Articolo metodologico
Le cellule staminali sono continuamente studiate come potenziali trattamenti per gli individui con danni miocardiali, tuttavia, la loro diminuzione della vitalità e della ritenzione all'interno del tessuto ferito può influenzare la loro efficacia a lungo termine. In questo manoscritto descriviamo un metodo alternativo per la consegna di cellule staminali in un modello murino di lesione da reperfusione di ischemia.
C'è un interesse significativo nell'uso di cellule staminali (SC) per il recupero della funzione cardiaca in individui con lesioni miocardici. Più comunemente, la terapia con cellule staminali cardiache viene studiata fornendo SC in concomitanza con l'induzione della lesione miocardica. Tuttavia, questo approccio presenta due limitazioni significative: il primo ambiente ischemico pro-infiammatorio ostile può influenzare la sopravvivenza delle SC trapiantate e non rappresenta lo scenario di infarto subacuto in cui probabilmente verranno utilizzate le SC. Qui descriviamo una serie in due parti di procedure chirurgiche per l'induzione della lesione ischemia-reperfusione e la consegna di cellule staminali mesenchymal (MSC). Questo metodo di somministrazione delle cellule staminali può consentire la maggiore vitalità e ritenzione intorno al tessuto danneggiato aggirando la risposta immunitaria iniziale. Un modello di lesione da reperfusione di ischemia è stato indotto nei topi accompagnato dalla consegna di cellule staminali mesenchimali (3,0 x10 5),esprimendo stabilmente il gene reporter luccilice luciferasi sotto il promotore CMV espresso costitutivamente, intramiocardially 7 giorni dopo. Gli animali sono stati immaginati tramite ultrasuoni e imaging bioluminescente per la conferma della lesione e l'iniezione di cellule, rispettivamente. È importante sottolineare che non vi era alcun tasso di complicazione aggiunto quando si esegue questo approccio a due procedure per la consegna SC. Questo metodo di somministrazione delle cellule staminali, collettivamente con l'utilizzo di geni reporter all'avanguardia, può consentire lo studio in vivo della vitalità e della ritenzione delle SC trapiantate in una situazione di ischemia cronica comunemente osservata clinicamente, aggirando anche la risposta pro-infiammatoria iniziale. In sintesi, abbiamo stabilito un protocollo per la consegna ritardata di cellule staminali nel miocardio, che può essere utilizzato come potenziale nuovo approccio nel promuovere la rigenerazione del tessuto danneggiato.
La malattia cardiovascolare rimane la causa più comune di morbilità e mortalità in tutto il mondo. Gli eventi ischemici cardiaci sono risultati dannosi per la funzione complessiva del miocardio e delle cellule circostanti1. Solo ̴0,45-1,0% dei cardiomiociti si rigenera ogni anno dopo che si verifica un danno miocardiale2. Nonostante la crescente domanda e l'attenzione intrinseca allo sviluppo di trattamenti, le terapie che aiutano nella rigenerazione del tessuto ferito sono state difficili da stabilire e richiedono ancoraun'ulteriore ottimizzazione 3,4,
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Gli esperimenti sono stati eseguiti su topi femmina C57BL/6, di età 10-12 settimane e 20-25 g di peso corporeo. Tutte le procedure sugli animali rispettavano gli standard indicati nella Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio (Istituto di risorse animali di laboratorio, Accademia nazionale delle scienze, Bethesda, MD, USA) e sono state approvate dal Mayo Clinic College of Medicine Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC).
1. Preparazione e intubazione
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La lesione da reperfusione di ischemia è stata indotta nei topi il giorno 0, seguita da un ecocardiogramma post-operatorio ed elettrocardiogramma il giorno precedente l'impianto di cellule staminali. L'analisi degli ultrasuoni e degli elettrocardiogrammi ha confermato l'infarto e la diminuzione della funzione contrattile ventricolare(Figura 1A-D). Un ulteriore esame dei dati ha mostrato che la frazione di espulsione e l'accorciamento frazionario sono diminuiti nei topi che h.......
