Acclimatazione prima di un test intraperitoneale di tolleranza all'insulina per mitigare l'iperglicemia indotta da stress nei topi coscienti

Sommario

Gli aumenti dei livelli di glucosio indotti dallo stress possono confondere l'interpretazione dei dati derivati da un test di tolleranza all'insulina intraperitoneale cosciente nei topi. In questo articolo, descriviamo un metodo per acclimatare i topi alla manipolazione, alle iniezioni e al prelievo di sangue prima di eseguire il test di tolleranza all'insulina al fine di limitare l'iperglicemia indotta dallo stress.

Abstract

Il test di tolleranza all'insulina è comunemente usato negli studi metabolici per valutare la sensibilità all'insulina di tutto il corpo nei roditori. È un test relativamente semplice che prevede la misurazione dei livelli di glucosio nel sangue nel tempo dopo una singola iniezione intraperitoneale di insulina. Dato che viene eseguito nello stato cosciente e il sangue viene spesso raccolto tramite un taglio della coda, ha il potenziale per suscitare una risposta allo stress negli animali a causa dell'ansia associata alla manipolazione e alla raccolta del sangue. Pertanto, può verificarsi un aumento della glicemia indotto dallo stress, rendendo difficile rilevare e interpretare la misura dell'endpoint primario, vale a dire una riduzione della glicemia mediata dall'insulina. Questo è stato osservato in molti ceppi di topi ed è abbastanza comune nei topi diabetici db/db, dove i livelli di glucosio possono aumentare, piuttosto che diminuire, dopo la somministrazione di insulina. Qui, descriviamo un metodo per acclimatare i topi alla manipolazione, alle iniezioni e al prelievo di sangue prima di eseguire il test di tolleranza all'insulina. Scopriamo che questo riduce l'iperglicemia indotta dallo stress e si traduce in dati che riflettono in modo più accurato la sensibilità all'insulina di tutto il corpo.

Introduzione

I test metabolici nei roditori vengono eseguiti di routine per valutare vari parametri che regolano l'omeostasi del glucosio¹. Il gold standard per valutare l'azione dell'insulina in tutto il corpo in vivo è il clamp iperinsulinemico-euglicemico². Questo test prevede la somministrazione di insulina per aumentare i livelli di insulina circolante mentre il glucosio viene infuso per mantenere l'euglicemia. La velocità di infusione del glucosio necessaria per mantenere l'euglicemia è indicativa dell'azione dell'insulina. Sebbene sia uno strumento potente nella ricerca metabolica, la tecnica ....

Protocollo

Tutti i metodi qui descritti sono stati approvati dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali del VA Puget Sound Health Care System.

NOTA: I requisiti locali per il monitoraggio e/o l'intervento degli animali che soffrono di ipoglicemia possono differire da quelli qui descritti.

1. Digiuno (t= -210 min)

1. Al termine del ciclo di buio, trasferisci i topi in una nuova gabbia con lettiera non nutriente come lettiera di cellulosa o di carta (non lettiera di pannocchie, che influenzerà gli endpoint metabolici se consumata dai topi¹³).....

Risultati

La Figura 2A e la Figura 3A sono dati rappresentativi (dati individuali e medi, rispettivamente) che mostrano un aumento paradossale dei livelli di glucosio nel sangue nei topi diabetici db/db nei 15 minuti successivi alla somministrazione di insulina, coerente con l'iperglicemia indotta da stress. Si noti che nessun aumento della glicemia era evidente nei compagni di cucciolata non diabetici di controllo (db/+ o +/+) sottoposti alla stessa procedura. Per determ.......

Discussione

Il clamp iperinsulinemico-euglicemico è considerato il gold standard per valutare l'azione dell'insulina in vivo. Le modifiche alla metodologia per l'esecuzione del clamp hanno portato all'esecuzione della tecnica in topi coscienti e non trattenuti² che sono stati precedentemente cateterizzati utilizzando un sistema a due cateteri¹⁴ per consentire il campionamento del sangue attraverso l'arteria carotide e le infusioni attraverso la vena gi.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Destrosio-50	Pfizer iniettabili	00409-6648-16	Da utilizzare se il topo soffre di ipoglicemia.
Garze Fisher	Scientific	22037907	Per rimuovere il coagulo di sangue sulla punta della coda.
Glucometro	Accu-Chek	M001_us	Per misurare la glicemia.
Bilancia in grammi			Per misurare il peso corporeo.
Insulina (Novolin R)	Novo Nordisk	0169-1833-11	Per preparazioni iniettabili.
Siringhe da insulina	VWR	BD-329461	Per iniezioni.
Timer
minuti Sterile 20 G ago	VWR	BD-305175	Per cesoie per coda.
Soluzione salina sterile	Lifeshield	1261699	Per iniezioni.
Forbici chirurgiche	Fine Science Tools	14088-10	Per taglio della coda.
Strisce reattive	Accu-Chek	06908217001_us	Per misurare la glicemia.