Questo articolo presenta procedure sperimentali per valutare i disturbi della memoria nei topi epilettici indotti da pilocarpina. Questo protocollo può essere utilizzato per studiare i meccanismi patofisiologici del declino cognitivo associato all'epilessia, che è una delle comorbidità più comuni nell'epilessia.
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Articolo metodologico
Valutazione della funzione di memoria nei topi epilettici indotti da pilocarpina
In questo articolo
Sommario
Abstract
La compromissione cognitiva è una delle comorbidità più comuni nell'epilessia del lobo temporale. Per ricapitolare il declino cognitivo associato all'epilessia associata all'epilessia in un modello animale di epilessia, abbiamo generato topi epilettici cronici trattati con pilocarpina. Presentiamo un protocollo per tre diversi test comportamentali utilizzando questi mouse epilettici: nuova posizione dell'oggetto (NL), nuovi test di riconoscimento degli oggetti (NO) e di separazione dei modelli (PS) per valutare rispettivamente l'apprendimento e la memoria per luoghi, oggetti e contesti. Spieghiamo come impostare l'apparato comportamentale e fornire procedure sperimentali per i test NL, NO e PS a seguito di un test sul campo aperto che misura le attività locomotorie basali degli animali. Descriviamo anche i vantaggi tecnici dei test NL, NO e PS rispetto ad altri test comportamentali per la valutazione della funzione di memoria nei topi epilettici. Infine, discutiamo delle possibili cause e soluzioni per i topi epilettici che non riescono a fare 30 s di buon contatto con gli oggetti durante le sessioni di familiarizzazione, che è un passaggio critico per il successo dei test di memoria. Pertanto, questo protocollo fornisce informazioni dettagliate su come valutare le compromissione di memoria associate all'epilessia utilizzando i topi. I test NL, NO e PS sono semplici, saggi efficienti che sono appropriati per la valutazione di diversi tipi di memoria nei topi epilettici.
Introduzione
L'epilessia è un disturbo cronico caratterizzato da convulsioni ricorrenti spontanee1,2,3. Poiché le crisi ripetitive possono causare anomalie strutturali e funzionali nel cervello1,2,3, un'attività convulsiva anomala può contribuire alla disfunzione cognitiva, che è una delle comorbidità associate all'epilessia più comuni4,5,6. Contrariamente agli eventi convulsioni cronici, che sono transi....
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Protocollo
Tutte le procedure sperimentali sono state approvate dal Comitato Etico dell'Università Cattolica della Corea e sono state eseguite in conformità con i National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (NIH Publications N. 80-23).
1. Test di posizione dell'oggetto nuovo (NL)
- Preparare i topi epilettici C57BL/6 o transgenici 4–6 settimane dopo l'iniezione di pilocarpina.
NOTA: Le crisi acutati sono state indotte dall'iniezione di pilocarpina intraperitoneale (IP), seguendo il protocollo descritto nel nostro precedente rapporto14. - Trasferire i topi epilettici dalla sa....
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Risultati
Nella figura 1è illustrato un programma sperimentale generale e la configurazione per la valutazione della funzione cognitiva. Sei settimane dopo l'introduzione di crisi acute indotta da pilocarpina, i topi sono stati sottoposti ai test NL, NO e PS in ordine separato da periodi di riposo di 3 giorni tra i test (Figura 1A). Per il test NL, due oggetti identici sono stati inseriti nel campo aperto durante la sessione di familiarizzazione (F1) e il giorno successiv.......