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Oltre 85 milioni di persone in tutto il mondo sono affore di malattiecardiovascolari 3. L'elevata prevalenza di questi eventi ischemici richiede un ulteriore sviluppo ed espansione di terapie alternative per promuovere la rigenerazione del tessuto danneggiato. I metodi tradizionali utilizzano la procedura di reperfusione dell'ischemia in un ambiente acuto con successiva somministrazione di terapie1. Le reazioni infiammatorie sono al suo apice tra 3-4 giorni dopo un evento i.......
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Gli autori non hanno nulla da rivelare.
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Irrigazione NaCl allo 0,9%, USP | Baxter | 0338-0048-04 | |
| 11x12" Press n' Seal telo chirurgico, autoclavabile | SAI Tecnologie di infusione | PSS-SD | |
| 24G 3/4" tubo catetere IV | Jelco | 4053 | |
| 28G x 1/2" 1mL siringa per | BD | 305500 | Iniezione di analgesico |
| 30G x 1/2" 3/10cc siringa da insulina | Ulticare | 08222.0933.56 | Iniezione di cellule staminali |
| 6-0 S-29, sutura Vicryl da 12 | Ethicon | J556G | Chiusura intercostale, superficiale del muscolo e dello strato cutaneo Chiusura dell'incisione |
| 9-0 BV100-4, sutura Ethilon da 5" | Ethicon | 2829G | Legatura dell'arteria LAD |
| Sottocuscinetto assorbente | Thermo Fischer Scientific | 14-206-64 | Per sotto l'animale |
| Tamponi per la preparazione dell'alcol, 2 strati, medi | Coviden | 6818 | |
| Maschera facciale antiappannamento | Drizza | 49235 | |
| Forbici per strabismo di Bonn, curve, smussate | Fine Science Tools | 14085-09 | |
| Buprenorfina HCL SR LAB 1mg/ml, 5 ml | ZooPharm Pharmacy | Analgesico narcotico alla buprenorfina formulato in un polimero che rallenta l'assorbimento prolungando la durata dell'azione (72 ore di durata di attività). | |
| Portaaghi Castroviejo, curvi | Fine Science Tools | 12061-01 | |
| Spugne di garza sterili Curity | Coviden | 397310 | |
| Delicata pinza per legare la sutura, piegata a 45 angoli | Fine Science Tools | 11063-07 | |
| Rasoio elettrico | Wahl | Rimozione della pelliccia | |
| Isoflurano 100 ml | Cardinal Health | PI23238 | Anestetico |
| Camice | |||
| Siringa ipodermica Monoject 1 mL | Coviden | 8881501400 | |
| Pinza per iride Moria, curva, seghettata (x2) | Fine Science Tools | 11370-31 | |
| Divaricatore Moria speculum | Fine Science Tools | 17370-53 | |
| Kit per intubazione endotracheale di topo | Kent Scientific | ||
| Nair crema depilatoria | Johnson & | Rimozione della pelliccia | |
| Lubrificante oculare Optixcare plus | Aventix | Lubrificante oculare sterile | |
| Ventilatore | Physiosuite Kent Scientific | ||
| PolyE Tubo in polietilene | Harvard Apparatus | 72-0191 | Compressione temporanea dell'arteria LAD |
| Tamponi di iodio povidone | PDI | S41125 | |
| Bisturi, 10 lame | Bard-Parker | 371610 | |
| Applicatori sterili da 3" con punta in cotone | Cardinal Health | C15055-003 | |
| Applicatori sterili da 6" con punta affusolata | Puritan | 25-826-5WC | |
| Guanti sterili | Cardinal Health | N8830 | |
| Buste per sterilizzazione | Medline | MPP100525GS | |
| Cappuccio | chirurgico | ||
| Microscopio operatorio | Leica | M125 | |
| Pinza per sutura, diritta (x2) | Fine Science Tools | 10825-10 | |
| Nastro chirurgico transporoso | 3M | 1527-1 | |
| Unguento antibiotico triplo | G& W Laboratories | 11-2683ILNC2 | Applicazione topica per prevenire l'infezione |
| Vannas-Tü Bingen Forbici a molla, curve | Fine Science Tools | 15004-08 | |
| Vetflo vaporizzatore | Kent Scientific |
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