La fotoimmunoterapia nel vicino infrarosso (NIR-PIT) è una strategia terapeutica emergente per il cancro che utilizza un coniugato anticorpo-fotoassorbitore (IR700Dye) e la luce NIR per distruggere le cellule tumorali. Qui, presentiamo un metodo per valutare l'effetto antitumorale di NIR-PIT in un modello murino di carcinoma polmonare disseminato pleurico e mesotelioma pleurico maligno utilizzando l'imaging a bioluminescenza.
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Articolo metodologico
Fotoimmunoterapia nel vicino infrarosso per modelli murini di disseminazione pleurica
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'efficacia della fotoimmunoterapia può essere valutata più accuratamente con un modello murino ortotopico che con uno sottocutaneo. Un modello di disseminazione pleurica può essere utilizzato per la valutazione dei metodi di trattamento per le malattie intratoraciche come il cancro del polmone o il mesotelioma pleurico maligno.
La fotoimmunoterapia nel vicino infrarosso (NIR-PIT) è una strategia di trattamento del cancro sviluppata di recente che combina la specificità degli anticorpi mirati al tumore con la tossicità causata da un fotoassorbitore (IR700Dye) dopo l'esposizione alla luce NIR. L'efficacia di NIR-PIT è stata riportata utilizzando vari anticorpi; tuttavia, solo pochi rapporti hanno mostrato l'effetto terapeutico di questa strategia in un modello ortotopico. Nel presente studio, dimostriamo un esempio di valutazione dell'efficacia del modello di carcinoma polmonare disseminato pleurico, che è stato trattato con NIR-PIT.
Introduzione
Il cancro rimane una delle principali cause di mortalità nonostante decenni di ricerca. Uno dei motivi è che la radioterapia e la chemioterapia sono tecniche altamente invasive, che possono limitare i loro benefici terapeutici. Le terapie a bersaglio cellulare o molecolare, che sono tecniche meno invasive, stanno ricevendo maggiore attenzione. La fotoimmunoterapia è un metodo di trattamento che potenzia sinergicamente l'effetto terapeutico combinando immunoterapia e fototerapia. L'immunoterapia migliora l'immunità tumorale aumentando l'immunogenicità del microambiente tumorale e riducendo la soppressione immunoregolatoria, con conseguente distruzione dei tumori nel co....
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Protocollo
Tutti gli esperimenti in vivo sono stati eseguiti in conformità con la Guida per la cura e l'uso delle risorse animali da laboratorio del Comitato per la cura e l'uso degli animali dell'Università di Nagoya (approvazione #2017-29438, #2018-30096, #2019-31234, #2020-20104). Topi nudi omozigoti atimici di sei settimane sono stati acquistati e mantenuti presso l'Animal Center dell'Università di Nagoya. Quando si esegue la procedura nei topi, sono stati anestetizzati con isoflurano (introduzione: 4-5%, mantenimento 2-3%); la zampa è stata premuta con una pinzetta per confermare la profondità dell'anestesia.
1. Coniugazio....
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Risultati
L'anticorpo anti-podoplanina NZ-1 è stato coniugato con IR700 per generare NZ-1-IR700. Abbiamo confermato il legame di NZ-1 e IR700 su una SDS-PAGE (Figura 8). L'H2373 che esprime la luciferasi (H2373-luc) è stato preparato trasfezionando cellule maligne di mesotelioma (H2373) con un gene della luciferasi10.
Abbiamo anestetizzato topi nudi omozigoti femmina di 8-12 settimane e iniettato 1 × 105 cellule H2373-luc nella cavità tora.......
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Discussione
In questo studio, abbiamo dimostrato un metodo per misurare l'effetto terapeutico di NIR-PIT sul modello di disseminazione pleurica del MPM. L'uccisione cellulare altamente selettiva è stata eseguita con NIR-PIT; quindi, il tessuto normale è stato appena danneggiato23,24,25. Con questo tipo di uccisione selettiva delle cellule, NIR-PIT ha dimostrato di essere sicuro nei modelli disseminati
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 0,25 w/v% Tripsina-1 mmol/l Soluzione EDTA 4Na con rosso fenolo | Wako | 209-016941 | per colture cellulari |
| Siringa da 1 ml | TERUMO | SS-01T | per esperimento sui topi |
| Ago 30G | Nipro | per l'esperimento sui topi | |
| BALB/cSlc-nu/nu | Japan SLC | ||
| Collidal Blue Staining Kit | Invitrogen | LC6025 | per la colorazione di proteine su gel |
| Coomassie (bradford) Plus saggio di proteine | Thermo Fisher Scientific Inc (Waltham, MA, USA) | PI-23200 | per la misurazione della concentrazione di APC |
| Dimetil solfossido (DMSO) | Wako | 043-07216 | uso per la coniugazione di IR700 |
| D-Luciferina (sale di potassio) | Cayman Chemical | 14681 | per l'imaging a bioluminescenza e DLIT |
| GraphPad Prism7 | Software GraphPad | per l'analisi statistica | |
| immagine bioluminescente e DLIT | |||
| Living Image | PerkinElmer | per l'analisi dell'immagine bioluminescente e DLIT | |
| Na2HPO4 | SIGMA-ALDRICH (St. Louis, MO, USA) | S9763 | uso per la coniugazione del laser NIR IR700 |
| Changchun New Industries Optoelectronics Technology | MRL-III-690R | per l'irradiazione NIR | |
| Novex WedgeWell 4 a 20%, Tris-Glycine, 1.0 mm, Mini Protein Gel, 12 pozzetti | Invitrogen | XP04202BOX | utilizzare per SDS-PAGE |
| NuPAGE LDS Sample Buffer (x4) | Invitrogen | NP0007 | utilizzare per SDS-PAGE |
| Misuratore di potenza ottica | Thorlabs (Newton, NJ, USA) | PM100 | per misurare l'uscita del laser NIR |
| PBS(-) | Wako | 166-23555 | |
| Sistema di imaging Pearl Trilogy | Li-Cor Biosciences | immagini fluorecenti a 700 nm | |
| Soluzione di penicilina-streptomicina (x100) | Wako | 168-23191 | per colture cellulari |
| Puromicina Dicloridrato | ThermoFisher | A1113803 | per la trasfezione della luciferasi |
| RediFect Red-Fluc-Puromicina Lentivirale Prticles | PerkinElmer | CLS960002 | per trasfezione di luciferasi |
| RPMI-1640 con L-glutammina e fenolo rosso | Wako | 189-02025 | per coltura cellulare |
| Colonna Sephadex G25 (PD-10) | GE Healthcare (Piscataway, NJ, USA) | 17-0851-01 | utilizzo per la coniugazione di IR700 |
| UV-1900i | Shimadzu | per la misurazione della concentrazione di APC |
Riferimenti
- Xu, X., Lu, H., Lee, R. Near Infrared Light Triggered Photo/Immuno-Therapy Toward Cancers. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 8, (2020).
- Mitsunaga, M., et al. Cancer cell-selective in vivo near....
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Ristampe e permessi
