Articolo metodologico

Esecuzione di biopsie di avvicinamento delle dita guidate dal colonscopico nei topi e valutazione dei successivi cambiamenti tissutali

DOI:

10.3791/60949

⸱

5 febbraio 2021

 ,  ,  , 
1Department of Pathology, Renaissance School of Medicine, Stony Brook University, Stony Brook, NY, 2Stony Brook Cancer Center, Stony Brook, NY, 3Department of Medicine, Weill Cornell Medicine, New York, NY

In questo articolo

Sommario

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Qui, forniamo una descrizione dettagliata della procedura per indurre biopsie di pizzico guidate dal colonscopico nei topi e tracciare la chiusura delle ferite in tempo reale. Inoltre, vengono forniti metodi per la preparazione di tessuti per analisi istologiche, immunoistochimiche e molecolari del letto della ferita.

Abstract

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Comprendere i cambiamenti tissutali e cellulari che si verificano nella risposta alle lesioni acute e durante il processo di guarigione delle ferite è di fondamentale importanza quando si studiano le malattie del tratto gastrointestinale (IG). Il modello di biopsia a pizzico colonico murino è uno strumento utile per definire questi processi. Inoltre, è possibile studiare l'interazione tra il contenuto luminale intestinale (ad esempio, microbi) e il colon. Tuttavia, l'induzione della ferita e la capacità di tracciare la chiusura della ferita nel tempo in modo affidabile possono essere impegnative. Inoltre, la preparazione e l'orientamento dei tessuti devono essere effettuati in modo standardizzato per interrogare in modo ottimale i cambiamenti istologici e molecolari. Qui presentiamo un metodo dettagliato che descrive le lesioni indotte dalla biopsia e il monitoraggio della chiusura delle ferite attraverso colonscopie ripetute. Viene descritto un approccio che garantisce misurazioni coerenti e riproducibili delle dimensioni della ferita, la capacità di raccogliere il letto della ferita per analisi molecolari e visualizzare il letto della ferita al momento della sessatura dei tessuti. La capacità di eseguire con successo queste tecniche consente studi sulla risposta acuta alle lesioni, sulla guarigione delle ferite e sulle interazioni luminare-ospite all'interno del colon.

Introduzione

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Il tratto gastrointestinale (GI) è un sistema di organi complesso date le sue molteplici funzioni, i tipi di cellule ospiti (ad esempio epiteliale, immunitario, stromale, ecc.) e trilioni di microbi. Alla luce di questa complessità, le malattie del tratto gastrointestinale spesso comportano l'interazione di tutti questi fattori. Ad esempio, le malattie infiammatorie intestinali (IBD) sono associate a cicli di infiammazione e remissione nel tratto gastrointestinale, che comportano l'attivazione di cellule infiammatorie, disbiosi e riparazione epiteliale1,2,3,

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Protocollo

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Tutte le procedure qui descritte sono state approvate dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali di Weill Cornell Medicine. A: "Tutte le procedure qui descritte sono state approvate dagli Institutional Animal Care and Use Committees di Weill Cornell Medicine e Stony Brook University.

1. Colonscopia e induzione della ferita

  1. Preassemblare i componenti dell'endoscopio inserendo prima l'endoscopio a foro rigido da 1,9 mm nella tona (Figura 1A-B). Collegare la pompa dell'aria (per fornire l'insufflazione colonica) utilizzando i tubi forniti, alla valvola del gas sul lato ....

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Risultati

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I piccoli oggetti (lente, fante, forcep di biopsia) necessari per eseguire le biopsie sono mostrati nella figura 1 insieme agli indicatori di un corretto assemblaggio di questi componenti. La figura 2 mostra immagini rappresentative di viste accettabili del letto della ferita al fine di quantificare con precisione le dimensioni del letto della ferita e il tasso di chiusura della ferita. Un esempio di vista ex vivo del letto della ferita è mostrato nella

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Discussione

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Garantire biopsie coerenti e accurate e misurazioni delle dimensioni della ferita sono di fondamentale importanza quando si tenta di valutare efficacemente il tasso di chiusura delle ferite in questo modello. Pertanto, si dovrebbero adottare diverse misure per essere sicuri che le procedure siano state eseguite correttamente. In primo luogo, la profondità della biopsia non deve essere troppo bassa o profonda. Se troppo superficiale, non ci sarà una finestra sufficiente per valutare la chiusura della ferita.

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Dichiarazioni

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Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

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Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni della Crohn's and Colitis Foundation (D.C.M) e della New York Crohn's Foundation (D.C.M. e A.J.D.). Gli autori ringraziano la Signora Carmen Ferrara per l'assistenza nella creazione del video accompagnamento a questo articolo.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Pinza per biopsia, 3 FrKarl Storz61071ZJ
Coloview Sistema a torreKarl Storzcontattare azienda
Guaina d'esame, 9 Fr, KitKarl Storz61029DK
Telescopio Hopkins, 0', 1,9 mm x 10 cmKarl Storz64301AA
isofluoranoCovetrus2905
blu di metileneSigma-AldrichM9140
micro forbici per irideIntegra18-1619
NIH ImageJNIHN/Asoftware disponibile per il download gratuito da: https://imagej.nih.gov/ij/
Pawfly MA-60 pompa per acquarioAmazonN/A
scalpal con lama #10Hill-Rom372610

Riferimenti

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  1. Boal Carvalho, P., Cotter, J. Mucosal Healing in Ulcerative Colitis: A Comprehensive Review. Drugs. 77 (2), 159-173 (2017).
  2. Chen, M. L., Sundrud, M. S. Cytokine Networks and T-Cell Subsets in Inflammatory Bowel Diseases. Inflammatory Bowel Diseases. 22

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Biopsia colonoscopicacolon di topoguarigione delle feritepreparazione dei tessutimisurazione della feritaanalisi ImageJcolorazione istologicaanalisi molecolareprocedura di colonscopiaimaging endoscopico

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