Questo protocollo è per la determinazione dei lipidi in acqua di mare e campioni biologici. I lipidi nei filtrati vengono estratti con cloroformio o miscele di cloroformio e metanolo nel caso di solidi. Le classi lipidiche sono misurate mediante cromatografia a strato sottile con rilevamento della ionizzazione a fiamma e la loro somma fornisce il contenuto lipidico totale.
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Articolo metodologico
Determinazione delle classi lipidiche e lipidiche totali in campioni marini
In questo articolo
Sommario
Abstract
I lipidi sono in gran parte composti da carbonio e idrogeno e, quindi, forniscono una maggiore energia specifica rispetto ad altre macromolecole organiche nel mare. Essendo ricchi di carbonio e idrogeno sono anche idrofobici e possono agire come solvente e vettore di assorbimento per contaminanti organici e quindi possono essere driver di bioaccumulo inquinante negli ecosistemi marini. La loro natura idrofobica facilita il loro isolamento dall'acqua di mare o da campioni biologici: l'analisi lipidica marina inizia con il campionamento e poi l'estrazione in solventi organici non polari, fornendo un metodo conveniente per la loro separazione da altre sostanze in una matrice acquatica.
Se l'acqua di mare è stata campionata, il primo passo di solito comporta la separazione in fazioni "disciolte" e "particolato" definite operativamente mediante filtrazione. I campioni vengono raccolti e i lipidi isolati dalla matrice del campione tipicamente con cloroformio per materia veramente disciolta e colloidi, e con miscele di cloroformio e metanolo per solidi e campioni biologici. Tali estratti possono contenere diverse classi da fonti biogeniche e antropogeniche. In questo momento, i lipidi totali e le classi lipidiche possono essere determinati. Il lipide totale può essere misurato sommando le classi lipidiche determinate individualmente che di solito sono state separate cromatograficamente. La cromatografia a strato sottile (TLC) con rilevamento della ionizzazione di fiamma (FID) viene regolarmente utilizzata per l'analisi quantitativa dei lipidi da campioni marini. TLC-FID fornisce informazioni sulla classe lipidica sinottica e, sommando le classi, una misurazione lipidica totale.
Le informazioni sulla classe lipidica sono particolarmente utili se combinate con misurazioni di singoli componenti, ad esempio acidi grassi e / o steroli, dopo il loro rilascio da estratti lipidici. L'ampia varietà di strutture e funzioni lipidiche significa che sono ampiamente utilizzate nella ricerca ecologica e biogeochimica che valuta la salute dell'ecosistema e il grado di influenza degli impatti antropogenici. Sono stati impiegati per misurare sostanze di valore dietetico per la fauna marina (ad esempio, acquafeed e / o prede) e come indicatore della qualità dell'acqua (ad esempio, idrocarburi).
Introduzione
I metodi qui descritti riguardano sostanze che sono definite operativamente come lipidi marini. Questa definizione si basa sulla loro suscettibilità all'estrazione liquido-liquido in solventi organici non polari e fornisce un metodo conveniente per la loro separazione da altre sostanze in una matrice acquatica. La loro natura idrofoba facilita il loro isolamento dall'acqua di mare o dai campioni biologici, così come il loro arricchimento e la rimozione di sali e proteine.
La misurazione del contenuto lipidico e della sua composizione negli organismi marini è stata di grande interesse per l'ecologia della rete alimentare, la nutrizione dell'....
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Protocollo
NOTA: Per pulire bicchieri, strumenti e filtri per analisi lipidiche, lavarli 3 volte con metanolo seguito da 3 lavaggi con cloroformio o riscaldarli a 450°C per almeno 8 ore.
1. Procedura di filtrazione per i lipidi disciolti e particolati dell'acqua di mare
NOTA: La particolare frazione di interesse è definita operativamente dalla procedura di filtrazione. In questo caso la dimensione dei pori è di 1,2 μm.
- Impostare il collettore di filtrazione senza filtro e risciacquare la configurazione con acqua di mare filtrata.
- Utilizzando una pinca pulita, inserire un filtro in fibra ....
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Risultati
Essendo il settore della produzione alimentare in più rapida crescita, l'acquacoltura si sta evolvendo in termini di innovazioni tecnologiche e adattamenti per soddisfare le mutevoli esigenze. Uno di questi è ridurre la dipendenza dalla farina di pesce e dall'olio di pesce di origine selvatica, che forniscono ingredienti per mangimi per molte specie di acquacoltura. Gli oli vegetali terrestri sono stati studiati come sostituti sostenibili ed economici dell'olio di pesce negli aquafeed e il fegato è un tessuto bersaglio p.......
