Descriviamo qui un metodo per fabbricare array di microelettrodi Ti3C2 MXene e utilizzarli per la registrazione neurale in vivo.
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Articolo metodologico
Descriviamo qui un metodo per fabbricare array di microelettrodi Ti3C2 MXene e utilizzarli per la registrazione neurale in vivo.
Le tecnologie impiantabili di microelettrodi sono state ampiamente utilizzate per chiarire le dinamiche neurali su microscala per ottenere una comprensione più profonda delle basi neurali delle malattie cerebrali e delle lesioni. Poiché gli elettrodi sono miniaturizzati alla scala delle singole cellule, un corrispondente aumento dell'impedimento dell'interfaccia limita la qualità dei segnali registrati. Inoltre, i materiali convenzionali degli elettrodi sono rigidi, con conseguente significativa disallineamento meccanico tra l'elettrodo e il tessuto cerebrale circostante, che suscita una risposta infiammatoria che alla fine porta a una degradazione delle prestazioni del dispositivo. Per affrontare queste sfide, abbiamo sviluppato un processo per fabbricare microelettrodi flessibili basato su Ti3C2 MXene, un nanomateriale recentemente scoperto che possiede capacità volumetriche, conduttività elettrica, funzionalità superficiali e di processabilità notevolmente elevate. Gli array flessibili di microelettrodi Ti3C2 MXene hanno un notevole basso impedimento dovuto all'elevata conduttività e all'elevata superficie specifica delle pellicole Ti3C2 MXene, e hanno dimostrato di essere squisitamente sensibili per la registrazione dell'attività neuronale. In questo protocollo, descriviamo un nuovo metodo per micropatterning Ti3C2 MXene in array di microelettrodi su substrati polimerici flessibili e ne delineamo l'uso per la registrazione in vivo di microelettroblugrafia. Questo metodo può essere facilmente esteso per creare array di elettrodi MXene di dimensioni arbitrarie o geometria per una serie di altre applicazioni in bioelettronica e può anche essere adattato per l'uso con altri inchiostri conduttivi oltre a Ti3C2 MXene. Questo protocollo consente una fabbricazione semplice e scalabile di microelettrodi da inchiostri conduttivi basati su soluzione, e in particolare permette di sfruttare le proprietà uniche dell'idrofilo Ti3C2 MXene per superare molte delle barriere che hanno a lungo ostacolato la diffusa adozione di nanomateriali a base di carbonio per microelettrodi neurali ad alta fedeltà.
Comprendere i meccanismi fondamentali alla base dei circuiti neurali e come le loro dinamiche sono alterate in malattie o lesioni, è un obiettivo fondamentale per sviluppare terapie efficaci per una vasta gamma di disturbi neurologici e neuromuscolari. Le tecnologie dei microelettrodi sono state ampiamente utilizzate per chiarire le dinamiche neurali su scale spaziali e temporali fini. Tuttavia, l'ottenimento di registrazioni stabili con elevato rapporto segnale-rumore (SNR) da elettrodi su microscala si è dimostrato particolarmente impegnativo. Poiché le dimensioni degli elettrodi sono ridotte per avvicinarsi alla scala cellulare, un corrispondente aumento degli elet....
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Tutte le procedure in vivo sono conformi alla Guida dei National Institutes of Health (NIH) per la cura e l'uso degli animali da laboratorio e sono state approvate dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) dell'Università della Pennsylvania.
1. Sintesi di Ti3C2 MXene
NOTA: le procedure di reazione descritte in questa sezione sono destinate all'uso all'interno di un cofano di fumi chimico. I passaggi di lavaggio inclusi in questa procedura sono destinati ad essere utilizzati con tubi di centrifuga bilanciati. Tutti i rifiuti prodotti sono considerati rifiuti pericolosi e....
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I dati di esempio micro-ECoG registrati su una matrice di microelettrodi MXene sono illustrati nella Figura 5. Dopo l'applicazione dell'array di elettrodi sulla corteccia, chiari segnali fisiologici sono stati immediatamente evidenti sugli elettrodi di registrazione, con circa 1 mV segnali di ampiezza ECoG che appaiono su tutti gli elettrodi MXene. Gli spettri di potenza di questi segnali confermarono la presenza di due ritmi cerebrali comunemente osservati nei ratti sotto anestesia ketamina.......
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La procedura di sintesi e delaminazione MXene descritta in questo protocollo (HF/HCl/LiCl) è stata costruita dall'approccio di incisione MILD che impiegava un mezzo di incisione LiF/HCl (in situ HF)26. L'approccio MILD permette di devastare spontaneamente grandifiocchi di Ti3C (diversi m di dimensione laterale) durante il lavaggio, una volta raggiunto il pH 5/6. Rispetto all'incisione con la sola HF, questo si traduce in materiale con una qualità superiore e migliori propriet.......
