Colorazione, visualizzazione e analisi di papille gustative fungiformi, circumvallate e palato

Lisa C. Ohman; Robin F. Krimm

doi:10.3791/62126

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Articolo metodologico

Colorazione, visualizzazione e analisi di papille gustative fungiformi, circumvallate e palato

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DOI:

10.3791/62126

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11 febbraio 2021

Lisa C. Ohman¹ , Robin F. Krimm¹

¹Anatomical Sciences and Neurobiology, University of Louisville

In questo articolo

Sommario

Questo documento descrive i metodi per la preparazione dei tessuti, la colorazione e l'analisi di intere papille gustative fungiformi, circumvallate e palato che producono costantemente papille gustative intere e intatte (comprese le fibre nervose che le innervano) e mantengono le relazioni tra le strutture all'interno delle papille gustative e la papilla circostante.

Abstract

Le papille gustative sono raccolte di cellule che trasducono il gusto specializzate per rilevare sottoinsiemi di stimoli chimici nella cavità orale. Queste cellule trasduttrici comunicano con le fibre nervose che trasportano queste informazioni al cervello. Poiché le cellule che trasducono il gusto muoiono continuamente e vengono sostituite durante l'età adulta, l'ambiente delle papille gustative è sia complesso che dinamico, richiedendo analisi dettagliate dei suoi tipi di cellule, delle loro posizioni e di eventuali relazioni fisiche tra di loro. Le analisi dettagliate sono state limitate dall'eterogeneità e dalla densità lingua-tessuto che hanno ridotto significativamente la permeabilità degli anticorpi. Questi ostacoli richiedono protocolli di sezionamento che si traducono nella divisione delle papille gustative tra le sezioni in modo che le misurazioni siano solo approssimate e le relazioni cellulari vadano perse. Per superare queste sfide, i metodi qui descritti comportano la raccolta, l'imaging e l'analisi di intere papille gustative e singoli pergole terminali da tre regioni del gusto: papille fungiformi, papille circumvallate e palato. La raccolta di papille gustative intere riduce i pregiudizi e la variabilità tecnica e può essere utilizzata per riportare numeri assoluti per caratteristiche tra cui il volume delle papille gustative, l'innervazione totale delle papille gustative, la conta delle cellule trasduttrici e la morfologia dei singoli pergole terminali. Per dimostrare i vantaggi di questo metodo, questo documento fornisce confronti tra le papille gustative e i volumi di innervazione tra le papille gustative fungiformi e circumvallate utilizzando un marcatore generale delle papille gustative e un'etichetta per tutte le fibre gustative. Viene inoltre fornito un flusso di lavoro per l'uso dell'etichettatura genetica a cellule sparse dei neuroni del gusto (con sottoinsiemi etichettati di cellule che trasducono il gusto). Questo flusso di lavoro analizza le strutture dei singoli pergolati del nervo del gusto, i numeri di tipo cellulare e le relazioni fisiche tra le cellule utilizzando un software di analisi delle immagini. Insieme, questi flussi di lavoro forniscono un nuovo approccio per la preparazione dei tessuti e l'analisi sia di intere papille gustative che della morfologia completa dei loro pergole innervanti.

Introduzione

Le papille gustative sono raccolte di 50-100 cellule epiteliali specializzate che legano sottoinsiemi di stimoli chimico-gustativi presenti nel cavo orale. Si ritiene generalmente che le cellule che trasducono il gusto esistano come tipi^1,^2,^3,^4,^5,^6,^7,^8,^9,inizialmente sulla base di criteri di microscopia elettronica che sono stati successivamente correlati con marcatori ....