Gli embrioni/larve zebrafish si sviluppano esternamente e sono otticamente trasparenti. Il bioaccumulo delle microplastiche nei pesci nelle prime fasi della vita viene facilmente valutato con microperline etichettate fluorescentmente.
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Articolo metodologico
Accumulo e distribuzione di microplastiche fluorescenti nelle prime fasi della vita di Zebrafish
In questo articolo
Sommario
Abstract
Come nuovo tipo di inquinante ambientale, la microplastica è stata ampiamente trovata nell'ambiente acquatico e rappresenta un'alta minaccia per gli organismi acquatici. Il bioaccumulo delle microplastiche svolge un ruolo chiave nei loro effetti tossici; tuttavia, come particolato, i loro bioaccumulamenti sono diversi da molti altri inquinanti. Descritto qui è un metodo fattibile per determinare visivamente l'accumulo e la distribuzione di microplastiche negli embrioni di zebrafish o larve utilizzando microplastiche fluorescenti. Gli embrioni sono esposti a diverse concentrazioni (0,1, 1 e 10 mg/L) di microplastiche fluorescenti con un diametro di 500 nm per 120 h. Nei risultati viene dimostrato che le microplastiche possono bioaccumulare in embrioni/larve di zebrafish in modo dipendente dalla concentrazione. Prima della schiusa, si trova una forte fluorescenza attorno al coro embrionale; mentre nelle larve di zebrafish, il sacco tuorlo, il pericardio e il tratto gastrointestinale sono i principali siti accumulati di microplastiche. I risultati dimostrano l'assorbimento e l'internalizzazione delle microplastiche nei pesci zebra nelle prime fasi della vita, che forniranno la base per una migliore comprensione dell'impatto delle microplastiche sugli animali acquatici.
Introduzione
Sin dalla prima sintetizzata nel 1900, le materie plastiche sono ampiamente utilizzate in vari campi, con conseguente rapida crescita della produzione globale1. Nel 2018, circa 360 milioni di tonnellate di plastica sono state prodotte in tutto il mondo2. Le plastiche nell'ambiente naturale si degradano a particelle fini a causa di processi chimici, fisici o biologici3. Generalmente, le particelle di plastica fine < di dimensioni di 5 mm sono definite come microplastiche4. Le microplastiche sono anche progettate per applicazioni specifiche, come le microperline dei prodotti ....
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Protocollo
I pesci zebra adulti provengono dal China Zebrafish Resource Center (Wuhan, Cina). Gli esperimenti sono stati condotti in conformità con la guida nazionale "Laboratory Animal Guideline for Ethical Review of Animal Welfare (GB/T35892-2018).
1. Raccolta embrionale
- Mantenere il pesce in vasche di vetro da 20 L con sistema di acqua del rubinetto filtrata a carbone (pH 7,0 ± 0,2) a temperatura costante (28 ± 0,5 °C) su un fotoperiodo di 14:10 h di luce: scuro.
- Nutrire il pesce due volte al giorno con Artemia nauplii. Si raccomanda di dare al massimo il 3% di peso del pesce al giorno e di mangiarlo entro 5 minuti ogni....
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Risultati
La distribuzione e l'accumulo di microplastiche fluorescenti sono riportati nella figura 1 e nella tabella 1. Non si osserva fluorescenza visibile nel gruppo non esposto (controllo). Tuttavia, si trova un accumulo di fluorescenza che circonda il corore dopo l'esposizione a diverse concentrazioni di microplastiche (24 hpf). La fluorescenza verde viene rilevata anche nelle larve e i livelli di fluorescenza sembrano aumentare in modo dipendente dalla concentrazione e dal tempo........
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Discussione
Secondo le linee guida sulla protezione degli animali utilizzati a fini scientifici, come la direttiva UE 2010/63/UE, l'autorizzazione all'etica animale non è obbligatoria per un esperimento con le prime fasi di vita del pesce zebra fino alla fase di capacità di alimentazione indipendente (5 giorni dopo la fecondazione)17. Tuttavia, le migliori pratiche di benessere sono importanti per ottimizzare l'uso del pesce zebra e, ad esempio, i metodi umani di anestesia ed eutanasia dovrebbero essere preoc.......
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Dichiarazioni
L'autore non dichiara interessi concorrenti o finanziari.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato finanziato dalla National Natural Science Foundation of China (21777145, 22076170) e dal Programma per studiosi e team di ricerca innovativi di Changjiang in University (IRT_17R97).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Microscopio fluorescente | Nikon, Giappone | Eclipse Ti-S | |
| Perle di polistirene fluorescente verde | Phosphorex, USA | 2103A | |
| Tricaina | Sigma-Aldrich, USA | A5040 |
Riferimenti
- SAPEA (Science Advice for Policy by European Academies). A Scientific Perspective on Microplastics in Nature and Society. , SAPEA. Berlin. (2019).
- Plastics Europe. Plastics-the facts 2019. , Plastics Europe. Brussels. (2019).
- Andrady, A. L.
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Ristampe e permessi
