In questo esperimento, un topo viene iniettato nella sua vena di coda con isotiocianato-dextran rhodamina B che può macchiare i vasi sanguigni. Dopo che il fegato è stato esposto e fissato, una parte specifica del fegato può essere selezionata per osservare il tessuto profondo nel corpo vivente utilizzando la microscopia multifotona.
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Articolo metodologico
Osservazione microscopica multifotona dei vasi nel tessuto epatico del topo
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Osservare la dinamica intravascolare del tessuto epatico del topo ci consente di condurre ulteriori osservazioni e studi approfonditi sulle malattie legate ai tessuti del fegato di topo. Un topo viene iniettato con un colorante in grado di macchiare i vasi sanguigni. Per osservare il fegato di topo in vivo, è esposto e fissato in una cornice. Immagini bidimensionali e tridimensionali dei vasi sanguigni nel tessuto epatico sono ottenute utilizzando un microscopio multifotono. Le immagini dei tessuti nei siti selezionati vengono continuamente acquisite per osservare cambiamenti a lungo termine; si osservano anche i cambiamenti dinamici dei vasi sanguigni nei tessuti epatici. La microscopia multifotona è un metodo per osservare la funzione cellulare e cellulare in sezioni o organi di tessuti profondi. La microscopia multifotona ha sensibilità alla microstruttura tissutale e consente l'imaging di tessuti biologici ad alta risoluzione spaziale in vivo, fornendo la capacità di catturare le informazioni biochimiche dell'organizzazione. La microscopia multifotona viene utilizzata per osservare parte del fegato, ma fissare il fegato per rendere l'immagine più stabile è problematico. In questo esperimento, una speciale ventosa sottovuoto viene utilizzata per fissare il fegato e ottenere un'immagine più stabile del fegato al microscopio. Inoltre, questo metodo può essere utilizzato per osservare cambiamenti dinamici di sostanze specifiche nel fegato contrassegnando tali sostanze con coloranti.
Introduzione
I vasi sanguigni possono fornire nutrienti per vari tessuti d'organo del corpo umano e scambiare sostanze. Allo stesso tempo, molte citochine, ormoni, farmaci e cellule funzionano anche attraverso il trasporto vascolare in luoghi specifici. Osservare i cambiamenti vascolari nel tessuto epatico può aiutare a comprendere la distribuzione del flusso sanguigno nel tessuto epatico e il trasporto di sostanze e aiutare nell'analisi di alcune malattievascolari 1,2.
Ci sono molti modi per osservare i vasi sanguigni del fegato nei topi. Tra questi, la microscopia ottica ha molte limitazioni n....
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Protocollo
Tutte le cure e le procedure per gli animali erano conformi alle politiche dell'ospedale di Nanfang in Cina per la salute e il benessere (domanda n. : NFYY-2019-73).
1. Preparazione del mouse
- Anestetizza il mouse.
- Preparare il pentobarbital di sodio (50 mg/kg) in una siringa.
- Afferra il topo (maschio C57BL/6 di 8 settimane) con la mano sinistra in modo che la sua pancia sia rivolta verso l'alto e la sua testa sia inferiore alla coda. Disinfettare la pelle addominale con il 75% di alcol.
- Tenendo la siringa nella mano destra, perforare la linea bianca dell'addome con l'ago leggermente sul lato destro de....
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Risultati
La distribuzione dei vasi sanguigni nel fegato può essere vista nella figura 1, ottenuta utilizzando la microscopia multifotona. Il vaso sanguigno è diviso in una pluralità di rami che emanano da un tronco e distribuiti nello spazio circostante. La circonferenza esterna del vaso sanguigno è rossa, la cavità interna è buia e ci sono molte cose all'interno. Più chiara è l'immagine, più vicino al piano di osservazione è. Ci sono anche alcune macchie rosse intorno, probabilmente perché il colora.......
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Discussione
Osservare uno specifico tessuto vivente è un mezzo efficace per comprendere i cambiamenti, la localizzazione e gli effetti biologici del materiale all'interno del tessuto17. In questo esperimento, i passaggi importanti sono fissare il fegato con un apparecchio di imaging di organi, che può risolvere il problema degli artefatti del movimento a causa della respirazione e dei battiti cardiaci e l'uso di un microscopio multifotono per l'osservazione. Utilizzando questo metodo, i tessuti interni del fe.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (81772133, 81902444), dal Fondo per le scienze naturali del Guangdong (2020A1515010269, 2020A1515011367), il Progetto di ricerca scientifica e tecnologica sulla salute dei cittadini di Guangzhou (201803010034, 201903010072) e il Progetto militare di innovazione medica (17CXZ008).
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Siringa da 1 ml x 2 | Hunan Pinan Medical Devices Technology | YA0551 | |
| Termoforo da 5 W | BiolinkOptics Technology | BL336 | |
| 75% etanolo assoluto | Guangdong Guanghua Sci-Tech | 1.17113.023 | |
| Batuffolo di cotone assorbente | Healthy Sanitation Kingdom | ||
| Strumento chirurgico per topi | RWD Life Science | SP0001-G | Comprese forbici e pinzette Microscopia |
| multifotone | Olympus | FV1200MPE | |
| Dispositivo di imaging per organi | Tecnologia BiolinkOptics | BL336 | Incluso ventosa, tubo flessibile, pompa a pressione negativa e staffa |
| Isotiocianato di rodamina B... destrano | Sigma | R9379 | |
| Macchina da barba | Lei Wa | RE-3201 | |
| Pentobarbital di sodio | Sigma | P3761-25G |
Riferimenti
- Wu, Z., et al. Multi-photon microscopy in cardiovascular research. Methods. 130, 79-89 (2017).
- Zhou, M., Ling, W., Luo, Y. Intrahepatic mass-forming cholangiocarcinoma growing in a giant hepatic hemangioma: A case report. Medicine (Baltimore)
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Ristampe e permessi
