I modelli di xenotrapianto derivato dal paziente (PDX) e i modelli murini trapiantabili geneticamente modificati ricapitolano fedelmente la malattia umana e sono modelli preferiti per la ricerca di base e traslazionale sul cancro al seno. Qui, viene descritto un metodo per trapiantare ortotopicamente frammenti di tumore al seno nel cuscinetto di grasso mammario per studiare la biologia del tumore e valutare la risposta al farmaco.
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Articolo metodologico
Trapianto ortotopico di tumori al seno come modelli preclinici per il cancro al seno
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
I modelli preclinici che ricapitolano fedelmente l'eterogeneità del tumore e la risposta terapeutica sono fondamentali per la ricerca traslazionale sul cancro al seno. Le linee cellulari immortalizzate sono facili da coltivare e modificare geneticamente per studiare i meccanismi molecolari, ma la pressione selettiva della coltura cellulare spesso porta ad alterazioni genetiche ed epigenetiche nel tempo. I modelli di xenotrapianto derivato dal paziente (PDX) ricapitolano fedelmente l'eterogeneità e la risposta al farmaco dei tumori al seno umani. I modelli PDX mostrano una latenza relativamente breve dopo il trapianto ortotopico che facilita lo studio della biologia del tumore al seno e della risposta ai farmaci. I modelli murini geneticamente modificati trapiantabili consentono lo studio dell'immunità del tumore al seno. L'attuale protocollo descrive il metodo per trapiantare ortotopicamente frammenti di tumore al seno nel cuscinetto di grasso mammario seguito da trattamenti farmacologici. Questi modelli preclinici forniscono approcci preziosi per studiare la biologia del tumore al seno, la risposta ai farmaci, la scoperta di biomarcatori e i meccanismi di resistenza ai farmaci.
Introduzione
La maggior parte dei decessi per cancro al seno può essere attribuita a malattie ricorrenti resistenti alle terapie convenzionali1,2. L'eterogeneità inter- e intra-tumorale dei tumori al seno contribuisce alla resistenza alla terapia. Inoltre, l'eterogeneità del tumore può compromettere una prognosi accurata e sfidare la gestione della malattia3,4. L'identificazione di biomarcatori predittivi di risposta migliorerà significativamente gli esiti clinici delle pazienti con cancro al seno. Anche se la maggior parte dei tipi di cancro al seno sono tumori im....
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Protocollo
Tutti i protocolli che utilizzano animali sono stati rivisti e approvati dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC). I frammenti tumorali, di circa 1-2 mm3, provengono da stock validamente congelati ottenuti dallo xenotrapianto derivato dal paziente e dal nucleo dei modelli avanzati in vivo presso il Baylor College of Medicine.
1. Preparazione di frammenti di tumore mammario crioconservati per il trapianto
- Trasferire la crioviale con frammenti tumorali dall'azoto liquido a un bagno d'acqua a 37 °C.
- Agitare il crioviale con un occasionale tocco delicato durante lo scongelamento.
- Dopo che....
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Risultati
La Figura 1 mostra l'attrezzatura (Figura 1A) e le procedure chiave ( Figura1B) del trapianto ortotopico. La Figura 2 mostra la caratterizzazione di un tumore PDX trapiantato (MC1). Frammenti tumorali (1 mm3)del modello MC1 sono stati trapiantati nel cuscinetto di grasso n. 4 dei topi SCID / Beige. Un mese dopo, la dimensione .......
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Discussione
Per ridurre le variazioni nella crescita del tumore tra gli animali, è fondamentale tagliare il tessuto tumorale in 1 mm3 frammenti per il trapianto. I modelli che crescono i tessuti molli sono più difficili da lavorare e i frammenti tumorali devono essere tagliati leggermente più grandi (1-2 mm3). Quando si posiziona il tessuto nella tasca del cuscinetto di grasso mammario, fare attenzione a non dividere il tessuto in più pezzi in quanto ciò si tradurrà in più piccoli tumori o tumori di forma stran.......
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Dichiarazioni
MTL è il fondatore di un socio accomandato in StemMed, Ltd. e fondatore e manager in StemMed Holdings, il suo socio accomandatario. MTL è fondatore e azionista di Tvardi Therapeutics, Inc. LED è un dipendente retribuito di StemMed, Ltd.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dal National Institutes of Health (R37CA228304 e R01HL146642 a Xi Chen, CA148761 a Jeffrey M. Rosen), dal Dipartimento della Difesa degli Stati Uniti (W81XWH-19-1-0524 a Xi Chen, W81XWH-19-1-0035 a Xiangdong Lv), dall'American Cancer Society (RSG-18-181-01-TBE a Xi Chen) e dal Cancer Prevention and Research Institute of Texas (RR150009 CPRIT Scholar in Cancer Research Award a Xi Chen), il Patient-Derived Xenograft e Advanced In Vivo Models Core presso il Baylor College of Medicine (finanziamento da RP170691 CPRIT Core Facility Award e NCI-CA125123 P30 Cancer Center Support Grant).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 1 mg/mL Buprenorfina-SR | ZooPharm (tramite veterinari BCM) | Siringa sterile | |
| da 26 G | BD | 148232E | Scrub |
| sterile Betadine Fisher | 19-027132 | ||
| Cotton Swabs | VWR International Laboratory | 89031-272 | Sterile |
| DMEM | Fisher | MT 10-013-CM | Sterile |
| Elettrico rasoio | Oster | 78005-050 | |
| Sterilizzatore di perle di vetro (Germinatore) | Roboz Surgical Store | DS-401 | |
| Lubrificante unguento oftalmico | Akorn Animal Health | 17478-062-35 | |
| Micro Pinze da dissezione; Seghettato, angolare (pinza regolare) | Roboz Surgical Store | RS-5139 | Sterile |
| Dissecting Spring Scissors (taglierina per cuscinetti adiposi) | Roboz Surgical Store | RS-5658BT | |
| Micro pinze sterili (pinze per il posizionamento dei tessuti) | Roboz Surgical Store | RS-5069 | |
| Sterile Petri Dish Fisher | 08-757- 100D | ||
| Sterile Telo sterile | Sai Tecnologia di infusione | PSS-SD1 | Forbici |
| per chirurgia | Roboz Surgical Store | RS-5960 | Pinze |
| per tessuti sterili (pinze ad artiglio) | Roboz Surgical Store | RS-5158 | Applicatore di clip per |
| ferite | BD Autoclip Wound System | 01-804 | Dispositivo di rimozione sterile |
| ferite | BD Autoclip 01-804-15 | Sterile | |
| Clip per ferite | BD Autoclip Wound System | 01-804-5 | Sterile |
Riferimenti
- Waks, A. G., Winer, E. P. Breast Cancer Treatment: A Review. JAMA. 321 (3), 288-300 (2019).
- Harbeck, N., et al. Breast cancer. Nature Reviews Disease Primers. 5 (1), 66(2019).
- Harbeck, N., Salem, M., Nitz, U., Gluz, O., Liedtke, C.
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Ristampe e permessi