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Discussione
Questo lavoro descrive le procedure sperimentali per valutare la funzione cognitiva nei topi con epilessia cronica. Molti diversi paradigmi di test comportamentali vengono utilizzati per valutare le funzioni di apprendimento e memoria nei topi18. Il labirinto dell'acqua Morris, il labirinto del braccio radiale, il labirinto Y, il condizionamento contestuale della paura e i test basati su oggetti sono i test comportamentali più utilizzati e forniscono risultati affidabili. Tra questi, i test NL, NO.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Ringraziamo il dottor Jae-Min Lee per il suo supporto tecnico. Questo lavoro è stato sostenuto dalle sovvenzioni della National Research Foundation of Korea (NRF) finanziate dal governo coreano (NRF-2019R1A2C1003958, NRF-2019K2A9A2A0000167).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Siringa da 1 ml | Sung-shim | Utilizzare con l'ago da 26 o 30 gauge | |
| 70% Etanolo | Duksan | UN1170 | Spray per pulire la scatola e gli oggetti |
| tenda | Per evitare inutili segnali visivi | ||
| Cresyl violet | Sigma | C5042 | Per Cresyl violet |
| colorazione criotome | Leica | E21040041 | Per tessuti nastro |
| biadesivo | il sezionamento Per il posizionamento sicuro degli oggetti | ||
| Mezzo di montaggio DPX | Sigma | 06522 | |
| serie di etanolo | Duksan | UN1170 | Marca 100%, 95%, 90%, 80%, 70% soluzioni di etanolo |
| piastra a pavimento con motivi a griglia stretta | Leehyo-bio | Attrezzatura per esperimenti comportamentali, dimensioni della piastra: 42,5 x 42,5 x 0,5 cm, dimensioni della griglia: 2,75 x Piastra da pavimento da 2,75 cm | |
| con ampi motivi a griglia | Leehyo-bio | Attrezzatura per esperimenti comportamentali, dimensioni della piastra: 42,5 x 42,5 x 0,5 cm, dimensioni della griglia: 5,5 x 5,5 cm | |
| illuminometro | TES Electrical Electronic Corp. | 1334A | Per la misurazione dell'illuminazione della stanza (60 Lux) |
| Unità di terapia intensiva | Thermocare | #W-1 | |
| ketamina cloridrato | Yuhan | 7003 | Utilizzare per anestetizzare il topo per la perfusione transcardica |
| Lampada LED | Lungo | P13A-0422-WW-04 | Illuminazione per gli oggetti |
| della sala di test comportamentaleBambola di gomma, tubo di plastica da 50 ml, barattolo di vetro Coplin, fiaschetta di plastica, bottiglia di vetro | |||
| scatola da campo aperta | Leehyo-bio | Attrezzatura per esperimenti comportamentali, dimensioni: 44 x 44 x 31 cm | |
| tovagliolo di carta | Yuhan-Kimberly | 47201 | Utilizzare per asciugare scatole da campo aperto e oggetti |
| paraformaldeide | Merck Millipore | 104005 | Preparare una soluzione al 4% |
| di pilocarpina cloridrato | Sigma | P6503 | |
| righello | Utilizzare per localizzare gli oggetti nella scatola a campo aperto | ||
| scopolamina nitrato di metile | Sigma | S2250 | Marca 10X stock |
| Sistema intelligente 3.0 | Panlab | Sistema di tracciamento video | |
| cronometro | Junso | JS-307 | Per la misurazione delle attività esplorative dei topi |
| saccarosio | Sigma | S9378 | Per la crioprotezione di sezioni di tessuto |
| sale di terbutalina emisolfato | Sigma | T2528 | stock 10X |
| (telecamera CCD) | Vision | VCE56HQ-12 | Posizionare la telecamera direttamente sopra la scatola di campo aperto |
| xilazina (Rompun) | Bayer corea | KR10381 | Utilizzare per anestetizzare il topo per la perfusione transcardica |
| xilene | Duksan | UN1307 | Per Colorazione viola Cresyl |
Riferimenti
- Chang, B. S., Lowenstein, D. H. Mechanisms of disease - Epilepsy. New England Journal of Medicine. 349 (13), 1257-1266 (2003).
- Scharfman, H. E. The neurobiology of epilepsy. Current Neurology and Neuroscience Report. 7 (4), 348-354 (2007).
- Rakhade, S. N., Jensen, F. E. ....
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Ristampe e permessi
Tag
Valutazione della funzione della memoriaModello di topi epiletticiLocalizzazione di un nuovo oggettoRiconoscimento di un nuovo oggettoTest di separazione dei patternTest del campo apertoVideo tracking comportamentaleSessioni di abituazioneSessione di familiarizzazioneCalcolo del rapporto di discriminazione
