Immunofluorescenza Colorazione utilizzando IBA1 e TMEM119 per densità microgliale, morfologia e infiltrazione delle cellule mieloidi periferiche nel cervello del mouse

Fernando González Ibanez; Katherine Picard; Maude Bordeleau; Kaushik Sharma; Kanchan Bisht; Marie-Ève Tremblay

doi:10.3791/60510

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Articolo metodologico

Immunofluorescenza Colorazione utilizzando IBA1 e TMEM119 per densità microgliale, morfologia e infiltrazione delle cellule mieloidi periferiche nel cervello del mouse

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DOI:

10.3791/60510

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27 ottobre 2019

Fernando González Ibanez¹^,² , Katherine Picard¹^,² , Maude Bordeleau¹^,³ , Kaushik Sharma¹^,²^,⁴ , Kanchan Bisht¹^,²^,⁴ , Marie-Ève Tremblay¹^,²

¹Axe Neurosciences, Centre de Recherche du CHU de Québec-Université Laval, ²Département de Médecine Moléculaire, Faculté de Médecine, Université Laval, ³Integrated Program in Neuroscience, McGill University, ⁴Center for Brain Immunology and Glia (BIG), University of Virginia

In questo articolo

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Sommario

Questo protocollo descrive un flusso di lavoro passo-passo per la costaintura immunofluorescente di IBA1 e TMEM119, oltre all'analisi della densità microgliale, della distribuzione e della morfologia, nonché dell'infiltrazione delle cellule mieloidi periferiche nel tessuto cerebrale del topo.

Abstract

Questo è un protocollo per la doppia visualizzazione della microglia e l'infiltrazione di macrofagi nel tessuto cerebrale del topo. TMEM119 (che etichetta la microglia in modo selettivo), se combinato con IBA1 (che fornisce un'eccezionale visualizzazione della loro morfologia), consente di sforare i cambiamenti nella densità, nella distribuzione e nella morfologia. Quantificare questi parametri è importante per fornire informazioni sui ruoli esercitati dalla microglia, i macrofagi residenti del cervello. In condizioni fisiologiche normali, le microglie sono regolarmente distribuite in un modello a mosaico e presentano un piccolo soma con processi ramificati. Tuttavia, come risposta a fattori ambientali (ad esempio, traumi, infezioni, malattie o lesioni), la densità microgliale, la distribuzione e la morfologia vengono alterate in vari modi, a seconda dell'insulto. Inoltre, il metodo di doppia colorazione descritto consente la visualizzazione di macrofagi infiltrati nel cervello in base alla loro espressione di IBA1 e senza colocalizzazione con TMEM119. Questo approccio consente quindi la discriminazione tra microglia e infiltrazione di macrofagi, che è necessaria per fornire informazioni funzionali sul loro distinto coinvolgimento nell'omeostasi cerebrale in vari contesti di salute e malattia. Questo protocollo integra le ultime scoperte in neuroimmunologia relative all'identificazione di marcatori selettivi. Serve anche come strumento utile sia per i neuroimmunologi esperti che per i ricercatori che cercano di integrare la neuroimmunologia nei progetti.

Introduzione

Che sia acuta o cronica, la neuroinfiammazione è strettamente influenzata dalla microglia, i macrofagi residenti del cervello. La visualizzazione della microglia attraverso l'immunostaining è preziosa per lo studio della neuroinfiammazione con l'uso della microscopia leggera, una tecnica altamente accessibile. In condizioni omeostatiche, la microglia è tipicamente distribuita in un modello non sovrapponi, simile a un mosaico. Essi esibiscono piccoli somas che estendono processi ramificati¹, che a volte si contattano^l'unl'altro 2 . I processi microgliali ramificati esaminano dinamicamente il parenchyma cerebrale, interage....