Questo protocollo convalida un modello di roditore affidabile, facile da eseguire e riproducibile di lesioni assonali diffuse dal cervello (DAI) che induce danni diffusi alla materia bianca senza fratture o contusioni al cranio.
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Articolo metodologico
Induzione di lesioni cerebrali assonali diffuse nei ratti in base all'accelerazione rotazionale
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
La lesione cerebrale traumatica (TBI) è una delle principali cause di morte e disabilità. Lesioni assonali diffuse (DAI) è il meccanismo predominante di lesioni in una grande percentuale di pazienti TBI che necessitano di ricovero in ospedale. IL DAI comporta un diffuso danno assonale dovuto a uno scuotimento, una rotazione o lesioni da scoppio, che porta a una rapida lesione assonale e a cambiamenti assonali secondari associati a un impatto duraturo sul recupero funzionale. Storicamente, i modelli sperimentali di DAI senza lesioni focali sono stati difficili da progettare. Qui convalidiamo un modello di roditore semplice, riproducibile e affidabile di DAI che causa danni diffusi alla materia bianca senza fratture o contusioni al cranio.
Introduzione
Lesione cerebrale traumatica (TBI) è una delle principali cause di morte e disabilità negli Stati Uniti. I TBI contribuiscono a circa il 30% di tutti i decessi correlati alle lesioni1,2. Le principali cause di TBI differiscono tra le fasce di età e includono cadute, collisioni ad alta velocità durante lo sport, autolesionismo intenzionale, incidenti automobilistici e assalti1,2,3.
La lesione assonale diffusa del cervello (DAI) è un tipo specifico di TBI indotto dall'accelerazione rotazional....
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Protocollo
Gli esperimenti sono stati condotti in base alle raccomandazioni delle dichiarazioni di Helsinki e Di Oleosa e alle linee guida per l'uso degli animali sperimentali della Comunità europea. Gli esperimenti sono stati approvati dal Comitato per la cura degli animali dell'Università Ben-Gurion del Negev.
1. Preparazione dei ratti per la procedura sperimentale
NOTA: Selezionare i ratti Maschi Adulti Sprague-Dawley del peso di 300-350 g.
- Ottenere l'approvazione per l'esecuzione di questi esperimenti dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali.
- Mantenere i ratti a una temperatura am....
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Risultati
La tabella 1 illustra la sequenza temporale del protocollo. Il tasso di mortalità in questo modello di DAI era dello 0%. Un test di Mann-Whitney ha indicato che il deficit neurologico era significativamente maggiore per i 15 ratti DAI rispetto ai 15 ratti sham a 48 ore dopo l'intervento (Mdn x 1 contro 0), U 22,5, p < 0,001, r - 0,78 (cfr. tabella 2). I dati sono misurati in conteggi e sono presentati come intervallo mediano e 25-75 percentile.
Le fotomicro.......
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Discussione
Questo protocollo descrive un modello di roditore di DAI. In DAI, l'accelerazione rotazionale sul cervello provoca un effetto di taglio che innesca cambiamenti assonali e biochimici che portano alla perdita della funzione assonale in un processo progressivo. I cambiamenti assonali secondari sono prodotti da una rapida lesione assonale e sono variabili nella loro estensione e gravità4,5,10. Entro ore o giorni dopo la lesione prim.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori riconoscono con gratitudine il Dr. Nathan Kleeorin (Dipartimento di Ingegneria Meccanica, Ben-Gurion University del Negev) per il suo aiuto con le misurazioni biomeccaniche. Inoltre, ringraziamo la professoressa Olena Severynovska, Maryna Kuscheriava, Maksym Kryvonosov, Daryna Yakumenko e Evgenia Goncharyk del Dipartimento di Fisiologia, Facoltà di Biologia, Ecologia e Medicina, Oles Honchar Dnipro University, Dproni, Ucraina per il suo sostegno e contributi utili alle nostre discussioni.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 0,01 M citrato di sodio | SIGMA - ALDRICH | ||
| 2,5% siero di cavallo normale | SIGMA - ALDRICH | H0146 | Soluzione |
| formaldeide tamponata al 4 | |||
| Proteina precursore anti-amiloide, C - anticorpo terminale prodotto in coniglio | SIGMA - ALDRICH | Lotto 056M4867V | |
| vettore | di anticorpi secondari biotinilatiBA-1000-1.5 | 10 mM di fosfato di sodio, pH 7,8, 0,15 M NaCl, 0,08% di sodio azide, 3 mg/ml di albumina sierica bovina | |
| per taglio osseo | |||
| DAB Perossidasi (HRP) Kit substrato (con nichel), 3,3 | |||
| etanolo 99,9 % | ROMICAL | Liquido infiammabile | |
| ghigliottina | |||
| Ematossilina | SIGMA - ALDRICH | H3136-25G | |
| Soluzione di perossido di idrogeno | Millipore | 88597-100ML-F | |
| Isofluran, USP 100% | Piramamal Critical Care, Inc | ||
| Microscopio Olympus BX 40 | Olympus | ||
| paraffine | paraplast plus leica biosystem | Soluzione | |
| salina tamponata con fosfato medio (PBS) | - ALDRICH | P5368-10PAK | Il contenuto di una busta, se disciolto in un litro di acqua distillata o deionizzata, produrrà soluzione salina tamponata con fosfato 0,01 M (NaCl 0,138 M; KCl - 0,0027 M); pH 7,4, a 25 °C. |
| Streptavidina HRP | ABCAM | ab64269 | Streptavidina-HRP per l'uso con anticorpi secondari biotinilati durante IHC / immunoistochimica. |
| xilene |
Riferimenti
- Faul, M., Wald, M. M., Xu, L., Coronado, V. G. Traumatic brain injury in the United States; emergency department visits, hospitalizations, and deaths, 2002-2006. US Government. , (2010).
- Taylor, C. A., Bell, J. M., Breiding, M. J., Xu, L. Traumatic Brain Injury-Related Emergency Department Visit....
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Ristampe e permessi