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Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Questo lavoro è stato sostenuto dai National Institutes of Health (grant no. R21-NS106434), il Citizens United for Research in Epilepsy Taking Flight Award, la Mirowski Family Foundation e Neil e Barbara Smit (F.V.); il National Science Foundation Graduate Research Fellowship Program (grant no. DGE-1845298 a N.D. e B.M.); l'Ufficio di ricerca dell'esercito (numero di accordo cooperativo W911NF-18-2-0026 a K.M.); e dall'esercito degli Stati Uniti tramite il Programma di Iniziativa Scientifica di Superficie presso il Edgewood Chemical Biological Center (PE 0601102A Progetto VR9 a Y.G. e K.M.). Questo lavoro è stato svolto in parte presso il Singh Center for Nanotechnolo....
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 00-90 vite | McMaster-Carr | 90910A630 | Vite del cranio attorno alla quale è avvolto il filo di terra |
| Controller di stimolazione/registrazione a 128 canali | Intan Technologies | Un componente del sistema di registrazione neurale. | |
| Provette da centrifuga coniche in polipropilene (PP) da 175 mL | Falcon | REF: 352076 | Utilizzato per il lavaggio |
| di connettori ZIF a 18 posizioni con passo da 0,5 mm | Molex | 505110-1892 | Utilizzato per interfacciare l'array flessibile di microelettrodi in parylene con la scheda adattatore PCB. |
| Connettore nanominiaturizzato maschio a doppia fila a 18 posizioni (.025"/.64mm) | Omnetics Connector Corporation | A79008-001 | Utilizzato per interfacciare la scheda adattatore PCB all'headstage di registrazione. |
| Set di plastica monouso da 3 ml Pipette graduate per il trasferimento Rienar | Rienar-3ML-20PCS | Utilizzato per il trasferimento di soluzioni mordenzanti o MXene | |
| 50 ml di provetta da centrifuga conciale in polipropilene (PP) | Falcon | REF: 352070 | Utilizzato per il lavaggio e la selezione delle dimensioni |
| Mordenzante Al Tipo A | Transene | 060-0026000-QT | Per la rimozione dello strato di maschera Al etch dopo l'incisione finale Parylene-C. |
| Polvere di alluminio, -325 mesh, 99,5% (base metallica), granulometria < 44 & micro; m | Alfa Aesar | CAS: 7429-90-5 | Utilizzato per la sintesi MAX |
| Software AutoCAD | Autodesk Inc. | Software di progettazione per il disegno di fotomaschere. Le alternative gratuite includono DraftSight e LayoutEditor. | |
| Mordenzante all'ossido tamponato 6:1 | JT Baker | 1178-03 | Per la rimozione dello strato di SiO2 per esporre i contatti dell'elettrodo MXene alla fine della procedura di fabbricazione. |
| Buprenorfina SR | Wildlife Pharmaceuticals | Analgesia per la chirurgia dei ratti | |
| Centrifuga | Hermle | Benchmark Z 446 | Utilizzato per il lavaggio e la selezione delle dimensioni |
| Dexdomitor | Midwest Veterinary Supply | 193.13250.3 | Anestesia per la chirurgia dei ratti |
| Fresa per trapano | Strumenti di scienza fine | 19007-07 | Frese per trapano |
| Trapano elettrico | Foredom | K.1070 | Trapano a micromotore per craniotomie |
| Evaporatore a fascio di elettroni | Kurt J. Lesker Company | Utilizzato per evaporare Ti, Au e SiO2 durante la fabbricazione. La maggior parte delle camere bianche universitarie dispone di questo strumento o di uno strumento simile. | |
| Filo di terra | A-M Systems | 781500 | Filo d'argento nudo |
| Spazio di testa Fiala, vetro | Supelco | REF: 27298 | Utilizzato per la conservazione di soluzioni MXene |
| Acido cloridrico (12.1N) | Fisher Scientific | CAS: 7647-01-0 | Corrosivo; materiale mordenzante |
| Acido fluoridrico, (soluzione al 48-51% in H2O) | Acros | CAS: 7664-39-3 | Materiale mordenzante |
| Jupiter II Sistema RIE | March Plasma Systems Inc. | Sistema di incisione planare RIE utilizzato per incidere il Parylene-C utilizzando plasma O2. La maggior parte delle camere bianche universitarie dispone di un sistema di incisione RIE planare comparabile. | |
| Nastro in poliimmide standard Kapton, 1/4" | DuPont | Utilizzato per aggiungere spessore alla regione del tampone di incollaggio Au dell'array flessibile di microelettrodi in parylene per l'inserimento nel connettore ZIF. | |
| Ospedale per ketamina | dell'Univ. di Penn. | Anestesia per chirurgia dei ratti | |
