Coltura tissutale della corteccia ovarica bovina

Courtney  M. Sutton; Shelby  A. Springman; Mohamed  A. Abedal-Majed; Andrea S. Cupp

doi:10.3791/61668

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Articolo metodologico

Coltura tissutale della corteccia ovarica bovina

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DOI:

10.3791/61668

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14 gennaio 2021

Courtney M. Sutton^*¹ , Shelby A. Springman^*¹ , Mohamed A. Abedal-Majed² , Andrea S. Cupp¹

¹Department of Animal Science, University of Nebraska-Lincoln, ²Department of Animal Production, School of Agriculture, University of Jordan

^* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Viene presentata la coltura in vitro della corteccia ovarica bovina e l'effetto della dieta nutrizionale a gradini sul microambiente ovarico. I pezzi di corteccia ovarica sono stati coltivati per sette giorni e sono stati valutati steroidi, citochine e stadi follicolari. Il trattamento dietetico Stair-Step aveva aumentato la steroidogenesi con conseguente progressione del follicolo in coltura.

Abstract

Lo sviluppo del follicolo dallo stadio primordiale a quello antrale è un processo dinamico all'interno della corteccia ovarica, che include fattori endocrini e paracrini da cellule somatiche e comunicazione cellula-ovocita cumulo. Poco si sa sul microambiente ovarico e su come le citochine e gli steroidi prodotti nell'ambiente circostante influenzino la progressione o l'arresto del follicolo. La coltura in vitro della corteccia ovarica consente ai follicoli di svilupparsi in un ambiente normalizzato che rimane supportato da stroma adiacente. Il nostro obiettivo era determinare l'effetto della dieta nutrizionale Stair-Step sul microambiente ovarico (sviluppo follicolare, produzione di steroidi e citochine) attraverso la coltura in vitro della corteccia ovarica bovina. Per raggiungere questo obiettivo, i pezzi corticali ovarici sono stati rimossi dalle giovenche sottoposte a due diversi schemi nutrizionalmente sviluppati prima della pubertà: Control (sviluppo nutrizionale tradizionale) e Stair-Step (alimentazione e restrizione durante lo sviluppo) che sono stati tagliati in circa 0,5-1 mm³ pezzi. Questi pezzi sono stati successivamente passati attraverso una serie di lavaggi e posizionati su un inserto di coltura tissutale che è incastonato in un pozzo contenente il terreno di coltura di Waymouth. La corteccia ovarica è stata coltivata per 7 giorni con cambiamenti quotidiani dei terreni di coltura. Il sezionamento istologico è stato eseguito per determinare i cambiamenti dello stadio follicolare prima e dopo la coltura per determinare gli effetti della nutrizione e l'impatto della coltura senza ulteriori trattamenti. Il terreno di coltura della corteccia è stato raggruppato per giorni per misurare steroidi, metaboliti steroidei e citochine. C'erano tendenze per l'aumento degli ormoni steroidei nel microambiente ovarico che ha permesso la progressione del follicolo nelle colture di corteccia ovarica Stair-Step versus Control. La tecnica di coltura della corteccia ovarica consente una migliore comprensione del microambiente ovarico e di come le alterazioni della secrezione endocrina possono influenzare la progressione e la crescita del follicolo da trattamenti sia in vivo che in vitro. Questo metodo di coltura può anche rivelarsi utile per testare potenziali terapie che possono migliorare la progressione del follicolo nelle donne per promuovere la fertilità.

Introduzione

La corteccia ovarica rappresenta lo strato esterno dell'ovaio in cui si verifica lo sviluppo del follicolo¹. I follicoli primordiali, inizialmente arrestati nello sviluppo, saranno attivati per diventare follicoli primari, secondari e quindi antrali o terziari basati su input paracrini e gonadotropine^1,^2,^3,^4. Per comprendere meglio i processi fisiologici all'interno dell'ovaio, la coltura tissutale può essere utilizzata come modello in vitro, consentendo così un ambiente controllato per condurre esperimenti. Molti stu....