCorea Ace ScientificBA.37110-0003
Mortaio e pestelloDAIHAN ScientificSC. Pipettatore multicanale MG100
Eppendorf4982000314
Petri DishSPL10100
Strisce indicatrici di pHSigma-Aldrich
Setaccio a reteDAIHAN Scientific
Decellularizzazione
10x pbsHycloneSH30258.01
4,7% Acido peraceticoOmegafarm
70% etanoloSAMCHUN CHEMICALSE0220 SAM
Acqua
IPASAMCHUN CHEMICALSsamchun I0348
Triton-X 100BiosesangT1020
Saggio biochimico
1,9-Dimetil-Metilene Cloruro di zinco blu doppio saleSigma-Aldrich341088
10 N NaOHBiosesangS2018
Clorammina TSigma-Aldrich857319
Condroitina solfato ASigma-AldrichC4384
Acido citricoSupelco46933
Cisteina-HClSigma-AldrichC1276
Acido acetico glacialeMerok100063
GlicinaSigma-Aldrich410225
HClSigma-AldrichH1758
Na2-EDTASigma-AldrichE5134
NaClSAMCHUN CHEMICALSS2097
PapainaSigma-Aldrichp4762
P-DABSigma-AldrichD2004
Acido percloricoSigma-Aldrich311421
Acetato di sodioSigma-AldrichS5636
Idrossido di sodioSupelcoSX0607N
Fosfato di sodio (monobasico)Sigma-AldrichRDD007
TolueneSigma-Aldrich244511
Bioink
Caratterizzato FBSHycloneSH30084.03
Penicillina-StreptomicinaThermo Fisher Scientific15140122
PepsinaSigma-AldrichP7215
Rose bengalSigma-Aldrich198250
RPMI-1640 medioThermo Fisher Scientific11875093
soluzione di Trypan BlueSigma-AldrichT8154
WSO04010 di pH 1095350001 distillata

Riferimenti

  1. Shapiro, A. J., Pokrywczynska, M., Ricordi, C. Clinical pancreatic islet transplantation. Nature Reviews Endocrinology. 13 (5), 268(2017).
  2. Venturini, M., et al. Technique, complications, and therapeutic efficacy of percutaneous transplantation of human pancreatic islet cells in type 1 diabetes: the role of US. Radiology. 234 (2), 617-624 (2005).
  3. Xie, D., et al. Cytoprotection of PEG-modified adult porcine pancreatic islets for improved xenotransplantation. Biomaterials. 26 (4), 403-412 (2005).
  4. Sackett, S. D., et al. Extracellular matrix scaffold and hydrogel derived from decellularized and delipidized human pancreas. Scientific Reports. 8 (1), 10452(2018).
  5. Kim, J., et al. 3D cell printing of islet-laden pancreatic tissue-derived extracellular matrix bioink constructs for enhancing pancreatic functions. Journal of Materials Chemistry B. 7 (10), 1773-1781 (2019).
  6. Yi, H. G., et al. A bioprinted human-glioblastoma-on-a-chip for the identification of patient-specific responses to chemoradiotherapy. Nature Biomedical Engineering. 1, (2019).
  7. Das, S., et al. Decellularized extracellular matrix bioinks and the external stimuli to enhance cardiac tissue development in vitro. Acta Biomaterialia. , (2019).
  8. Kim, H., et al. Shear-induced alignment of collagen fibrils using 3D cell printing for corneal stroma tissue engineering. Biofabrication. 11 (3), 035017(2019).
  9. Huang, H. H., Ramachandran, K., Stehno-Bittel, L. A replacement for islet equivalents with improved reliability and validity. Acta Diabetologica. 50 (5), 687-696 (2013).
  10. Pati, F., et al. Printing three-dimensional tissue analogues with decellularized extracellular matrix bioink. Nature Communications. 5, 3935(2014).
  11. Hussey, G. S., Dziki, J. L., Badylak, S. F. Extracellular matrix-based materials for regenerative medicine. Nature Reviews Materials. 1, (2018).
  12. Kim, B. S., Kim, H., Gao, G., Jang, J., Cho, D. W. Decellularized extracellular matrix: a step towards the next generation source for bioink manufacturing. Biofabrication. 9 (3), 034104(2017).
  13. Gaetani, R., et al. Evaluation of different decellularization protocols on the generation of pancreas-derived hydrogels. Tissue Engineering Part C: Methods. 24 (12), 697-708 (2018).
  14. Gao, G., et al. Tissue engineered bio-blood-vessels constructed using a tissue-specific bioink and 3D coaxial cell printing technique: a novel therapy for ischemic disease. Advanced Functional Materials. 27 (33), 1700798(2017).
  15. La, W. G., et al. Systemically replicated organic and inorganic bony microenvironment for new bone formation generated by a 3D printing technology. RSC Advances. 6 (14), 11546-11553 (2016).
  16. Lee, H., et al. Development of liver decellularized extracellular matrix bioink for three-dimensional cell printing-based liver tissue engineering. Biomacromolecules. 18 (4), 1229-1237 (2017).
  17. Choudhury, D., Tun, H. W., Wang, T., Naing, M. W. Organ-derived decellularized extracellular matrix: a game changer for bioink manufacturing? Trends in Biotechnology. 36 (8), 787-805 (2018).
  18. Kurpios, N. A., et al. The direction of gut looping is established by changes in the extracellular matrix and in cell: cell adhesion. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (25), 8499-8506 (2008).
  19. Sakai, T., Larsen, M., Yamada, K. M. Fibronectin requirement in branching morphogenesis. Nature. 423 (6942), 876(2003).

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Ristampe e permessi

Tag

ECM derivata da tessuto pancreaticomatrice extracellulare decellularizzatapreparazione del bioinktecnica di biostampa 3Dincapsulamento di isolotticomposizione tessuto specificastampa a estrusionecaratterizzazione reologicatransizione sol gelvalutazione della sensibilit al glucosio
Bioinchiostro a matrice extracellulare derivato dal tessuto pancreatico per la stampa di costrutti di tessuto pancreatico 3D Cell-Laden
Contattaci
Raccomanda alla biblioteca

Privacy

Termini di utilizzo

Politiche

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Tutti i diritti riservati.