| KLA P-7 Stilo Profilometro | KLA Corporation | Ha utilizzato i profili 2D di misurazione per confermare l'incisione completa attraverso lo strato sacrificale di parylene-C nel passaggio 2.4.2. La maggior parte delle camere bianche universitarie dispone di questo strumento di profilometro a stilo o di uno strumento comparabile. | |
| Cloruro di litio, 99% per analisi, anidro | Acros | CAS: 7447-41-8 | Igroscopico; materiale di delaminazione |
| Allineatore maschera MA6 | Karl Suss Microtec AG | Utilizzato per allineare ogni fotomaschera al modello sul wafer ed esporre il wafer ai raggi UV. La maggior parte delle camere bianche universitarie dispone di questo strumento o di uno strumento simile. | |
| Soluzione detergente Micro-90 | International Products Corporation | M-9050-12 | Utilizzato come strato antiadesivo per consentire la rimozione dello strato sacrificale di Parylene-C per modellare il fotoresist MXene |
| NR71-3000p | Futurrex Inc. | NR71-3000p | Fotoresist negativo utilizzato per definire tracce Ti/Au e pattern MXene nei dispositivi. |
| Unguento oftalmico | Midwest Veterinary Supply | 193.63200.3 | Per prevenire l'essiccazione corneale durante l'intervento chirurgico |
| Sistema di deposizione di parylene | Sistemi di rivestimento | Utilizzato per evaporare sottili film conformi di Parylene-C Sistema di | |
| rivestimento speciale | dimero Parylene-C | 980130-c-01lbe | Polimero flessibile utilizzato come strati di passivazione inferiore e superiore per i dispositivi |
| MXene flessibili | nostre fotomaschere sono state prodotte nella camera bianca dell'Università utilizzando un sistema di scrittura laser Heidelberg DWL66+, tuttavia diversi fornitori producono fotomaschere dai file di progettazione forniti. | ||
| Soluzione di iodio povidone | Medline | MDS093901 | Per aiutare a prevenire l'infezione intorno all'incisione del cuoio capelluto |
| Circuito stampato (PCB) | Circuiti | Utilizzato per interfacciarsi tra l'array di elettrodi MXene e l'elettronica di misurazione come il potenziostato e il sistema di registrazione Intan. Advanced Circuits e altri fornitori producono e assemblano PCB in base ai file di progettazione forniti. | |
| RD6 Sviluppatore | Futurrex Inc. | Sviluppatore RD6 | Utilizzato per sviluppare il fotoresist negativo NR71-3000p dopo l'esposizione ai raggi UV |
| Potenziostato di riferimento 600 | Strumenti Gamry Utilizzato | per misurare l'impedenza degli elettrodi per valutare la qualità dei dispositivi | |
| Remover PG | MicroChem Corp. | G050200 | Utilizzato per rimuovere NR71-3000p dopo la deposizione di metallo per eseguire il patterning di sollevamento |
| RHS2000 cavo di interfaccia Stim SPI | Intan Technologies | Un componente del sistema di registrazione neurale. | |
| Scheda amplificatore RHS2116 | Intan Technologies | Un componente del sistema di registrazione neurale. | |
| Si wafer | Wafer World | 2885 | Substrato per la fabbricazione |
| Spin Coater | Attrezzatura | Per il rivestimento di wafer con resist e l'applicazione degli strati Micro-90 e MXene. La maggior parte delle camere bianche universitarie è dotata di centrifughe. | |
| Telaio stereotassico | Kopf Instruments | Modello 902 | Per il posizionamento del ratto per la neurochirurgia |
| Agitatore magnetico rivestito in teflon | Corning | REF: 1233W95 | Utilizzato per agitare durante l'incisione e l'intercalazione |
| Carburo di titanio, 99,5% (base metallica), dimensione delle particelle ~2 &; m | Alfa Aesar | CAS: 12070-08-5 | Utilizzato per la sintesi MAX |
| Polvere di titanio, -325 mesh, 99% (base metallica), dimensione delle particelle < 44µ m | Alfa Aesar | CAS: 7440-32-6 | Utilizzato per la sintesi MAX |
| Sonicatore a bagno ad ultrasuoni | Reynolds Tech | Per la rimozione di particelle metalliche e fotoresist durante i processi di sollevamento per modellare i metalli. | |
| Spettrofotometro UV vis | ThermoScientific | Evolution 201 | Utilizzato per determinare la concentrazione e osservare il picco di assorbimento |
| Zetasizer, Analisi granulometrica | Malvern Panalytical | Nano ZS | Utilizzato per determinare la distribuzione granulometrica laterale delle particelle |
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