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Discussione
La velocità con cui il sistema TLC-FID fornisce informazioni sulla classe lipidica sinottica da piccoli campioni rende TLC-FID uno strumento in grado di selezionare campioni marini prima di intraprendere procedure analitiche più coinvolte. Tali analisi di solito richiedono il rilascio di composti componenti da estratti lipidici e la derivatizzazione per aumentare la volatilità nel caso della gascromatografia. TLC-FID combinato con GC-FID è stato trovato per essere una potente combinazione per estratti di frutti di mare e.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno interessi finanziari concorrenti.
Ringraziamenti
Questa ricerca è stata finanziata dal Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada (NSERC) numero di sovvenzioni 105379 a C.C. Parrish. La rete Core Research Equipment & Instrument Training (CREAIT) della Memorial University ha contribuito a finanziare questa pubblicazione.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Fiale da 15 ml | VWR | 66009-560 | |
| 1-esadecanolo | Sigma | 258741-1G | |
| 1-Monopalmitoil-rac-glicerolo | Sigma | M1640-1g | |
| Fiale da 2 ml | VWR | 46610-722 | |
| Filtri in fibra di vetro da 25 mm | Fisher | 09 874 32A | |
| Pipetta da 2 ml VWR | 82024-554 | ||
| Filtri in fibra di vetro da 47 mm | Fisher | 09 874 32 | |
| 5 pipette da 3/4" | Fisher | 1367820A | |
| Pipette da 9" | Fisher | 1367820C | |
| Acetone | VWR | CAAX0116-1 | |
| Agilent GC-FID 6890 | Agilent | ||
| Calcium Chloride ANHS 500gm | VWR | CACX0160-1 | |
| Tappi per fiale da 2 ml | VWR | 46610-712 | |
| cloroformio | VWR | CACX1054-1 | |
| Colesteril palmitato | Sigma | C6072-1G | |
| Chromarod S5 | Shell USA | 3252 | |
| Diclorometano | VWR | CADX0831-1 | |
| DL-a-fosfatidilcolina, dipalmotoil | Sigma | P5911-1g | |
| Etere etilico, grado ACS anidr 4L | VWR | CAEX0190-4 | |
| Gliceril tripalmitato | Sigma | T5888-100MG | |
| Hamilton Siringa 702SNR 25µ l | Sigma | 58381 | |
| Helium | Air Liquide | A0492781 | |
| Hexane | VWR | CAHX0296-1 | |
| Regolatore di idrogeno | VWR | 55850-484 | |
| Iatroscan MK6 | Shell USA | ||
| Kimwipes | Fisher | 066662 | |
| Medical Air | Air Liquide | A0464563 | |
| Guanti in nitrile | medi Fisher | 191301597C | |
| Guanti in nitrile L | VWR | CA82013-782 | |
| Azoto | Aria Liquide | A0464775 | |
| Regolatore di azoto | VWR | 55850-474 | |
| Nonadecane | Sigma | 74158-1G | |
| Acido palmitico | Sigma | P0500-10G | |
| Dosatore ripetuto | Sigma | 20943 | |
| Bicarbonato di sodio 1kg | VWR | CA97062-460 | |
| Solfato di sodio Anhy ACS 500gr | VWR | CA71008-804 | |
| Acido solforico | VWR | CASX1244-5 | |
| Nastro in teflon | Fisher | 14610120 | |
| tissue master 125 115V con omogeneizzatore da 7 mm | OMNI International | TM125-115 | |
| Serbatoio di sviluppo TLC | Shell USA | 3201 | |
| UHP idrogeno | Air Liquide | A0492788 | |
| VWR solvente repippetter | VWR | 82017-766 | |
| Timer VWR LED lampeggiante 2 canali | VWR | 89140-196 | |
| Zebron ZB-Wax GC colonna | Phenomenex | 7HM-G013-11 |
Riferimenti
- Couturier, L. I. E., et al. State of art and best practices for fatty acid analysis in aquatic sciences. ICES Journal of Marine Science. , (2020).
- Parrish, C. C. Lipids in Marine Ecosystems. ISRN Oceanography. , 604045(2013).
- Folch, J., Lees, M., Stanley, G. H. S.
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Ristampe e permessi
