Identificazione e caratterizzazione delle specie di RNA immunogenico negli allergeni HDM che modulano l'infiammazione polmonare eosinofila

Hamad  H. Alanazi; Li She; Xiao-Dong Li

doi:10.3791/61183

Articolo metodologico

Identificazione e caratterizzazione delle specie di RNA immunogenico negli allergeni HDM che modulano l'infiammazione polmonare eosinofila

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DOI:

10.3791/61183

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30 maggio 2020

Hamad H. Alanazi¹^,² , Li She¹^,³ , Xiao-Dong Li¹

¹Department of Microbiology, Immunology and Molecular Genetics, Long School of Medicine, University of Texas Health San Antonio, ²Department of Clinical Laboratory Sciences, College of Applied Medical Sciences, Jouf University, ³Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery, Xiangya Hospital, Central South University

In questo articolo

Sommario

Gli allergeni ambientali come gli acari della polvere domestica (HDM) spesso contengono sostanze microbiche che attivano risposte immunitarie innate per regolare l'infiammazione allergica. Il protocollo qui presentato dimostra l'identificazione delle specie di dsRNA negli allergeni HDM e la caratterizzazione delle loro attività immunogeniche nella modulazione dell'infiammazione polmonare eosinofila.

Abstract

Gli allergeni ambientali come gli acari della polvere domestica (HDM) sono spesso in forme complesse contenenti sia proteine allergiche che guidano risposte aberranti di tipo 2 che sostanze microbiche che inducono risposte immunitarie innate. Questi componenti microbici associati agli allergeni svolgono un ruolo importante nella regolazione dello sviluppo di condizioni infiammatorie di tipo 2 come l'asma allergica. Tuttavia, i meccanismi sottostanti rimangono in gran parte indefiniti. Il protocollo qui presentato determina le caratteristiche strutturali e l'attività in vivo dell'RNA immunostimulatory associato agli allergeni. In particolare, vengono esaminati gli allergeni comuni per la presenza di specie di RNA a doppio filamento (dsRNA) che possono stimolare le risposte IFN nei polmoni e frenare lo sviluppo di eosinofilia polmonare grave in un modello murino di asma allergica indotta dall'HDM. Qui, abbiamo incluso i seguenti tre saggi: Dot blot per mostrare le strutture di dsRNA in RNA totale isolate dagli allergeni tra cui le specie MH, RT-qPCR per misurare le attività dell'RNA HDM nei geni che stimolano l'interferone (ISG) espressione nei polmoni dei topi e nell'analisi FACS per determinare gli effetti dell'RNA HDM sul numero di eosinofili in BAL e nei polmoni, rispettivamente.

Introduzione

Sulla base dell'ipotesi igienica originariamente proposta da Strachan¹, l'esposizione della prima infanzia a fattori microbici ambientali come l'endotossina può proteggere contro lo sviluppo di disturbi allergici²^,³. Durante le infezioni microbiche, ad esempio le infezioni virali, il rilevamento immunitario innato degli acidi nucleici estranei (RNA/DNA) innesca risposte alla difesa dell'ospite⁴^,⁵^,⁶. Tuttavia, l'esistenza e la prevalenza di acidi nucleici immunogenici come le specie di RNA a dop....